전남 법성포 해안의 갯벌 시료로부터 chitinase 생 생 균주를 분리하였으며, 분리된 균주 중에서 chitin nase 생성능이 우수한 JM을 선발 동정하여 Serranasetia sp. JM으로 명명하였다. Serratia sp. JM은 nutrient 배지냐 MacConkey 배지에서 prodigiosin 색소를 생성하며, 정제 chitin이 포함된 한천 배지에서 는 chitinase 생성에 따른 clear zone 형성이 확인되 었다 Serratia sp. JM은 형태적, 생리.생화학적 특 성과 유기물 동화는 SUCCIniC, urea 및 pyruvic 산 을 제외하고는 공시 균주인 Serratia marcescens ATCC 27117과 유사하였으며, tetracyclin에 대해 서는 항생제에 대한 내성을 가지고 있었으나, kanamycin과 chloramphenicol에 대해서는 내성을 가지지 않았다. Serratia sp. JM의 chitinase 생성에 따른 최적온도와 pH는 $30^{\circ}C$ 와 7.5로 냐타났다. Serratia sp. JM은 120시간까지는 배양 시간이 증가 함에 따라 chiti-nase 생성과 pH는 점차 증가하였으 나, 배양 120시간 이후에는 chitin 분해에 따른 acetic acid의 축적에 따라 chitinase 생성과 pH는 감소 하였다.
A chitinase-producing bacterium was isolated from seashore mud around Beobseongpo in Chunmam province through the use of a selective enrichment culture. The best chitinase producing strain was isolated and identified as Serratia marcescens KY from its characteristics. For effective production of chitinase, optimum pH, temperature, and agitation speed were investigated in flask cultures. The optimum pH using Serratia marcescens KY was between pH 6 and 7 and the chitinase produced was 37.9 unit/mL. On the other hand, the optimal pH of the Serratia marcescens ATCC 27117 was 7.5, and the produced amount of chitinase was 35.2 unit/mL. The optimal temperature for chitinase production for Serratia marcescens KY and Serratia marcescens ATCC 27117 was $30^{\circ}$. The cell growth pattern at different temperature was almost identical to the chitinase production. To investigate the optimal shaking speed under optimal culture, speeds were varied in the range of 0∼300 rpm. The maximum production of chitinase was carried at 200 rpm although the cell growth was the highest at 150 rpm. It indicates that oxygen adjustment is required for the maximum chitinase production. Using optimal conditions, batch cultures for comparing Serratia marcescens KY and Serratia marcescens ATCC 27117 were carried out in a 5 L fermentor. The oxygen consumption was increased with the increase of culture. Especially, at 120 h of culture Serratia marcescens KY and Serratia marcescens ATCC 27117 produced 38.3 unit/mL, and 33.5 unit/mL, respectively.
최소 배지와 MRS 배지에 여러 퓨린 뉴클레오시드을 첨가하여 각각 호기적과 혐기적 조건하에서 배양시킨 Serratia marcescens ATCC 25419와 Lactobacillus plantarum ATCC 8014 세포 추출물에서 PNP의 비활성도를 조사한 결과 이노신은 5 mM 이상의 농도에서 Serratia PNP의 비활성도를 대조군과 비교하여 30% 정도 감소시켰으나, Lactobacillus PNP의 비활성도를 60% 이상 증가시켰다. 히포잔틴은 $0.1{\sim}0.5\;mM$의 낮은 농도에서는 Serratia PNP의 비활성도에 거의 영향을 주지 않았으나, 5 mM 이상의 농도에서는 45% 정도를 감소시켰다. 하지만 히포잔틴은 $0.1{\sim}1\;mM$의 낮은 농도에서는 Lactobacillus PNP의 비활성도를 20%, $1{\sim}15\;mM$의 농도에서는 $50{\sim}65%$ 정도 증가시켰다. 한편, 요산은 0.5 mM의 농도에서 Serratia와 Lactobacillus PNP의 비활성도를 20% 정도 증가시킨 반면, $5{\sim}10\;mM$의 농도에서 $20{\sim}25%$ 정도, 그리고 15 mM의 농도에서는 $60{\sim}80%$ 감소시켰다. 이러한 결과들로부터 5 mM 이상 농도의 이노신과 히포잔틴은 Serratia PNP의 비활성도를 30%이상 감소시킨 반면, Lactobacillus PNP의 비활성도를 60% 이상 증가시켰으며 낮은 농도(0.5 mM)의 요산은 효소의 비활성도를 증가시키고 높은 농도(15 mM)의 요산은 감소시키는 등 퓨린 뉴클레오티드 분해 대사 과정에서 요산은 Serratia marcescens와 Lactobacillus plantarum PNP 생합성의 조절 역할을 하는 것으로 사료된다.
Serratia marcescens KY와 Serratia marcescens ATCC 27117 두 균주 모두 기본 배지에 $K_2$HPO$_4$ 농도를 0.2 g/L 농도 첨가할 경우 최대 chitinase 생성을 나타냈다. 그러나 세포 성장에 따른 균체량은 기본 배지에 $K_2$PHO$_4$ 농도 0.2 g/L 이상에서는 균체량은 약간 감소한다. 1.2% colloidal chitin과 0.2 g/L의 $K_2$PHO$_4$가 포함된 기본 배지에 MgSO$_4$를 0.2-0.25 g/L를 첨가하였을 때 최대의 chitinase 생성을 보이고, 두 균주 모두 K, P, Mg 및 기타 mineral을 영양 요구 인자로서 필요한다. Colloidal chitin을 1.2% 함유하고 있는 기본 배지에 각종 탄소원의 종류에 따른 세포 성장과 chitinase 생성은 colloidal chitin만을 첨가하였을 때가 상대적으로 가장 우수하고, 탄소원을 첨가할 경우 Serratia marcescens는 모든 탄소원에서 chitinase 생성이 억제되었다. 또한 질소원에 따른 세포 성장과 chitinase 생성은 Serratia marcescens KY와 Serratia marcescens ATCC 27117 모두 tryptone이 가장 우수하였고, 2.0 g/L의 질소원 농도까지는 질소원 농도가 증가함에 따라 chitinase 생성은 증가하다가 2.0 g/L 이상의 농도에서는 질소원 농도가 증가함에 따라 chitinase 생성은 감소하였다. 이들 질소원 중 chitinase 생성은 trypotone>yeast extract > beef extract > asparagine 순서로 chitinaserk 생성되므로, Serratia marcescens는 chitinase 생성에 있어 vitamin B군과 같은 질소원을 growth factor로 요구한다.
A strain US50-3 producing water-soluble red pigment was isolated from the pond separating oil from water near the oil storage tanks. The strain US50-3 was identified as a strain of Serratia marcescens considering its morphological and physiological characteristics, and DNA G+C contents. It showed a little difference comparing to the Type strain and was considered to be another biotype strain.
경주지역의 토양으로부터 Fusarium 속 식물병원균에 길항력을 갖는 chitinase 생산성 길항미생물을 분리할 수 있었으며, 이를 분류학적으로 동정하여 본 결과 Serratia proteamaculans 3095로 동정할 수 있었다. 이 균주가 생성하는 chitinase의 생성조건을 조사한 결과 탄소원으로 colloidal chitin이 가장 좋았으며 그 최적 농도는 0.15%이었고, glucose에 의해 chitinase 생산 유도를 억제받는 효소임을 알 수 있었다. 질소원에 의한 영향은 $(NH_4)_2SO_4,\;(NH_4)Cl$, peptone 등에 의해 chitinase 생산성이 증가되었고, $(NH_4)_2SO_4$와 peptone을 각각 0.1%씩 첨가하였을 때 chitinase 생산이 가장 좋았다. 또한 시드름병균 Fusarium oxysporum을 대상으로 in vitro, in vivo pot 실험을 통해 Serratia sp. 3095의 강한 방제력을 검증할 수 있었다.
The effects of amino acids in growth media on the biosynthesis of Serratia marcescens biodegradative threonine dehydratase activity were examined. The enzyme activity was decreased by 44 and 34% by 10 mM isoleucine and valine, respectively, whereas it was increased approximately by 20% by 10 mM threonine. Among several metabolites tested, pyruvate increased the enzyme activity by 60% at 5 mM, but decreased the enzyme activity approximately by 20 to 70% above 20 mM. The enzyme activity was increased by 64% by 5 mM glyoxylate, whereas it decreased the enzyme activity approximately by 40 to 70% above 20 mM glyoxylate. The thiamine, monopyrrole derivative, also increased the enzyme activity by 84% at 50 $\mu $g/ml, but did not affected the enzyme activity above 300 $\mu $g/ml. cAMP increased the enzyme activity by 58% at 0.5 mM, but decreased the enzyme activity by 15% at 2 mM. These data suggested that the biosynthesis of Serratia marcescens biodegradative threonine dehydratase is regulated by concentrations of pyruvate, glyoxylate and cAMP.
Serratia marcescens characterized by the ability to produce red pigments inhabits various ecological niches. A strain Serratia marcescens PYU was isolated from abalone (Haliotis discus) collected at the West Sea in Korea. The isolated strain was gram-negative, motile, rods like coccus, oxidase-negative, and catalase-positive; and formed red pigment. S. marcescens PYU was grown in the presence of 0~10% (w/v) NaCl, at pH 4~9, and at $10{\sim}40^{\circ}C$. The strain PYU produced red pigment, and the extracted pigment showed antibacterial activity against Streptococcus iniae and Lactococcus garviae which has been known as an important fish pathogens. Further studies are underway to elucidate the direct relationship between the red pigment and antibacterial activity.
Secretion of Serratia marcescens nuclease by E. coli harboring pNUC4 was investigated. 29.2, 54.2 and 16.6% of total nuclease were observed in culture medium, periplasm, and cytoplasm of E. coli, respectively. To investigate the secretion mechanism of Serratia nuclease by E. coli, secretion kinetics of nuclease was examined in the presences of sodium azide, and energy metabolism inhibitor; procaine, an exoprotein processing inhibitor; and chloramphenicol, a protein synthesis inhibitor. In the presence of sodium azide, periplasmic unclease was gradually decreased and the extracellular nyclease was linearly increased according to the incubation time. Similar results were obtained in presences of procaine and chloramphenicol. From these results, we concluded that two transport processes are involved in nuclease secretion: secretion of nuclease through the inner membrane is occurred by an energy-dependent process and probably requiring precusor processing: secretion of nuclease through outer membrane does not require energy, de novo protein synthesis, and precursor processing.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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