유전체 전장 연관분석 (GWAS)은 단일염기다형성(SNP)의 유전자형과 표현형 간의 통계적인 연관성을 분석함으로써 품종 선발용 SNP Marker 개발에 응용되고 있다. 본 연구에서는 Tano Red와 Ruby seedless 교배실생 278 계통을 대상으로 여러 과실 특성에 따른 관련 SNP를 동정함으로써 육종 선발에 필요한 DNA marker 개발에 필요한 기초 유전 자료를 얻고자 하였다. 한 계통 당 5~10개의 포도알을 선택하여 과립중, 과육탄성, 과피탄성, 과육경도, 과피경도, 과립당 종자갯수, 과립당 종자무게 및 인장강도를 측정하였다. 각 개체는 Genotyping by sequencing (GBS) 방법으로 Sequencing하여 Reference genome (Vitis vinifera PN40024 12X v2.)과 mapping 하였다. MAF (Minor allele frequency) >5%, Missing Data <30% 의 조건을 가진 SNPs 만 1차 선발하여 TASSEL과 GAPIT 프로그램으로 GWAS 분석을 하였다. Manhattan plot 결과 과립중 형질에서는 33개, 과립당 종자무게 25개와 인장강도에서는 20개의 통계학적으로 유의한 SNPs 가 선발되었고, 특이적으로 이들 모두 18번 염색체에서 발견되었다. 그러나 나머지 형질에서는 유의한 차이를 보이는 SNPs를 선발하지 못하였다. 과실의 인장강도는 수확 후 저장성과 유통과정에 영향을 미치기 때문에 Marker 개발을 통한 품종선별이 중요하다. 향후 이러한 특성과 본 연구를 통해 동정된 SNPs 의 상관관계를 구체적으로 연구하여 Marker 개발에 활용하고자 한다.
A major aim of cattle genome research is to identify candidate genes associated with meat quantity and quality through QTL analysis for application in the livestock industry. Therefore, this study focused on discovery of useful SNPs within the LOC534614 gene, containing 12273_165 SNP which is located on the same site as the QTL on chromosome 6, and evaluation of the association between SNP and body weight and cold carcass weight in Hanwoo (Korean cattle) As a result of a BLAST search of the NCBI web site, we discovered that the mRNA sequence of the LOC534614 gene was similar to that of the coiled-coil domain containing 158 (CCDC158) for dog and human. According to the direct DNA sequence from the CCDC158 gene, we identified 19 polymorphic SNPs within exons and their flanking regions. Among them, 17 polymorphic SNPs were selected for genotyping in Hanwoo (n = 476) and seventeen marker haplotypes containing 12273_165 SNP (frequency >0.1) were identified. As a result of the association between 17 polymorphic SNPs and Hanwoo (n = 476), g.8778G>A SNP in exon 6 was found to be a non-synonymous SNP, and was significantly associated with body weight and cold carcass weight (p<0.05). We discovered 19 polymorphic SNPs in the CCDC158 gene on the QTL region of BTA 6 in Hanwoo and identified that the g.8778G>A SNP was significantly associated with body weight and cold carcass weight (p<0.05), which causes an amino acid variation from valine to methionine. Furthermore, statistical analysis demonstrated that the CCDC158 gene is strongly associated with body weight and cold carcass weight in Hanwoo. In this regard, the g.8778G>A SNP in the CCDC158 gene can be useful as a positional candidate for body weight and cold carcass weight for marker-assisted selection in Hanwoo.
Growth rate is one of the economically important quantitative traits that affect carcass quantity in beef cattle. Two genes, bovine insulin-like growth factor I (IGF-I) and myogenic factor 5 (MYF5), were chosen as candidate genes for growth traits due to their important role in growth and development of mammals. The objectives of this study were to determine gene-specific single nucleotide polymorphism (SNP) markers of the IGF-I and MYF5 positional candidate genes and to investigate their associations with growth traits in Korean cattle. Genotyping of the SNP markers in these candidate genes was carried out using the single strand conformation polymorphism (SSCP) analysis. The frequencies of A and B alleles were 0.72 and 0.28 for IGF-I gene and 0.39 and 0.61 for MYF5 gene, respectively, in Korean cattle population examined. The gene-specific SNP marker association analysis indicated that the SNP genotype in IGF-I gene showed a significant association (p<0.05) with weight at 3 months (W3), and cows with AB genotype had higher W3 than BB genotype cows. The SNP genotype of MYF5 gene was found to have a significant effect (p<0.05) on the weight at 12 months (W12) and average daily gain (ADG), and cows with BB and AB genotypes had higher W12 and ADG compared with cows with AA genotype, respectively. However, no significant association between the SNP genotypes and any other growth traits was detected. The gene-specific SNP markers in the IGF-I and MYF5 candidate genes may be useful for selection on growth traits in Korean cattle.
It is well established that uncoupling protein 3 (UCP3) is expressed largely in skeletal muscle, white adipose tissue and brown adipose tissue and has been suggested to play important roles in regulating energy expenditure, body weight, thermoregulation as well as fatty acid metabolism and obesity. Therefore, the UCP3 gene was selected as a candidate gene for carcass and meat quality traits in Korean cattle. The objective of this study was to identify single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the UCP3 gene and to evaluate the association of UCP3 SNP markers with carcass and meat quality traits in Korean cattle. The five exons in the UCP3 gene were sequenced, and ten SNPs were identified. The PCR-SSCP method was then developed to genotype the individuals examined. The g.3076A>G genotype was significantly associated with marbling score (MS) of Korean cattle. Animals with the AA genotype had a higher MS than those with the AG and GG genotypes. No significant associations of the SNP g.3076A>G were observed for any traits. In conclusion, although SNP g.3076A>G, which showed an association with MS, does not cause amino acid changes, this SNP may be used as a DNA marker to select animals that have higher intramuscular fat content.
This study was done to search for positional candidate genes associated with the back fat thickness trait using a Genome-Wide Association Study (GWAS) in purebred Yorkshires (N = 1755). Genotype and phenotype analyses were done for 1,642 samples. As a result of the associations with back fat thickness using the Gemma program (ver. 0.93), when the genome-wide suggestive threshold was determined using the Bonferroni method ($p=1.61{\times}10^{-5}$), the single nucleotide polymorphism (SNP) markers with suggestive significance were identified in 1 SNP marker on chromosome 2 (MARC0053928; $p=3.65{\times}10^{-6}$), 2 SNP markers on chromosome 14 (ALGA0083078; $p=7.85{\times}10^{-6}$, INRA0048453; $p=1.27{\times}10^{-5}$), and 1 SNP marker on chromosome 18 (ALGA0120564; $p=1.44{\times}10^{-5}$). We could select positional candidate genes (KCNQ1, DOCK1, LOC106506151, and LOC110257583), located close to the SNP markers. Among these, we identified a potassium voltage-gated channel subfamily Q member gene (KCNQ1) and the dedicator of cytokinesis 1 (DOCK1) gene associated with obesity and Type-2 diabetes. The SNPs and haplotypes of the KCNQ1 and DOCK1 genes can contribute to understanding the genetic structure of back fat thickness. Additionally, it may provide basic data regarding marker assisted selection for a meat quality trait in pigs.
땅콩의 delta 12 fatty acid desaturase 유전자의 염기서열에서 고 올레인산을 함유하는 F435를 선발할 수 있는 PCR 기초 분자표지마커를 제작하였다. 본 연구는 포인트 뮤테이션(point mutation)의 결과로 나타나는 고 올레인산을 SNP 마커를 이용하여 하나의 염기서열차이(아데닌 삽입)를 이용하여 판별할 수 있는 분자마커이다. 제작한 마커가 고 올레인산 관련 특이 마커인지 확인하기 위하여, 일반 땅콩 9 품종과 F435를 PCR 후 아가로스 겔 상에서 확인하여 고 올레인산 특이 분자마커임을 확인하였고, 조평 ${\times}$ F435의 $F_2$ 교배조합 41 계통을 이용하여 분리양상을 확인하였다. 그 결과 지방산 분석을 하지 않고도 고 올레인산 함유 계통을 손쉽게 선발할수 있었다. 특히, 헤테로 형질을 나타내는 계통도 선발 가능하였다. 분자마커의 결과가 지방산 수준에서 일치하는지 확인하기 위해 NIR 및 가스크로마토그래피 분석결과를 알아보았데 고 올레인산 관련 분자표지마커가 NIR 및 가스크로마토그래피 분석결과와 일치하였다. 고 올레인산 땅콩의 유전적 차이를 이용하여 분자표지마커를 개발 함으로서 고 올레인산 땅콩의 정확한 선발과 품종을 개발하는데 있어서 세대단축의 효과를 가져올 것이다.
The tyrosinase gene was selected as a candidate for uncovering genetic mechanism causing 'black ear' coat color in rabbits. A PCR-SSCP detection method was established for the $881^A{\rightarrow}881^G$ mutation located in the central region of the tyrosinase gene between the CuA and CuB binding region signatures, and this was confirmed by sequencing and alignment. Fully consistent associations between the SNP and 'black ear' coat color were observed by analysis in a "black ear" pedigree and on 61 unrelated individuals. This SNP can serve as a molecular marker for use in "back ear" wool rabbit breeding.
The common DNA extraction methods are indispensable for genotyping by molecular marker analysis. However, genotyping a large number of plants is painstaking. A modified 'NaOH-Tris' method used in this study reduces the extraction time while keeping the cost low and avoiding the use of hazardous chemicals. The endpoint analysis by realtime PCR tends to be fast and effective for the development of SNP markers linked to the 'Chunpoong' cultivar of Panax ginseng. The 'Chunpoong' marker was developed by a major latex-like protein gene sequence. From our results, we suggest that this method is successful in distinguishing 'Chunpoong' from a large number of ginseng cultivars.
과피와 과육의 다양한 색은 복숭아 분류에 가장 널리 사용되는 상업적 기준 중 하나이다. 새로운 적색 과육 품종을 육성하기 위해서는 많은 교배 조합과 세대가 진전되어야 한다. 따라서 육종 효율을 높이기 위해서는 목적 형질을 가진 개체에 적용할 조기 선발 분자표지를 개발할 필요가 있다. 과육색이 다르게 발현되는 복숭아 품종의 유전자 발현을 비교하기 위해 2개의 cDNA library를 제작하였다. 적색 과육 품종인 '조생혈도'와 백색 과육 품종인 '미백도'의 유전자 발현 차이를 보기 위해 차세대 염기서열 분석(NGS) 기술을 사용하였고, 두 품종으로부터 얻은 EST의 염기서열을 결정하고 기존에 보고된 유전자와의 상동성을 분석하였다. '조생혈도'와 '미백도'의 EST database로부터 72쌍의 SNP 분자표지를 선발하였고, 적색 과육 품종 8개와 백색 과육 품종 24개를 구분할 수 있는 SNP 분자표지를 HRM 방법으로 분석하였다. 본 연구에서는 복숭아 EST database를 기반으로 HRM 분석 방법을 이용하여 복숭아 품종의 적육계와 백육계를 구분할 수 있는 효율적인 SNP 분자표지를 개발하였다. 이러한 SNP 분자표지는 복숭아 육종에 유용하게 사용할 수 있으며, 복숭아 품종의 다양한 색 변화에 관한 분자 기작 연구에 좋은 참고자료가 될 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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