A total of 70 colonies were isolated from the Korean human milk samples on the BCP plate count agar. These LAB isolates were subcultured in 10% reconstituted skim milk, and two strain thereof were finally selected for their highest acid productions. These strains were identified as Enterococcusfaecium based on 16S rDNA sequencing data, named as Enterococcus faecium KHM-11. Sugar utilization of E. faecium KHM-11 was investigated by API 50CH kit, and 19 different sugars including D-arabinose, L-arabinose, galactose, D-glucose, D-fructose, and D-mannose were utilized. For fermentation profiles, a yogurt inoculated by E. faecium KHM-11 after 15 hour, reached at pH 4.09, titratable acidity at 1.10% and average viable counts $1.30{\times}10^9\;CFU/mL$. Effects of the administration of yogurt 0.5% of piglet diet to piglets were investigated for growth rate, analysis of blood and incidence of diarrhea. 24 heads of piglets were divided into two groups: the experimental and the control of 12 animals each. The average growth rate in the yogurt-fed group was higher for 21.67%, compared with control (p<0.05). There were no differences in the concentrations of blood glucose, cholesterol, albumin and globulin between the two treatments. Incidence of diarrhea was no in pigs fed yogurt as compare to control.
The antimicrobial resistance of 160 strains of Enterococcus faecalis and 173 strains of E. faecium to 12 antimicrobial agents was investigated. The test strains were isolated from 126 wild seawater and farmed fish, including olive flounder (Paralichthys olivaceus), black rock fish (Sebastes schlegeli), red sea bream (Pagrus major), and sea bass (Lateolabrax japonicus), in 2005 and 2006. Overall, 91.9% of the E. faecalis isolates and 88.4% of the E. faecium isolates showed antimicrobial resistance to at least one antimicrobial agent. The pattern of antimicrobial resistance of the isolates differed little according to the species of fish. The percentage of E. faecalis and E. faecium with specific antimicrobial resistance differed according to the sample source. For the isolates from farmed fish samples, 66.7% of E. faecalis were tetracycline resistant and 54.5% of E. faecium were erythromycin resistant. By contrast, in the wild fish seawater samples, 92.0% of E. faecalis were rifampin resistant and 88.5% of E. faecium were tetracycline resistant.
To produce rapidly the traditional Kanjang soy sauce-like product with rich flavors, lactic acid bacteria of Enterococcus spp. isolated from Chungkukjang was used as one of starter cultures. Among 119 Enterococcus spp., eight strains were selected by protease-secreting activities and identified as four E. faecium, three E. faecalis, and one E. gallinarium. The strains showed low resistances toward eight antibiotics and had no resistant genes to the vancomycin. Especially, E. faecium O24 was cultivated well on 5% NaCl medium that was selected for further study as the starter. E. faecium O24 grew well on the steamed soybean and the counts increased by ten times overnight, which produced mostly 80 mg% glutamic acid and aspartic acid as the seasoning amino acids on the product. Various organic acids including principal lactic acid were also produced. Flavors of maltol and guaiacol, typical soy-sauce flavor, were produced in the mixed cultures of Zygosaccharomyces rouxii and Candida versatilis. Therefore, E. faecium O24 could be a starter of soybean fermentation for soy sauce-like product with rich flavors rapidly.
Dominant lactic acid bacteria (LAB) strains were isolated from traditional fermented foods to obtain rare ${\gamma}$-aminobutyric acid (GABA)-producing LAB. Out of 147 isolates, 23 strains that could produce GABA with 1% (w/v) L-monosodium glutamate (MSG) were first isolated. After further screening of these rare GABA-producing LAB by analysis of the glutamate decarboxylase and 16S rRNA gene sequences, Enterococcus faecium JK29 was isolated, and 1.56 mM of GABA was produced after 48 h cultivation in basic de Man, Rogosa, and Sharpe (MRS) medium. To enhance GABA production by E. faecium JK29, the culture conditions were optimized. When E. faecium JK29 was cultivated in optimized MRS medium containing 0.5% (w/v) sucrose and 2% (w/v) yeast extract with 0.5% (w/v) MSG, GABA production reached 14.86 mM after 48 h cultivation at initial conditions of pH 7.5 and $30^{\circ}C$.
To investigate the inhibition effect on pathogenic microbes and the antimicrobial resistance of probiotics, a total of 140 probiotics were isolated from 35 kinds of Korean commercially available Kimchi. Of those, L. plantarum was identified from 53 strains (37.9%), E. faecium from 27 strains (19.3%), and L. rhamnosus from 7 strains (5.0%) using 16S rRNA gene sequencing. Sixty nine strains (49.3%) showed overall antimicrobial activity against pathogenic microbes, namely S. Typhi, S. Enteritidis, E. coli O157:H7, S. flexneri, NAG Vibrio, Listeria monocytogenesis, Y. enterocolitica, S. aureus, S. pyogenes, G. vaginalis, C. albicans, and P. acne. The proportions of L. plantarum, E. faecium, and L. rhamnosus strains to pathogenic microbes were 75.5%, 40.7%, and 28.6%, respectively. In addition, a resistance test with 18 antimicrobial agents using a disk diffusion assay revealed a resistance incidence of 98.6% for nalidixic acid, 83.6% for streptomycin, 75.7% for gentamicin 73.6% for vancomycin, 72.1% for norfloxacin, and 67.9% for ciprofloxacin. In conclusion, L. plantarum, L. sakei, and E. faecium strains with various antimicrobial activities and broad antibiotic resistance are useful for treating diarrhea in long-term inpatients and for the alternative use for treating Candida species female vaginitis.
To evaluate the antibiotic resistance of Enterococcus from salad and sprout, Enterococcus were isolated and identified from 47 salad samples and 37 sprout samples, and then their antibiotic resistances were analyzed. Ninety five Enterococcus, 41 strains from salad and 54 strains from sprout, were ultimately isolated. The frequent Enterococcus in salad and sprout were E. gallinarum, E. faecalis, E. faecium, E. hirae, and E. avium. Minimum inhibitory concentrations of the isolates for vancomycin were below $4{\mu}g/mL$, which were not high levels of resistance. All Enterococcus proved to be resistant to streptomycin and chloramphenicol. Twenty two percentage of the isolates were resistant to penicillin, however, almost the isolates were sensitive to tetracycline. Eighteen percentage of the isolates were resistant to erythromycin. All E. faecium and E. faecalis were found to be ampicillin-resistant, and seven E. faecalis and five E. faecium were resistant to rifampicin. Overall antibiotic resistances of Enterococcus isolates were relatively low and low resistance to vancomycin was similar to those evidenced by Enterococcus isolated from the other foods. Therefore, there may be no special risk from the antibiotics resistances of Enterococcus and especially vancomycin-resistant Enterococcus from the fresh-cut salads and the sprouts.
In this study, a safety evaluation was conducted to confirm if the Enterococcus faecium CKDB003 strain obtained by selection from a mixed fermentation of fruit and milk is suitable for use as a probiotic. The MIC value for the 10 antibiotics specified in the EFSA guidance was below the acceptable cut-off value. The antibiotic resistance genes aac(6')-li, eatAv, and msr(C) exist by whole genome sequencing, but are in the chromosome and not in the plasmid, thus confirming that there is no possibility of transmission to other microorganisms. It was confirmed that cytolysin (cylA, cylB, cylI, cylL-l, cylL-s, cylM, cylR1, cylR2), aggregation substance (asa1, asp1), collagen adhesion (ace), enterococcal surface protein (esp), endocarditis antigen (efaA), hyaluronidase (hyl) and gelatinase (gelE) were not present in the genome by examining the genes of factors related to virulence. Also, the biochemical analysis showed no toxic enzyme activities, and no virulence genes were detected by the PCR method. Thus, the E. faecium CKDB003 strain can be safely used as a health functional food probiotic, based on the results of the safety assessment.
Antibiotic-resistant Staphylococcus aureus is beginning to pose a social issue. Thus, there is an urgent need for the development of effective anti-staphylococcal agents to eradicate antibiotic-resistant S. aureus in food systems and to treat the pathogen in clinical areas. To address this need, lactic acid bacteria (LAB) from kimchi were screened for the production of anti-staphylococcal bacteriocin. From this screening, a bacteriocin generated by the MK3 strain, which was identified by 16S rRNA gene sequence analysis as Enterococcus faecium, demonstrated antimicrobial activity against an S. aureus strain, and was designated enterocin MK3. Enterocin MK3 also demonstrated activity against other gram-positive bacteria, including several LAB and Listeria monocytogenes, but not gram-negative Escherichia coli. The molecular mass of enterocin MK3 was estimated as approximately 6.5 kDa on an SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis) gel.
Probiotics are live microorganisms that, when administered in adequate amounts, confer health benefits to the host. This study was conducted for the isolation of potential lactic acid bacteria (LAB) with probiotic properties from goat milk and yogurt. Several tests were conducted in vitro using the standard procedures for evaluating the inhibitory spectra of LAB against pathogenic bacteria; tolerance to NaCl, bile salt, and phenol; hemolytic, milk coagulation, and bile salt hydrolase activities; gastrointestinal transit tolerance; adhesion properties; and antibiotic susceptibility. Among 40 LAB strains screened according to culture characteristics, five isolates exhibited antagonistic properties. Three were identified as Pediococcus acidilactici, and two were identified as Enterococcus faecium, exploiting 16S rRNA gene sequencing. All the isolates succeeded in the gastrointestinal transit tolerance assay and successively colonized mucosal epithelial cells. Based on the results of these in vitro assays, both P. acidilactici and E. faecium can be considered as potential probiotic candidates.
The use of microbial extracts containing plant hormones is a promising technique to improve crop growth. Little is known about the effect of bacterial cell-free extracts on plant growth promotion. This study, based on phytohormonal analyses, aimed at exploring the potential mechanisms by which Enterococcus faecium LKE12 enhances plant growth in oriental melon. A bacterial strain, LKE12, was isolated from soil, and further identified as E. faecium by 16S rDNA sequencing and phylogenetic analysis. The plant growth-promoting ability of an LKE12 bacterial culture was tested in a gibberellin (GA)-deficient rice dwarf mutant (waito-C) and a normal GA biosynthesis rice cultivar (Hwayongbyeo). E. faecium LKE12 significantly improved the length and biomass of rice shoots in both normal and dwarf cultivars through the secretion of an array of gibberellins (GA1, GA3, GA7, GA8, GA9, GA12, GA19, GA20, GA24, and GA53), as well as indole-3-acetic acid (IAA). To the best of our knowledge, this is the first study indicating that E. faecium can produce GAs. Increases in shoot and root lengths, plant fresh weight, and chlorophyll content promoted by E. faecium LKE12 and its cell-free extract inoculated in oriental melon plants revealed a favorable interaction of E. faecium LKE12 with plants. Higher plant growth rates and nutrient contents of magnesium, calcium, sodium, iron, manganese, silicon, zinc, and nitrogen were found in cell-free extract-treated plants than in control plants. The results of the current study suggest that E. faecium LKE12 promotes plant growth by producing GAs and IAA; interestingly, the exogenous application of its cell-free culture extract can be a potential strategy to accelerate plant growth.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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