• 제목/요약/키워드: SDS electrophoresis analysis

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폐포상피세포, 대식세포를 비롯한 각종 세포주에서 H2O2에 의한 Peroxiredoxin 동위효소들의 산화에 따른 불활성화와 재생 (Oxidative Inactivation of Peroxiredoxin Isoforms by H2O2 in Pulmonary Epithelial, Macrophage, and other Cell Lines with their Subsequent Regeneration)

  • 오윤정;김영선;최영인;신승수;박주헌;최영화;박광주;박래웅;황성철
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제58권1호
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    • pp.31-42
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    • 2005
  • 배 경 : peroxiredoxins는 거의 모든 생명체에 공통적으로 보존되어 있으며, 최근에 발견된, 특이한 peroxidases로 인체에서 6가지 동위효소가 알려져 있으며, 산화스트레스에 대한 방어역할을 담당하고, $H_2O_2$신호전달 과정에서 중요한 조절 역할을 한다. peroxiredoxin은 $H_2O_2$ 처리 과정 중에서 자신이 산화되어 불활성화 되는데, 산화된 후 다시 재생되는 것으로 보고되나 그 생리적은 의미는 분명하지 않다. 이에 저자들을 폐상 피세포주, 대식세포주, 폐포모세혈관 내피세포주 및 기타 섬유모세포주 들에서 $H_2O_2$ 에 의한 Prx의 산화과정과 재생을 알아보고자 하였다. 방 법 : 수술 환자에서 적출한 정상 폐조직과, 세포주로는 평상시 산화 스트레스에 노출이 많을 것으로 예상되는 세포들로써, 폐포상피세포의 I 형 및 II 형 세포에서 기원한 A549, WI 26, Raw 264.7, Rat2,및 폐포 모세혈관 내피세포주 등을 이용하여 이를 $50{\mu}M$. $100{\mu}M$, $500{\mu}M$$H_2O_2$로 산화시켜 불활성화 한 후, 추적관찰 하였으며, 시간대 별로(0. 10, 30, 60, 120, 240, 480 분) 수확하여, 이를 1차원 non-reducing SDS-PAGE 및 2차원 전기영동로 분리 후, silver stain 과 Western blot으로 분석 하였다. 결 과 : 1. 실험에 사용된 모든 세포주에서, $H_2O_2$ 농도에 비례하여 peroxiredoxin I, II, III 의 불활성화를 관찰할 수 있었고, 10분에 최고로 불활성화되었다. 2. 산화된 이후, 30분경부터 peroxiredoxin 의 재생이 관찰되기 시작 하였으며, 2시간 이후부터 확연하였다. 3. 다시 재생된 peroxiredoxin은 $H_2O_2$투여로서, 다시 불활성화되어, 재생된 Prx 가 활성을 지닌 단백질임을 알 수 있었다. 4. 재생의 속도는 사용된 세포주마다 차이가 있었으며 (A549 >Raw 264.7 >$Rat_2$ >WI26), 단백질 합성억제제인 cycloheximide ($10{\mu}g/ml$) 존재 하에서도 변함 없이 관찰되었다. 결 론 : 세포 내에는 산화되어 불활성화된 peroxiredoxin을 재생하는 체계가 존재 하며, 이는 활성부위 cysteine을 갖는 다른 단백질에도 공통적으로 적용될 수 있는 분자 스위치일 가능성이 높으며, 산화에 의한 신호전달과정이나, 질병 모델에서 Prx 단백의 재생 체계의 이상과 병인에 관한 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.

상엽육잠과 인공사료육잠의 소화액단백질의 비교연구 - 소화액 RFP를 중심으로 - (Comparative Studies of Digestive Fluid Protein of Silkworm Bombyx mori, Larvae reared on Mulberry Leaves and Artificial Diets)

  • 박희정;문재유
    • 한국잠사곤충학회지
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    • 제28권1호
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    • pp.15-23
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    • 1986
  • 인공사료개발연구의 일환으로 상육잠과 인공사료육잠 소화액에 대한 기초자료를 얻기 위해 상엽육잠과 인공사료육단을 공시하고 비교·분석하여 아래와 같은 결론을 얻었다. 1. 적색형광단백질은 50% 포화 acetone 용액에 침전하였고 n-butanol,용액중에 용해되지 않았으며, methanol 용액에는 용해되었다. 2. 상육잠과 인공사료육잠 소화액 acetone분획 전기영동은 이종도가 큰 단백질 band 부분에서 뚜렷한 차이가 있으며 상엽구에서만 첫 번째 band에서 적색형광이 관찰되었다. 3. 경과일수에 따른 상육잠소화액 전기영동상은 5령 1-3일에는 변화가 없으나 5령 4, 5일에 이종도가 큰 band에서 변화가 있었다. 4. 등전점전기영동결과 RFP는 PI 8-9의 염기성단백질이었다. 5. 상육잠소화액 acetone 분획의 SDS 전기영동상에 RFP로 추정되는 band가 나타났고 그 분자량은 27,000이었다. 6. 상육잠과 인공사료육잠소화액의 Sephadex G-75 permeation chromatography 결과 상육구 chromatogram에서는 16번부터 28번 사이에 3개의 흡수대가 있었으며 인공사료구 chromatogram에서는 18번부터 31번 사이에 2개의 흡수대가 있었다.

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한국형 C형 간염 바이러스의 NS5 지역 cDNA 클로닝과 발현 (Cloning and Expression of NS5 Region of Korean Type Hepatitis C Virus)

  • 한동표;이택열;김원배;김병문;장미윤;양재명
    • 대한바이러스학회지
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    • 제27권2호
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    • pp.115-128
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    • 1997
  • Three cDNA fragments located within NS5 region of HCV were synthesized by RT using viral RNA extracted from blood sample of Korean patient as a template. The cDNAs were amplified by PCR, cloned into the T-vector, and the nucleotide sequences were determined. Comparative analysis of the nucleotide and amino acid sequence of NS5 cDNAs showed that it is closely related with HCV type 1b. The cloned NS5 cDNA showed 91-94% homology at the nucleotide sequence level and 96-98% homology at the amino acid sequence level with several strains of the HCV type 1b. The NS5 cDNAs were subcloned into E. coli expression vectors to construct pRSETA5-1, pTHAN5-1, pRSETC5-2, pRSETBB1, pRESTCB1 and pRSETB-H3. Expression of the NS5 proteins was achieved by inducing the promoter with isopropyl-thio-${\beta}$-D-galactoside (IPTG) and confirmed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The NS5 proteins were immunoreactive against sera from Korean hepatitis C patients in Western blot analysis. Among the recombinant NS5 proteins, pRSETAS-1 plasmid derived protein, coded from aa2022 to aa2521 of HCV polyprotein, showed the strongest immunoreactivity against sera from Korean hepatitis C patients in immunoblot analysis. These results suggest that NS5 proteins would be useful as an antigen for detection of antibody against HCV in the blood samples.

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활성탄을 이용한 불순물제거에 의한 효과적인 인삼 조직 단백질체 분석 방법 개선 연구 (Development of a Simple and Reproducible Method for Removal of Contaminants from Ginseng Protein Samples Prior to Proteomics Analysis)

  • 굽타 라비;김소운;민철우;성기호;아그라왈 가네시 쿠마르;락왈 랜딥;조익현;방경환;김영창;김기홍;김선태
    • 생명과학회지
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    • 제25권7호
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    • pp.826-832
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    • 2015
  • 본 연구는 인삼의 잎과 뿌리 단백질 추출물에서 활성탄을 이용하여 염, 계면활성제, 색소를 제거하여 단백질체 분석 연구에 미치는 잠재적인 효과에 대한 평가를 기술하고 있다. 5%(w/v) 활성탄(100-400 mesh)과 함께 단백질 추출물을 30분간 4℃에서 반응시켜 염과 계면활성제를 제거한 후 SDS-PAGE를 분석하여 단백질의 양상을 관찰하였다. 엽록소 함량의 분석은 활성탄 처리 후 엽록소의 상당한 양(~33%)이 제거되는 것을 보여주었고, 이 분석은염, 계면활성제 제거만이 아닌 색소의 제거에서도 활성탄의 잠재적 효과가 있음을 보여 주고 있다. 활성탄을 처리한 단백질 시료를 이용하여 이차원 전기영동과 PCA 통계분석을 시행한 결과 단백질은 gel에서 더 나은 해상도를 보여주었으며 단백질 시료의 정제에서도 활성탄의 효과가 있음을 확인하였다. 종합적으로, 이 결과들은 활성탄을 이용한 간단한 방법으로 다양한 식물 조직의 단백질 추출물에서 염, 계면활성제, 색소를 제거함으로써 고해상도의 단백질체 분석에 적용될 수 있을 것으로 기대된다.

벼종자 미랑 단백질의 프로테오믹스 연구를 위한 글루테린 저장 단백질의 제거방법 (A New Removal Method of Glutelin Storage Proteins for the Proteome Study of Non-Glutelin Proteins in Rice Seeds)

  • 우선희;김세영;김태선;조성우;조건;정근욱;김선림;조용구;김홍식;송범헌;이철원;정승근;박영목
    • 한국작물학회지
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    • 제51권spc1호
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    • pp.92-102
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    • 2006
  • 본 연구는 벼종자 미량 단백질의 프로테오믹스 연구를 위하여 벼종자에 고 함량으로 존재하는 벼종자 글루테린 저장 단백질을 제거하는 방법에 관한 것이다. 따라서 본 연구는, (A) 벼종자에 액체 질소를 가하고 분쇄하여 벼종자 가루를 만드는 분쇄단계; (B) 상기 분쇄된 벼종자 가루를 물에 현탁하여 현탁액을 만드는 현탁단계; (C)상기 현탁액 중 미용해 물질을 제거하는 분리단계를 포함하는, 벼종자 미량 단백질의 프로테오믹스 연구를 위한 벼종자 글루테린 저장 단백질의 제거방법에 관하여 검토하였다. 본 연구의 결과, 단순하고 신속하며 저렴하고 효율적인 방법으로 미량 비글루테린 단백질들을 용이하게 동정할 수 있을 것으로 판단되었다.

도미와 유사어종의 식품학적 특성비교 분석에 관한 연구 (A Study on Comparative Analysis of Food Characteristics of Sea Bream and Similar Species)

  • 정지용;정영미
    • 한국조리학회지
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    • 제23권2호
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    • pp.159-168
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    • 2017
  • 본 연구는 도미회의 원료판별 및 도미유사어종간의 품질을 비교하였다. 도미 및 도미유사어종의 일반 성분을 측정한 결과는 다음과 같다. 근육 수분 함량, 단백질 함량 및 지방 함량 K, P, C는 도미의 근육에서 비교적 높은 값을 보였다. Fe는 함량이 낮았다. 중금속 성분을 측정한 결과, 도미와 숭어에서는 Cd가 검출되지 않았다. 붉은 광산에서 $0.01{\pm}0.00mg/kg$이 검출되었다. 다른 중금속은 기준치 이하이거나 검출되지 않았습니다. 전기영동 결과, 붉은 띠무늬의 66~55 kDa에서 나타난다. 도미와 가숭어의 경우, 밴드의 독특한 특징은 보이지 않았습니다. 도미의 경우 유사한 어류와 도미 물고기 사이에 식품 과학에 큰 차이가 없으나, 도미회가 비싼 가격으로 유통되고 있다. 연구 결과를 바탕으로 소비자의 안전한 음식 섭취와 올바른 유통문화 확산이 이뤄지길 바란다. 식품성분 분석 자료의 공유와 구별법을 교육하여 소비자가 원하는 가격으로 식재료를 구입할 수 있는 환경이 조성되어지길 바란다. 나아가 도미 외 타어종의 식품판별과 식품학적 연구가 연구되어지길 바란다.

계면활성제 유발된 피부장애의 아로마 에션셜 오일의 유효성 연구 - Palmarosa, Neroli essential oil을 중심으로 - (Efficiency of Essential oil about the Skintroubles induced Surfactants - Palmarosa, Neroli essential oil -)

  • 정현미;최정숙
    • 한국의류산업학회지
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    • 제8권3호
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    • pp.331-335
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    • 2006
  • 주방세제로 유도한 건성피부에 대한 Palmarosa, Neroli essential oil의 유효성 연구결과는 다음과 같다. 단백질 분석결과 Neroli essential oil 처리 군이 대조군과 가장 유사하게 나타났고 그 다음으로 Palmarosa + Neroli essential oil 처리 군이 대조군과 유사하게 복구되어 가고 있는 것으로 나타났고 그 다음으로 Palmarosa의 순이다. 표피층의 형태적 관찰결과로는 Palmarosa essential oil에 의한 각질층의 이탈과 Neroli essential oil에 의한 각질층의 복구에 의한 표피층의 비후 현상을 볼 수 있었으나 각각의 오일 처리군에서 계면활성제 처리 후 피부 염증에 대한 재생효과가 있음을 알 수 있었다. 염증 반응을 알아보기 위한 Mast Cell 실험에서 보면 대조군에 비해 계면활성제 연속처리군에서는 mast cell의 크기와 수가 증가되었음을 확인 할 수 있다. Neroli essential oil이 처리된 각각의 군에서는 mast cell의 수가 확연히 감소된 것을 볼 수 있다.

Nuclear polyhedrosis virus의 polyhedrin 아미노산 및 polyhedrin gene 염기서열 분석 (The amino acid analysis of polyhedrin and DNA sequence of ployhedrin gene in nuclear polyhedrosis virus)

  • 이근광
    • 한국어병학회지
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    • 제8권1호
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    • pp.37-46
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    • 1995
  • H. cunea nuclear polyhedrosis virus (HcNPV) 의 polyhedrin 아미노산 및 polyhedrin gene 의 염기서열을 분석하였다. Polyhedrin 은 SDS-PAGE 상에서 3개의 polypeptide band 가 나타났고 주요 polypeptide 는 약 25 Kd 의 분자량을 갖고 있었다. 또한 polyhedrin 은 17 개의 다른 아미노산으로 구성되어 있었다. HcNPV DNA를 EcoRI 효소로 절단하여 $\alpha^{32}P$로 labelling 된 Autographa californica (AcNPV) polyhedrin gene cDNA 의 probe DNA를 이용하여 hybridization 한 결과 polyhedrin gene은 EcoRI 절편들중 H 절편에 양성반응을 나타냈다. 또한 polyhedrin gene 을 포함하고 있는 EcoRI-H 절편을 pUC8 벡터에 cloning한 다음 이를 hPE-H라고 이름하였다. HcNPV genome DNA 의 promoter 부위를 sequence한 결과 TATA box의 염기배열은 polyhedrin gene 전사 개시위치로부터 위쪽으로 -79 bp 의 5' flanking 부위에서 발견되었다. polyhedrin gene 내 CAAT box는 TATA box 측면 염기 배열에서 나타나지 않았고, 4개의 tandem repeat 5'-CTAATAT-3' 와 5'-TAAATAA-3'의 염기는 polyhedrin gene내 전이 개시 위치로 부터 위쪽으로 -141 과 -108 bp 또는 -83 bp 부위에 존재하였으며, 다른 하나는 전이 개시위치로 부터 아래쪽으로 -52 bp 부위에서 발견되었다. 그리고 polyhedrin gene 내 전이 개시위치로 부터 위쪽으로 -141 bp 부위는 다량의 AT (78%) 염기가 존재하였다. 또한 polyhedrin 의 개시 coding region 은 ATG 였고 종결 coding region은 TAA 였다.

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Potential Role of Protein Kinase C on the Differentiation of Erythroid Progenitor Cells

  • Lee, Sang-Jun;Cho, In-Koo;Huh, In-Hoe;Yoon, Ki-Yom;Ann, Hyung-Soo
    • Archives of Pharmacal Research
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    • 제18권2호
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    • pp.90-99
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    • 1995
  • The effect of protein kinase C inhibitors, sturosporine and 1-(5-isoquinolinyl sulfonyl)-2-methyl piperazine(H7) on in vitro differentiation of erythroid progenitor cells which were isolated from spleens of mice infected with the anemia-inducing strain of Friend virus were examined. Erythropoietin-mediated differentitation of erythroid progenitor cells, as determined by the incorporation of $^{59}Fe$ into protoporphyrin, was inhibited by staurosporine and H7 in a concentration -dependent manner. Scatchard analysis of the $^3H-phorbol-12$, 13-dibutyrate binding to erythroid progenitor cells revealed that at the high affinity sites the dissociation constant was 22nM and the maximum number of $^3H-phorbol-12$, 13-dibutyrate binding to erythroid progenitor cells revealed that at the high affinity sites the dissociation constant was 22nM and the maximum number of $^3H-phorbol-12$, 13-dibutyrate binding sites per cell was approximately $3.7\times10^5$. Cytosonic protein kinase C was isolated from erthroid progenitor cells and then purified by sequential column chromatogrphy. Two isoforms of protein kinase C were found. Photoaffinity labeling of the purified protein kinase C samples with $^3H-phorbol-12$12-myristate 13-acetate followed by analysis of SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and autofluorography showed radiolabeled 82-KDa pepticles. Rediolabeling of the 82-KDa peptides with $^3H-phorbol-12$myristate 13-acete was almost completely blocked by excess unlabeled phorbol 12-myristate 13-acetate was almost 12-muristate 13-acetate-promoted phosphorylation with the puyrified protein kinase C samples showed that the phosphorylation of 82-KDa peptides was increased as the concentration of phorbol 12-myristate 13-acetate was increased from $10^{-8}M{\;}to{\;}10^{-4}$M. In light of the findings that erythroid progenitor cells possessed an abundance of protein kinase C and that stauroporine and H7 inhibited erythroid differentiation, it seemed likely that protein kinase C would play a role in the erythroid progenitor cell development.

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Proteomic Analysis of Global Changes in Protein Expression During Exposure of Gamma Radiation in Bacillus sp. HKG 112 Isolated from Saline Soil

  • Gupta, Anil Kumar;Pathak, Rajiv;Singh, Bharat;Gautam, Hemlata;Kumar, Ram;Kumar, Raj;Arora, Rajesh;Gautam, Hemant K.
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제21권6호
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    • pp.574-581
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    • 2011
  • A Gram-positive bacterium was isolated from the saline soils of Jangpura (U.P.), India, and showed high-level of radiation-resistant property and survived upto 12.5 kGy dose of gamma radiation. The 16S rDNA sequence of this strain was examined, identified as Bacillus sp. strain HKG 112, and was submitted to the NCBI GenBank (Accession No. GQ925432). The mechanism of radiation resistance and gene level expression were examined by proteomic analysis of whole-cell extract. Two proteins, 38 kDa and 86.5 kDa excised from SDS-PAGE, which showed more significant changes after radiation exposure, were identified by MALDI-TOF as being flagellin and S-layer protein, respectively. Twenty selected 2-DE protein spots from the crude extracts of Bacillus sp. HKG 112, excised from 2- DE, were identified by liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS) out of which 16 spots showed significant changes after radiation exposure and might be responsible for the radiation resistance property. Our results suggest that the different responses of some genes under radiation for the expression of radiation-dependent proteins could contribute to a physiological advantage and would be a significant initial step towards a fullsystem understanding of the radiation stress protection mechanisms of bacteria in different environments.