Kluyveromyces fragilis KCTC 7260 and Saccharomyces cerevisiae KCTC 7904, which both grew well in pear marc extract, were selected and their growth profiles and physiological functionalities were determined. Both of the selected yeasts established maximal growth by 20 hr of cultivation at $30^{\circ}C$ in pear marc extract. The cell-free extracts showed high antihypertensive angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity of 68.9% and 52.1%, respectively. The extracts also displayed 9.2 U/mL and 12.0 U/mL of protease activity, respectively.
단감의 이용성 증대를 위하여 경남 창원지방에서 생산된 단감으로 단감 와인을 제조하고, 그 특성을 조사하였다. Saccharomyces cerevisiae KCTC 7106, 7238, 7904의 3 균주를 $20^{\circ}C$ 무교반 상태에서 단감에 대하여 알콜 발효를 시도하여 발효 21일째에 가장 높은 알콜 생성능을 보인 KCTC 7106를 단감 와인 제조 균주로 선별하였다. KCTC 7106 효모를 이용하여 1년간 저장된 저품질 단감에 설탕을 첨가하여 25%로 총당을 설정하여 $30^{\circ}C$에서 120 rpm으로 교반하면서 알콜 발효를 진행한 결과, 15일째에 11.6%의 알콜이 생성되었고 그 이후 25일까지 비슷한 량이 관찰되었다. 한편, 발효 초기 pH는 5근처이다가 점차 감소하여 발효 5일째에는 4까지 감소한 후 계속 유지되었다. Vit C의 경우 초기 $5.04\;{\mu}g/ml$이다가 발효가 진행됨에 따라 서서히 감소하였다. 또한, $20^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$에서 교반을 하지 않고 당해 연도에 수확한 단감을 이용하여 발효를 수행한 결과, $20^{\circ}C$에서 발효하였을 때 30일 경과시 13%의 알콜이 생성되었으며, $30^{\circ}C$에서 발효한 경우에는 15일째에 11.8%, 35일째에 13.4%의 알콜이 생성되었다.
A Vitis hybrid-Vitis coignetiae red wine was vinified by fermentation of a mixture of a Vitis hybrid.Vitis coignetiae must with Saccharomyces cerevisiae KCTC 7904 at $25^{\circ}C$ for 10 days. The Vitis hybrid-Vitis coignetiae red wine showed high antihypertensive angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity (67.8%) and antioxidant activity (76.7%). The antihypertensive ACE inhibitor in the Vitis hybrid-Vitis coignetiae red wine was partially purified by solid phase extraction chromatography, and its ACE inhibitory activity yielded an $IC_{50}$ of 1.8 mg/mL. Six kinds of oligopeptides, including five new kinds, were contained in the partially purified ACE inhibitor fraction from the red wine after 10 days of fermentation. Antioxidant activity decreased significantly from 76.7% to 40.5% when the post-fermentation period was prolonged to 30 days.
Vitis hybrid (Sheridan)-Robus coreanus red wine was vinified by fermentation of a mixture of Vitis hybrid and Robus coreanus must at $25^{\circ}C$ for 10 days. The Vitis hybrid-Robus coreanus red wine had ethanol contents of 10.9%. It had high antihypertensive angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity of 57.8% and antioxidant activity of 64.8%. Changes in the physicochemical properties and functionality of the Vitis hybrid-Robus coreanus red wine was investigated during a post-fermentation period of three months. The ACE inhibitory activity of the red wine increased as the post-fermentation period prolonged, and showed the highest ACE inhibitory activity of 70.4% 60 days post-fermentation. However, the antioxidant activity declined significantly to 47.2% during the post-fermentation period of 60 days. In terms of sensory evaluation, the Vitis hybrid-Robus coreanus red wine had the best acceptability 60 days post-fermentation.
The goal of this study was to develop new functional pear wine using six Asian pears (Pyrus pyrifolia, Nakai), namely Wonhwang, Niitaka, Whangkeumbae, Whasan, Gamcheonbae and Chuwhangbae. To select optimal yeast and pear, we investigated the physicochemical properties of the pear wines from fermentation of musts of six pear cultivars at $25^{\circ}C$ for 7 days by several yeasts. $11.2%{\sim}12.4%$ of ethanol from musts of 'Wonhwang', 'Whangkeumbae' and 'Whasan' were produced by Saccharomyces cerevisiae K-7 and 12.8% of ethanol was also produced from 'Niitaka' by commercial Saccharomyces cerevisiae C-2. 9.9% and 11.4% of ethanol were produced from musts of 'Gamcheonbae' and 'Chuwhangbae' by Saccharomyces cerevisiae KCTC 7904, respectively. Among several pear wines, Niitaka pear wine showed the best acceptability in the sensory evaluation, and Niitaka pear wine and Whangkeumbae pear wine showed 31.1% and 27.8% of antihypertensive angiotensin I-converting enzyme(ACE) inhibitory activity, respectively. However, the other functionalities were not detected or very low. Furthermore, Niitaka-strawberry mixed fermentation wine was showed the excellent acceptability and high antihypertensive ACE inhibitory activity of 64.9%.
고함량 게르마늄을 함유시키기 위해서 Saccharomyces cerevisiae KCTC 7904와 Zygosaccharomyces rauxii KCTC 7966를 전기융합하고 효모 배지에 게르마늄을 첨가하여 게르마늄 강화 효모를 생산하였다. 전기융합된 효모의 원질체는 여러 개의 긴 pearl chain을 형성했고, fusion chamber 내의 강한 직류에 의해서 세포막의 파괴가 일어나고 세포막의 재유착 과정에 의해서 두 세포간의 융합이 일어났다. 융합된 세포를 배지에서 계대하여 성장이 빠른 균체를 선별하고, 탄수화물 이용성 및 당 대성, 염내성의 특성을 확인한 결과, 당내성은 융합체가 Z. rouxii 와 유사하고, S. cereviside보다 좋은 내성을 보였다. S. cerevisiae는 포도당 농도가 40% 이상에서는 생육이 불가능 한 것으로 나타났다. NaCl첨가량에 따른 내성을 살펴본 결과, 융합주는 12%까지 내성을 나타냈다. 융합체의 크기는 친주보다 컸으며, pH 5의 범위에서 게르마늄의 최적 소모율을 나타냈다. pH 5.5에서 건조 효모내 함유되어 있는 게르마늄 농도는 S. cereviside는 1,856 ppm, Z. rouxii는 1,310 ppm, 융합체는 5,180 ppm으로 친주보다 약 4배 이상 게르마늄 농도가 가장 높았다. 게르마늄의 함량을 높이기 위한 S. cereviside와 Z. rouxii의 전기융합은 효모 균체의 체적을 증가시켰을 뿐만 아니라, 게르마늄의 균체내 축적율도 증가시켜서 다량의 유기 게르마늄을 생산하는 데 매우 효과적이었다. 결론적으로, S. cereviside와 Z. rouxii의 전기융합을 통해 개발된 융합체는 40%이상에서 당내성을 보이고, NaCl 15% 이상까지 내성을 나타냈으며, 균체의 크기 및 게르마늄의 흡수율도 친주보다 우수하였고, pH 5에서 최대의 게르마늄 흡수율을 보였다. 이렇게 개발된 융합체는 향후 고함량 게르마늄을 생산하는데 매우 유용한 균주로 이용될 수 있음을 확인하였다.
본 연구는 전기적 세포융합방법인 electrofusion을 이용하여 우량균주의 육성을 목적으로 S. cerevisiae KCTC7904와 Z. rouxii KCTC7966 간의 전기융합을 실시하였고, 융합주의 내당성과 내염성을 확인하였으며, 융합주의 선별방법을 연구하였다. 또한 융합주의 유전안정성과 RAPD-PCR 분석을 통한 융합여부의 직접적인 증거를 확인하고자 실험하였다. S. cerevisiae KCTC7904와 Z. rouxii KCTC 7966를 각각 $12{\sim}36$시간 배양하여 분리 세척한 다음 1.5% 2-mercaptoethanol로 20분간 전 처리하여 lyticase(200 U/ml)로 $30^{\circ}C$에서 최종적으로 $60{\sim}90$분간 처리했을 때, 91% 이상의 원형질체를 얻을 수 있었다. 얻어진 원형질체를 $1.0{\sim}1.2\;M$ sorbitol 용액으로 세척 한 다음 각각 1 : 1의 비율로 혼합하여 1.5 MHz/50 pV의 고주파를 가하였을때 paired protoplast가 형성되었으며, 615 $V/256\;{\mu}sec$의 고전압을 가한 결과 약 25% 정도의 융합체를 얻을 수 있었다. 선별된 융합주의 내당성과 내염성을 각각의 모균주와 비교하여 실험한 결과 50%의 glucose와 15%의 NaCl을 함유한 배지에서 모두 생육이 가능하여 각각의 균주 특성을 가지고 있음을 확인하였고, 또한 융합주를 $4^{\circ}C$에서 5개월간 보관했을 때 약 28%정도가 모균주로 복귀되었지만, 72%의 융합안정성을 나타내므로 비교적 안정한 상태를 확인할 수 있었다. 융합의 진위 여부를 증명하기 위해 유전적인 분석방법인 RAPD-PCR 법을 사용하여 실험한 결과 각각의 균주가 agarose gel 상에서 보인 band의 패턴이 융합주에서도 모두 보여짐을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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