• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권2호
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• pp.156-162
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• 2016

본 연구에서는 신규 해양성 한천분해균을 분리하고, 이 균주가 생성하는 한천분해효소의 특성을 조사하였다. 경상남도 남해군 미조면 연안에서 채취한 해수를 Marine agar 2216 배지에 도말하여 한천분해세균을 선별하였다. 선택된 한천분해균주는 16S rDNA 염기서열분석을 통해 Maribacter 속 세균과 99% 유사하여 Maribacter sp. SH-1으로 명명하였다. 세포외로 분비되는 agarase는 Maribacter sp. SH-1 균주 배양액에서 획득하였으며, 이를 이용하여 특성을 조사하였다. Maribacter sp. SH-1 균주의 한천분해효소는 20, 30, 40, 50 및 60℃ 에서 각각 56, 62, 94, 100, 8%의 상대활성을 나타냈으며, pH 5, 6, 7 및 8에서 각각 15, 100, 60, 21%의 상대활성을 나타냈다. 세포외 agarase는 50℃ , pH 6인 20 mM Tris-HCl buffer를 사용하는 조건에서 최대활성(231 units/l)을 보였다. 한천이 sol 상태로 존재하는 50℃에서 최적활성을 보여 이 효소는 응용 가능성이 높다고 할 것이다. 효소 활성은 20, 30 및 40℃에서 30분 동안 열처리하였을 때 약 90% 이상의 상대활성을 보였다. TLC 분석 결과, Maribacter sp. SH-1 균주의 한천분해효소는 한천올리고당인 neoagarohexaose (34.8%), neoagarotetraose (52.2%) 및 neoagarobiose (13.0%)를 생성하는 것으로 보아 β-agarase로 확인되었다. 따라서 Maribacter sp. SH-1 균주와이 균주가 생산하는 β-agarase는 보습효과, 미백효과, 세균성장 억제 혹은 전분노화 방지 등의 기능을 가지는 한천올리고당의 생산에 유용할 것으로 기대된다.

• 대한수의학회지
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• 제47권3호
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• pp.291-298
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• 2007

Olive flounder, Paralichthys olivaceus is one of the most important cultured fish in Korea, its farming has been negatively impacted by viral, bacterial and parasitic diseases. Streptococcal infection was considered as a serious problem because of significant economic losses in olive flounder farm industry. The development and evaluation of vaccine for protection against infection by this agent were required. We evaluated the safety and efficacy of ${\beta}$-hemolytic Streptococcus (S.) iniae vaccine on olive flounder Three hundreds of flounders (weight $119.8{\pm}20.7g$, body length $22.6{\pm}1.4cm$) were reared in 0.5 tons aquaria in land-marine tank system. Seawater was provided from the sea of Inchon in Korea, and water temperature was set to $22^{\circ}C$ and $25^{\circ}C$ in the vaccination and challenge test, respectively. We used the formalin-inactivated ${\beta}$-hemolytic S. iniae (F2K) vaccine (M VAC INIAE; Kyoritsu seiyaku, Japan) originated in Japan. The vaccine was intraperitoneally administered to fish. Both of vaccinated group and control group were challenged with intraperitoneally injection by virulent S. iniae SI-36 isolates with $1.0{\times}10^7CFU/fish$ at 3 weeks after vaccination. Difference on mortality of control and vaccinated group (90.0 and 15.0%, 76.5 and 8.0% respectively) at two trials were found significant (p<0.05), and relative percent survival were 83.4% and 89.5%, respectively. The dead fishes were showed dark pigmentation of skin, abdominal extension, hemorrhagic ascites, and liver necrosis, and isolated the S. iniae strain from ascites, liver and kidney. We confirmed the safety and efficacy of ${\beta}$-hemolytic S. iniae vaccine by determinations of the optimal management condition and artificial challenge test in olive flounder.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제22권9호
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• pp.1245-1252
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• 2012

Acinetobacter venetians V28 was isolated from the intestine of righteye flounder, Poecilopsetta plinthus caught in Vietnam seawater, and the esterase gene was cloned using a shotgun method. The amino acid sequence deduced from the nucleotide sequence (1,017 bp) corresponded to a protein of 338 amino acid residues with a molecular weight of 37,186. The esterase had 87% and 72% identities with the lipases of A. junii SH205 and A. calcoaceticus RUH2202, respectively. The esterase contained a putative leader sequence, as well as the conserved catalytic triad (Ser, His, Asp), consensus pentapeptide GXSXG, and oxyanion hole sequence (HG). The protein from the strain V28 was produced in both a soluble and an insoluble form when the Escherichia coli cells harboring the gene were cultured at $18^{\circ}C$. The maximal activity of the purified enzyme was observed at a temperature of $40^{\circ}C$ and pH 9.0 using p-NP-caprylate as substrate; however, relative activity still reached to 70% even at $5^{\circ}C$ with an activation energy of 3.36 kcal/mol, which indicated that it was a cold-adapted enzyme. The enzyme was a nonmetallo-protein and was active against p-nitrophenyl esters of $C_4$, $C_8$, and $C_{14}$. Remarkably, this enzyme retained much of its activity in the presence of commercial detergents and organic solvents. This cold-adapted esterase will be applicable as catalysts for reaction in the presence of organic solvents and detergents.

• 미생물학회지
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• 제51권4호
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• pp.364-373
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• 2015

알긴산의 응용을 위하여 인천지역에서 수집한 다양한 패류와 해수로부터 알긴산 분해효소 활성이 우수한 103개의 균주를 분리하고 그 중 M1-2-1, M6-1, C8-15 등 분해능이 가장 우수한 3균주를 선발하여 그 특성을 분석하였다. 이들은 모두 그람 음성 간균이었고, 운동성이 있는 호염성 세균이었다. 또한 생리 생화학적 특성 분석과 16S rRNA 유전자의 염기서열 분석으로 M1-2-1과 M6-1은 Pseudoalteromonas 속, C8-15은 Vibrio 속에 속하는 세균으로 동정되었다. 이들의 알긴산 분해효소 활성은 알긴산이 유일한 탄소원인 APY 배지에 접종하여 $25^{\circ}C$에서 6-8시간 배양했을 때 최대로 나타났고, NaCl을 가했을 때 생장 및 효소 활성 모두 증진되었다. 이 분리 균주들의 알긴산 분해 조효소들은 $45^{\circ}C$와 pH 7.0-8.0에서 가장 높은 활성을 나타냈으며, Pseudoalteromonas sp. M1-2-1과 M6-1 균주는 각각 2.7232 g/L와 1.976 g/L의 환원당 생성능을 보여, 산업적으로 활용 가능성이 높은 것으로 사료되었다.

• 한국패류학회지
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• 제19권1호
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• pp.19-24
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• 2003

중국에서 이식하여 어미패로 양성한 해만가리비를 수온 17.1-23.2$^{\circ}C$로 44 일간 Isochrysis galbana 등 5종의 먹이생물을 혼합시켜 공급하면서 성숙을 유도하여, 1997 년 1월 29일 및 31일 2회에 걸쳐 간출과 수온 자극을 가하여 총 4,532만개의 수정란 (평균 52 ${\mu}m$) 을 채란하였다. 난 발생 단계를 조사한 결과, D형 유생의 크기는 평균 77.5 × 63.8 ${\mu}m$이었고, 부착기 유생은 191.8 × 181.2 ${\mu}m$의 크기였으며, 부착기 유생은 이 크기에서 파판에 부착하여 치패로 발달하였다. 이 치패는 2월 14일부터 5월 7일까지 수온 22.8-26.3$^{\circ}C$, 염분 31.0-34.4에서 실내 사육한 결과, 평균 각장 3.04 mm로 성장하였다. 비단가리비의 경우는, 부착기의 부착유생들은 채묘기(collector) 에서 떨어지면 폐사하게 되는데, 이것은 Argopecten balloti에서 나타나는 바와 같이, 족사에 의한 부착기간이 짧아서가 아니라 부착유생들이 각기 소수의 족사를 가지기 때문에 채묘기에 대한 부착력이 약하여 부착유생의 생존율이 비교적 낮았던 것으로 사료된다.

• 한국패류학회지
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• 제27권3호
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• pp.247-252
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• 2011

감마선 (Co-60)의 처리 유무에 따른 진주의 영향을 연구하고자 진주 핵의 색 변화를 분석하였다. 담수산 조개로 만든 진주 핵에 감마선 (Co-60) 을 조사하게 되면, 진주 핵의 색은 조사선량에 따라 갈색에서 흑갈색 내지는 검은 회색으로 변한다. 본 연구에서는 감마선 (Co-60) 을 조사하지 않은 진주 핵 2개와 선량별로 조사된 4종류의 진주 핵 8개를 분석 재료로 사용하였다. UV-vis에서는 선량별로, 육안으로 확인되는 진주 핵의 컬러 변화 분석을 한 결과 선량이 증가함에 따라 비례적으로 반사도가 낮아짐을 확인하였고, X-선 회절분석에서는 감마선 (Co-60) 의 조사선량이 증가하여도 진주 핵의 결정구조가 변하는 것은 관찰되지 않았고 결정성 (crystallity) 이 높아지는 것으로 측정되었다. 또한 전자스핀공명분석으로는 처음으로 진주 핵의 감마선 (Co-60) 조사여부를 증명하였다. 감마선 (Co-60) 이 조사되지 않은 천연 핵에서는 대칭적인 ESR 신호를 확인할 수 있었고, 감마선 (Co-60)이 조사된 진주 핵에서는 조사선량이 증가할수록 특징적 비대칭의 스펙트럼과 g-value를 갖고 있어 천연의 핵과 조사된 핵의 차이를 구별할 수 있었다. 또한 감마선 (Co-60) 조사선량이 증가할수록 비례적으로 비대칭성이 높아지는 것을 증명하였다. 따라서 감마선 (Co-60) 처리 유무에 따른 진주의 색 변화를 연구하기 위해서는 진주 핵의 색 변화에 대한 원인 규명 및 분석이 선행되어야 한다고 사료된다.

• 한국어병학회지
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• 제30권2호
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• pp.79-88
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• 2017

현재 양식장에서는 Aeromonad를 비롯한 다양한 병원균에 의한 전염병으로 인해 많은 경제적 손실을 겪고 있다. 연어과 어류뿐만 아니라 담수 및 해수어류에도 치명적인 감염을 야기하는 Aeromonas 종은 적어도 26종 이상이 보고되어왔으며, 전염병을 유발하는 유비쿼터스 세균이다. Aeromonas 종을 확인하기 위해 16S rDNA 및 하우스 키핑 유전자의 핵산 서열을 기반으로 한 분자생물학적 기술이 사용될 수 있다. 본 연구에서 Aeromonas 종은 강원도 16개 양식장의 연어과 어류로부터 분리되었으며 Aeromonad의 16S rDNA와 하우스 키핑 유전자의 서열, 즉 RNA polymerase sigma factor ${\sigma}^{70}$ (rpoD) 또는 DNA gyrase subunit B (gyrB)를 기반으로 계통 발생 학적으로 동정했다. 그 결과 대서양 연어 (Salmo salar), 은연어 (Oncorhynchus keta), 산천어 (Oncorhynchus masou masou), 무지개송어 (Oncorhynchus mykiss)에서 96 개의 균주가 수집되었으며, 36개의 균주가 16S rDNA 분석에 의해 Aeromonas 속으로 확인되었다. 확인된 Aeromonas 속 균주는 rpoD 또는 gyrB 유전자 서열을 기반으로 추가 분석되어 Aeromonas salmonicida (24 균주), A. sobria (10 균주), A. media (1 균주) 및 A. popoffii (1 균주)로 검출되었으며, 이 것은 Aeromonas salmonicida가 강원도의 연어과 어류에서 주요 감염균임을 나타낸다. 또 하우스 키핑 유전자의 서열에 기초한 Aeromonas 종의 계통발생학적 동정은 16S rDNA 서열보다 더 정확하다는 것이 또한 증명되었다.

• 한국수산과학회지
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• 제29권4호
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• pp.474-480
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• 1996

순환여과 사육시스템에서 사육한 감성돔, Acanthopagrus schlegeli을 사용하여 배정시기에 따른 정액의 특성을 조사하였다. 사육한 감성돔의 배정기간은 1995년 4월 11일부터 6월 4일까지로 7주간이었다. 이 기간 동안 어체중 100 g당 채취된 정액량은 평균 $0.70{\pm}0.33ml$였으며, 배정기의 중반인 5월 2일부터 6월 4일까지는 비교적 높게 유지되었다. 배정기간 동안 날짜별 어체중 100g당 채정된 정자의 총 수는 배정기의 중반으로 갈수록 증가하여 5월 9일에 $3.32{\times}10^{10}$ 마리로 가장 많았다가 급격히 감소하였다. 정액 1 ml당 정자농도는 배정기 중반인 5월 2일에 가장 낮았다가 다시 증가하는 변화 경향을 보였다. 그러나 spermatocrit는 배정기간 동안 $94.8\~98.2$로 큰 변화가 없었다. 총 단백질, 총 지질, glucose 및 Na 농도는 정자나 정장에 비해 혈장이 모두 높은 값을 보였으나, K 농도는 혈장에 비해 정자나 정장에서 높은 값을 보였다. 정자와 정장에서의 총 단백질, 총 지질 및 K 농도는 정장에 비해 정자에서 높았으나, glucose 및 Na 농도는 반대로 정장에서 더 높았다. 정자와 정장의 glucose 농도는 4월과 6월에 비해 채취 정자의 총 수가 가장 많았던 5월에 각각 $4.2{\pm}2.7mg/100ml$ 와 $13.7{\pm}8.5mg/100ml$로 가장 높게 나타났다.

• 수산해양교육연구
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• 제26권1호
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• pp.72-80
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• 2014

Oxygen consumption (OC) of male black porgy Acanthopagrus schlegelii reared in freshwater (BFW) and seawater (BSW) during the reproductive period was $165.4{\pm}11.0$, $77.6{\pm}8.0$ mg $O_2/kg/h$ at $15^{\circ}C$, $186.2{\pm}13.1$, $133.4{\pm}6.7$ mg $O_2/kg/h$ at $20^{\circ}C$ and $267.9{\pm}19.1$, $198.6{\pm}8.3$ mg $O_2/kg/h$ at $25^{\circ}C$, respectively. During the non-reproductive period, it was shown as $174.0{\pm}7.0$, $85.6{\pm}5.5$ mg $O_2/kg/h$ at $15^{\circ}C$, $200.6{\pm}11.1$, $119.2{\pm}8.7$ mg $O_2/kg/h$ at $20^{\circ}C$ and $271.1{\pm}7.5$, $194.7{\pm}16.7$ mg $O_2/kg/h$ at $25^{\circ}C$, respectively. Thus, OC of BFW was higher than BSW both for non-reproductive and reproductive period. Also, OC increased in proportion to the rise in water temperature, and there was no difference of OC between BFW and BSW at each water temperature during the reproductive or non-reproductive period. OC of BFW and BSW showed clear circadian rhythms on photic conditions of reproductive and non-reproductive period, and the fish consumed more oxygen during the dark phase than for the light phase. In particular, OC of BFW during the reproductive period increased more sharply compared to non-reproductive period when the increase of water temperature was accompanied by the shift from dark to light phase. This implies that they react to the light more sensitively for reproductive period than for non-reproductive period.

• 한국어병학회지
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• 제28권1호
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• pp.27-35
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• 2015

Viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV)는 세계적으로 담수와 해산어에 심각한 경제적 손실을 야기시키는 주요바이러스이다. 이매패류는 감염어로부터 해수로 방출된 바이러스를 여과섭식작용을 통해 축적하는 것으로 알려져 있어 carrier로써의 가능성이 보고된 바 있으므로. 본 연구에서는 이를 확인하기 위해 국내 어류 양식장 주변에 서식하는 참굴(Crassotrea gigas)과 담치(Mytilus edulis)를 샘플링하였고, RT-PCR법을 통해 바이러스를 검출하여 패류 내 VHSV존재를 확인하였다. 기존 병성감정기관에서 사용하는 primer로는 IVa genotype만을 검출할 수가 있었기 때문에 Glycoprotein(G) gene의 conserved region에 대한 primer를 제작하여 VHSV의 4가지 타입 모두 검출할 수 있게 하였고 이를 본 연구에 사용하였다. 총 84개 중 22개의 시료가 nested PCR을 통해 양성으로 확인되었고, 이 중 6개의 양성시료를 시퀀싱하여 유전학적 분석을 실시하였다. 그 결과 국내 여러 지역의 패류에서 검출된 VHSV는 모두 IVa genotype으로 아주 제한적인 결과를 보여주었으며, 이는 국내 어류에게 질병을 일으키는 VHSV의 타입은 IVa genotype이라는 이전의 보고와 상응하는 결과를 나타냈다고 할 수 있다. 결론적으로 본 연구에서는 양식장 주변에 서식하는 이매패류의 여과섭식작용으로 인한 축적되는 바이러스로 인한 전염가능성과 패류 내 존재하는 바이러스와 어류에서 질병을 발생시키는 바이러스와의 상호관계를 조사하였으며, 향후 다른 genotype의 유입 및 검출을 위한 연구는 계속적으로 필요하다고 생각된다.