Salmonella typhi is frequent causes of foodborne illness and its detection is important for monitoring disease progression. In this study, by using general PCR and novel LAMP (Loop Mediated Isothermal Amplification) assay, we evaluated the usefulness of LAMP assay for detection of Salmonella typhi. In this LAMP assay, forward inner primer (FIP) and back inner primer (BIP) was specially designed for recognizing target invA gene. Target DNA was amplified and visualized as ladder-like pattern of bands on agarose gel within 60 min under isothermal conditions at $65^{\circ}C$. When the sensitivity and reproducibility of LAMP were compared to general PCR, there was no difference of reproducibility but sensitivity of LAMP assay was more efficient than PCR (the detection limit of LAMP assay was 30 fg, while the PCR assay was 3 pg). These results indicate that the LAMP assay is a potential and valuable means for detection of Salmonella typhi, especially for its rapidity, simplicity and low cost.
장티푸스는 Salmonella typhi 에 의해 유발되는 장감염성 질환으로 사람과 동물에 공통되는 질병이다. 본 연구에서는 기 보고된Salmonella typhi KNH100의 염색체 DNA로부 터 방향족 아미노산의 생합성에 관여하는 효소인 3-dehydroquinate hydratase(3- dehydroquinate)를 암호화하는 aroD 유전자를 포함하는 약 3.2 kb의 Sal I 절편을 pSAL62 이라 명명하였다. 클로닝된 재조합 plasmid인 pSAL61에는 ATG 개시코돈과 TGA 종결코돈 을 포함하는 759 염기로 구성된 aroD 유전자가 위치하고 있었다. 또한 S. typhi Ty2, Shigella dysenteriae, 그리고 Escherichia coli 등 다른 장내 세균의 aroD 유전자와 상동성을 비교하여 본 결과 각각 90%, 72.7% 그리고 73%의 상동성을 나타내었다.
오랜 기간 동안의 연구에도 불구하고 사람에 특이적으로 장티푸스를 유발하는 S. typhi는 실험동물을 대상으로 하는 감염모델이 확립되어 있지 않기 때문에 S. typhi의 병원성 유발기작에 관한 정보는 부족하다. S. typhi Ty2 균주는 최소배지에서 시스테인의 영양요구성을 지닌다. 본 연구에서는 시스테인 영양요구성이, S. typhi Ty2 균주가 실험동물에서 균체형성을 하는데 어떤 영향을 미치는지를 조사하기 위해 시스테인 영양요구성을 상보할 수 있는 유전자를 찾고자 하였다. S. typhimurium의 genomic library로 형질전환된 S. typhi 균들 중 시스테인을 함유하지 않은 최소배지에서 생육을 하는 3개의 형질전환 균주를 선별하였으며, 이들 중 2개는 S. typhi의 시스테인 영양요구성을 아주 약하게 상보하였고 하나는 명확하게 시스테인의 영양요구성을 상보하였다. 이 클론에 포함되어져 있는 3개의 ORF의 시스테인 영양요구성을 분석한 결과, STM1490을 가진 클론이 S. typhi의 시스테인 영양요구성을 상보하였다. 비록 S. typhi에도 STM1490에 해당하는 유전자가 존재하지만 S. typhimurium의 STM1490에 해당하는 ORF와 비교하였을 때 2개의 아미노산 잔기가 서로 달랐다. 이들의 차이가 시스테인 영양요구성을 보이는 것은 아닌지 확인하기 위해 Overlapping PCR을 통해 S. typhimurium의 STM1490 아미노산(H229Y, C246W)을 치환하였다. 아미노산을 바꾼 돌연변이체도 역시 시스테인 영양요구성을 상보할 수 있어서 아미노산의 차이는 아닌 것을 확인되었으므로 그 외의 다른 인자들이 영양요구성에 관여하는 것으로 추정되었고 후속연구에서 그인자를 찾을 수 있을 것으로 생각된다.
장티푸스는 Salmonella typhi에 의해 유발되는 장감염성 질환으로 사람과 동물에 공통되는 질병이다. 본 연구에서는 국립보건원과 공동연구를 수행하여 한국형 장티푸스 유발균인 S. typhi KNIH100을 분리하였다. 분리된 S. typhi KNIH100의 염색체 DNA로부터 방향족 아미노산의 생합성에 관여하는 효소인 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthetase를 암호화하는 aroA 유전자를 포함하는 약 5.0 kb의 SalI절편을 pBluescriptII SK(+) vector와 aroA 돌연변이주인 E. coli CGSC2829를 이용하여 클로닝하였다. 그리고 이 클론을 pSAL80이라 명명하였다. 클로닝된 재조합 plasmid인 pSAL80에는 ATG 개시코돈과 TGA 종결코돈을 포함하는 1,284 염기로 구성된 aroA 유전자가 위치하고 있었으며, 다른 장내세균과 마찬가지로 serC와 하나의 오페론을 구성하고 있음을 밝혔다. 또한 S. typhi Ty2, S. typhimurium, 그리고 E. coli 등 다른 장내세균의 aroA 유전자와 상동성을 비교하여 본 결과 각각 99%, 95%, 77%의 상동성을 나타내었다.
In order to investigate the effect of gamma radiation on Salmonella typhi, Ty2, the components of amino acids, proteins, carbohydrates and lipids in irradiated cells were compared with those in unirradiated control cells respectively. The results obtained were as follows ; 1) The inactivation curves of Salmonella typhi with $Co^{60}$ .gamma.-ray irradiation were exponential over a wide range to the irradiated doses. 2) Dose for the inactivation factor of $10^8$ was 94.0 Krad in physiological saline or in phosphate buffered saline, 104.2 Krad in nutrient broth, 220.4Krad in frozen state, 552.0 Krad in dried state, 88.3 Krad in the abundance of oxygen and 188.0 Krad in the deficience of oxygen, respectively. 3) Five consecutive irradiation of Salmonella typhi suspension at the dose of 90 Krad gave no additional increase in resistance. 4) Even at the smallest dose of 500 Krad, compositions of amino acids, proteins, carbohydrates, and lipids were more or less decreased and the distinct banding patterns were also lost possibly due to degradation of the protein molecules.
The objective of this study was to evaluate the inhibitory activity of natural products, against growth of Escherichia coli (ATCC 25922) and Salmonella typhimurium (KCCM 11862). Chitosan, epigallocatechin gallate (EGCG), and garlic were used as natural bioactives for antibacterial activity. The testing method was carried out according to the disk diffusion method. All of chitosan, EGCG, and garlic showed inhibitory effect against the growth of E. coli and Salmonella typhi. To evaluate the antibacterial activity of natural products during storage, chicken skins were inoculated with $10^6$ of E. coli or Salmonella typhi. The inoculated chicken skins, treated with 0.5, 1, or 2% natural bioactives, were stored during 8 day at $4^{\circ}C$. The numbers of microorganisms were measured at 8 day. Both chitosan and EGCG showed significant decrease in the number of E. coli and Salmonella typhi in dose dependent manner (P < 0.05). These results suggest that natural bioactives such as chitosan, EGCG may be possible to be used as antimicrobial agents for the improvement of food safety.
Porin proteins of Gram-negative bacteria are outer membrane proteins that act as receptors for bacteriophages and are involved in a variety of functions like solute transport, pathogenesis, and immunity. Salmonella enterica serovar Typhi (S. Typhi), a Gram-negative bacterium, is the causative agent of typhoid fever. Porins of S. Typhi have been shown to have a potential role in diagnostics and vaccination. In the present study, the major outer membrane proteins OmpF and OmpC from S. Typhi were cloned in pQE30UA vector and expressed in E. coli. The immunogenic nature of the recombinant porin proteins were evaluated by ELISA by raising hyperimmune sera in Swiss Albino mice with three different adjuvants (i.e., Freund's adjuvant and two human-compatible adjuvants like montanide and aluminium hydroxide gel) and proved to be immunogenic. The recombinant OmpF and OmpC generated in this work may be used for further studies for vaccination and diagnostics.
A total of 79 Salmonella spp. were isolated from Pusan area in 2000. The serotypes of 79 Salmonella isolates were classified as 42 strains of S. typhi(53.1%), 24 strains of S. enteritidis(30.4%), 9 strains of S. montevideo(11.4%), 2 strains of S. typhimurium(2.5%), 1 strain of S. infantis(1.3%) and 1 strain of S. indiana(1.3%) strains(16.5%) of Salmonella sp. were isolated at May July, respectively. The isolates of S. typhi were sensitive to most sntibiotics except streptomycin. All isolates of S. typhi were especially sensitive to tobramycin, gentamicin, colistin, kanamycin, samikacin, sulfamethozazole/ trimethoprim, cefriaxone, ceftazdime, cifrofloxacin, cefoxitin and cefotaxime. Isolates of S. enteritidis wer presented higher resistance than isolates of S. typhi. Twenty-four strains of S. enteritidis were sensitive to kanamycin, amikacin cifrofloxacin, cefoxitin and cefotaxime, however 13 strains(54.2%) of S. enteritidis were resistant to carbenicillin, ampicillin and ticarcillin. Nine strains of S. montevideo were sensitive to most antibiotics except carbenicillin and streptomycin. Each 1 stain of S. indiana and S. infantis was sensitive to most antibiotics used in this study except streptomycin. Three kinds of resistant pattern (CB, SM, TE, AM, TC). In the case of S. enteritidis isolates, 9 kinds resistant pattern were detected. Most frequent resistant pattern of S. enteritidis isolates was CB, AM, TC type(16.7%)
1974년도(年度) 1년간(年間) 각시도(各市道) 위생시험소(衛生試驗所)와 보건소(保健所) 등(等)에서 검사(檢査) 의뢰된 검체(檢體) 1504건중(件中)에서 717주(株)의 Salmonella 균속(菌屬)을 분리(分離) 동정(同定)하였다. 동정(同定)된 717주중(株中)에서 Salmonella Typhi가 698주(株)로 대부분을 차지하고 있었으며 그 외(外)의 Salmonella 균주(菌株)가 19주(株)이 었는데 이들을 seretype별(別)로 나누어 보면 다음과 같다. Salmonella Group A S. parathyphi A 7 주(株) Salmonella Group B S. paratyphi B 1 주(株) S. typhimurium 6 주(株) Salmonella Group C S. thompson 1 주(株) Salmonella Group D S. typhi 698 주(株) S. enteritidis 4 주(株) 항생물질(抗生物質)에 대(對)한 감수성시험(感受性試驗) 결과(結果) ampicillin에 대(對)한 감수성균(感愛性菌)이 99.6%이었고 chloramphenicol에 대(對)한 감수성균(感受性菌)이 93.4%이었으며 gentamycin에 대(對)하여서는 88.6%가 감수성균(感受性菌)이었고 streptomycin에 대(對)한 감수성균(感受性菌)이 49.7%이었으며 tetracycline에 대(對)하여서는 42.3%가 감수성균(感受性菌)이었다.
1975년도(年度) 1년간(年間) 각(各) 시도(市道) 위생시험소(衛生試驗所)와 보건소(保健所) 및 종합병원등(綜合病院等)에서 검사(檢査) 의뢰된 검체(檢體) 2033건중(件中)에서 436주(株)의 Salmonella 균속(菌屬)을 분리(分離) 동정(同定)하였다. 동정(同定)된 436주중(株中)에서 Salmonella typhirk 426주(株)로 대부분을 차지하고 있었으며 그 외(外)의 Salmonella 균주(菌株)가 10주(株)이 었는데 이들을 serotype별(別)로 나누어 보면 다음과 같다. Salmonella A Salmonella paratyphi A 2주 Salmonella B Salmonella paratyphi B 3주 Salmonella derby 1주 Salmorella typhimurium 2 주 Salmonella C Salmonella narashino 1주 Salmonella D Salmonella typhi 426주 Salmonella E Salmonella senftenberg 1주 항생물질(抗生物質)에 대(對)한 감수성결과(感受性結果)는 Table 3과 같고, 18개의 종류(種類)의 항생제(抗生製)가 시험되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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