• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권2호
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• pp.257-263
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• 1999

It is well known that discard of seminal plasma from the semen and separation of motile sperm should be preceded before insemination for IUI or IVF. Till now, more than ten kinds of semen treatment methods have been developed. Of those, swim-up and Percoll methods have been used widely in ART laboratories as a routine semen treatment methods because of its advantages. However, there are reports that Percoll can make a genetic trouble because of its chemical structure and therefore the necessity has been arisen to substitute Percoll for other equivalent materials. This study was performed to evaluate the effects of three different sperm preparation methods (swim-up, Percoll and Sil-Select) on sperm motility, sperm recovery rate and fertilization rate. Also, the feasibility of using Sil-Select instead of Percoll in ART was evaluated. Each semen samples were divided into three fractions and motile sperm were recovered by swim-up, Percoll and Sil-Select gradient centrifugation methods. Normal and sub-normal criteria of fifteen semen samples and seventeen IVF cycles were included in these study. As results, no significant difference was found in sperm recovery rate in normal semen treated by a Swim-up, Percoll and Sil-Select method ($13.2{\times}10^6,\;17.5{\times}10^6\;and\;17.7{\times}10^6$ respectively). The initial sperm motility was 61.9% and this increased to 87.1%, 92.6% and 89.5% through Swim-up, Percoll and Sil-Select treatment, respectively. Higher motility was observed in Percoll and Sil-Select treated groups (81.5%, 79.2%, respectively) than swim-up group (66.8%) after incubation for 24hrs. In sub-normal group, sperm recovery rates were higher in Sil-Select group $(2.9{\times}10^6)$ than Percoll gradients group $(1.8{\times}10^6)$. In IVF cycles, the outcomes of fertilization using sperm treated by swim-up and Sil-Select group were similar (82.2%, 79.7% respectively). In conclusion, our results indicate that Sil-Select can be used as a substitute material for sperm preparation instead of Percoll.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제17권2호
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• pp.164-167
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• 2004

This study was carried out to investigate in vitro fertilization and development of in vitro matured pig oocytes inseminated with the Duroc boar sperm by different sperm washing media after thawing of the 5 ml frozen straws. Immature follicular oocytes (30-40) were transferred into each well of a Nunc 4-well multidish containing $500{\mu}l$ mTCM199 maturation medium. The sperm rich portion of ejaculates was collected into a 250 ml insulated vacuum bottle and gradually cooled 22 to $24^{\circ}C$ over a 2 h period. Semen was centrifuged at 800 g for 10 min and the seminal plasma discarded. Sperm were esuspended in a lactose-egg yolk and N-acetyl-Dglucosamine (LEN) diluent to contain $1{\times}10^{9}$ sperm/ml and cooled to $5^{\circ}C$ over a 2 h period. Immediately before freezing, semen was rediluted with an equal volume of LEN+4% glycerol and packed into 5 ml straws. After thawing of the 5 ml straw, the 5 ml semen was diluted with 20 ml Beltsville thawing solution (BTS) at room temperature. Oocytes were inseminated with untreated (unwashed and nonpreincubated) or treated sperm (washed two times in BTS, mTLP-PVA and mTBM media, respectively and nonpreincubated) with $2{\times}10^{7}$ sperm concentration. Oocytes were coincubated for 6 h in $500{\mu}l$ mTBM fertilization. At 6 h after IVF, oocytes were transferred into $500{\mu}l$ NCSU-23 culture medium for further culture of 6 h. Sperm penetration, polyspermy and male pronuclear formation of oocytes at 12 h after IVF and developmental ability of oocytes at 48 h after IVF were evaluated. Sperm penetration rate, male pronuclear formation and rate of cleaved embryos were higher in the BTS, mTLP-PVA and mTBM treatments than the unwashed treatment (p<0.05). The rate of blastocysts from the cleaved oocytes (2-4 cell stage) were higher in the mTLP-PVA treatment than in the unwashed, BTS and mTBM treatments. In conclusion, we recommend the washing of frozen-thawed sperm with mTLP-PVA medium before in vitro fertilization of oocytes in mTBM medium.

• 한국수산과학회지
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• 제30권5호
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• pp.809-815
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• 1997

문치가자미의 성숙한 수컷 15마리를 재료로 하여 삼투질농도와 $Ca^{2+}$이 정자의 운동성에 미치는 영향을 파악하였다. 문치가자미 정자는 전해질 및 비전해질 용액에서 정장의 삼투질농도인 $351{\pm}23.4mOsm/kg$ 이하의 저장액에서 운동이 억제되었으나, 삼투질농도 $466\~l,185mOsm/kg$에서는 활발한 운동을 보였으며, 1,698 mOsm/kg 이상에서 다시 운동이 중지되었다. 인공해수를 희석액으로 하여 pH를 달리하였을 때, 정자는 $pH\;5\~9$에서 운동지수 $3.75\~4.00$로 운동성이 활발하였으나, pH 4에서는 운동지수 2.50로 미약하였다. $Ca^{2+}$의 특이 chelator인 EGTA가 포함된 $Ca^{2+}$ 결여 인공해수 (tris-HCl, pH 7.4)에 정액을 희석하였을 때, EGTA의 농도 증가에 따라 정자 운동성이 낮아졌으며, 3mM 이상의 농도에서는 완전히 정지되었다. 운동이 억제된 정자에 $Ca^{2+}$을 서서히 첨가한 결과, $Ca^{2+}$ 농도 0.25mM 이상부터 운동이 재개되었다. 또한 인공해수속의 정자는 calmodulin 억제제인 TFP의 농도의 증가에 따라 운동성이 감소하여 0.5mM에서 완전히 정지하였다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제52권5호
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• pp.407-412
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• 2010

본 연구는 통마늘분말의 급여가 수퇘지의 정액 성상과 혈중 항산 화물 농도에 미치는 영향을 구명하기 위해 12개월령의 듀록종 수퇘지 9두를 공시하여 시험사료만을 급여한 대조구(4두)와 시험사료에 0.3% 통마늘분말을 첨가하여 급여한 실험구(5두)를 이용해 13주간 수행되었다. 통마늘분말의 급여가 수퇘지의 정액생산량과 정자농도에 미치는 영향을 8주간에 걸쳐 평가한 결과, 정액생산량에서는 통마늘분말 급여 여부에 따른 차이를 보이지 않았으나, 수퇘지 정액의 평균 총정자수는 0~4주의 평균 총정자수는 통마늘분말 급여여부에 상관없이 차이가 없었다. 그러나, 5~8주에 채취된 정액의 평균 총정자수는 통마늘분말을 급여한 실험구가 대조구에 비해 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05). 통마늘분말 급여가 수퇘지의 성욕에 미치는 영향을 알아보기 연속 사정횟수와 전체 사출정액에 대한 총정자수를 조사한 결과, 통마늘분말을 급여한 실험구가 대조구에 비해 사정횟수와 총정자수가 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05). 수퇘지에 대한 통마늘분말의 급여가 정장 및 혈장 내 polyphenol 농도에 미치는 영향에서는 정장 내에서의 polyphenol 농도는 통마늘분말 급여여부에 상관없이 차이를 보이지 않았다. 그러나, 혈장 내에서의 polyphenol 농도는 9주, 12주 및 13주차에 통마늘분말을 급여한 실험구가 대조구에 비해 유의적으로 높은 수치를 나타내었다(P<0.05). 본 실험의 결과를 종합하면, 정액채취용 수퇘지에 대한 통마늘분말의 급여는 성욕의 향상에 영향을 미쳐 정액채취빈도와 정액내 총 정자수를 증가시키고, 혈액 내 항산화물 농도를 높이는 것으로 나타나, 통마늘분말이 정액채취용 수퇘지의 성적을 향상시키는데 사료적 가치가 있는 것으로 사료된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제25권3호
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• pp.269-275
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• 2001

본 연구는 소형 개의 동결정액을 개발하여 인공수정에 이용하고자 제 2차 분획정액을 생리적 식염수와 Iris-buffer액으로 희석하고 원심분리에 의해 정장성분을 제거한 RSP-5 및 RSP-T 정액의 일반성상과 단기보존 및 동결보존시의 생존성에 대해 조사하였다. 1, 제 1분획의 정액량은 0.65$\pm$0.09 $m\ell$, 정자농도는 4.52$\pm$0.35$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 15,64$\pm$3.85%, 기형정자수는 84.36$\pm$0.62%였으며, 제 2분획의 정액량은 1.25$\pm$0.20 $m\ell$, 정자농도는 3.35$\pm$0.48$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 96.25$\pm$4.65%, 기형정자수는 3.75$\pm$0.46%였으며, 제 3분획의 정액량은 1.45$\pm$0.21 $m\ell$, 정자농도는 3.85$\pm$0.52$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 92.82$\pm$4.24%, 기형정자수는 4.66$\pm$0.58%였다. 2. 제 2분획 정액의 RSP-5군의 정자농도는 4.82$\pm$0.36$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 90.10$\pm$3.42%, 기형정자수는 9.90$\pm$0.68%였으며, RSP-T군의 정자농도는 4.55$\pm$0.45$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력은 93.25$\pm$3.85%, 기형정자수는 6.75$\pm$0.58%였다. 이는 대조군의 정자농도 5.45$\pm$0.82$\times$$10^{6}$cells/$m\ell$, 활력 95.55$\pm$4.65%, 기형정자수 4.45$\pm$0.45%에 비해 높게 나타났다. 3. 제 2분획 정액을 RSP-5와 RSP-T로 처리한 정액을 4$^{\circ}C$에서 보존했을 때 각각 1~72시간(97.54~6.25%)과 1~100시간(97.40~5.62%)에서 생존성이 유지되었고, 38$^{\circ}C$에서 보존했을 때 1~40시간(96.45~7.45%)과 1~50시간(95.60~B.65%)에서 생존성이 유지되었다. 이는 무처리 대조군의 1~50시간(97.24~4.82%)과 1~30시간(95.52~5.55%)에 비해 생존성이 높게 나타났다. 4. 제 2분획 정액을 처리한 RSP-5군의 정액을 완만 및 초급속 동결후 융해했을 때 생존율은 각각 67.3$\pm$4.45%와 46.4$\pm$3.84%였으며, RSP-T군 정액은 58.8$\pm$4.46%와 74.4$\pm$4.20%로서 대조군의 8.5$\pm$2.12%에 비해 높게 나타났다.