• 대한소아치과학회지
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• 제42권4호
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• pp.312-318
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• 2015

본 연구의 목적은 치과분야에서 줄기세포 공급원으로써 과잉치의 활용 가능성을 알아보고자 Real Time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (Real Time qRT-PCR)법을 이용하여 발치된 과잉치 치수 유래 줄기세포 (supernumerary dental pulp stem cells, sDPSCs)로부터 상아모세포로의 분화여부를 관찰해 보는 것이었다. 이를 위해 상아모세포의 대표적인 발현인자로 알려진 alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin (OC), osteonectin (ON), dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1) 그리고 dentin sialophosphoprotein(DSPP)의 발현을 분화제 처리 후 0일, 8일 그리고 14일째에 각각 Real Time qRT-PCR 법을 통해 상대적인 mRNA의 발현 양을 비교하여 변화 양상을 알아보았다. 또한 Alizarin-red solution 의 염색을 통해 sDPSCs가 분화제 처리 7일, 14일, 21일 그리고 28일째에 석회화 결절을 형성하는 정도를 시각적으로 확인해 보았다. Real Time qRT-PCR 결과 분화제 처리 8일째에 가장 높은 발현 양을 보이다가 14일째에 감소하는 추세를 나타내었으며, Alizarin-red solution 염색 결과는 7일째부터 흐리게 나타나다가 14일째에는 배지 전반에 걸쳐 진하게 염색되는 소견을 보였다. 따라서, sDPSCs를 이용한 연구에서 Real Time qRT-PCR법을 위한 분화제의 처리 기간은 8일 정도가 적절하며, Alizarin-red solution 염색은 14일이 적당한 것으로 사료된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제36권7호
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• pp.832-839
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• 2007

본 연구는 불가사리에서 추출한 칼슘의 체내 이용성 및 칼슘 흡수증진 물질 첨가가 불가사리 칼슘의 이용성에 미치는 영향을 검토함으로써 새로운 칼슘 급원으로서의 불가사리 칼슘의 유용성을 알아보고자, 동물실험을 수행하였다. 즉 3주령 된 암컷 흰쥐를 대상으로, 불가사리에서 추출한 칼슘에 칼슘흡수증진 물질로서 casein phosphopeptide(CPP;5.25%), citrate-malate(1.4%), isoflavone(0.01%)을 각각 첨가한 식이를 6주간 공급한 후, 불가사리 칼슘의 이용성에 미치는 효과를 알아보았다. 이 때 칼슘 수준은 0.35%로, 인 수준은 0.7%로 각각 고정시켰다. 희생을 통하여 혈청 칼슘과 인 농도 및 alkaline phosphatase(ALP) 활성, 칼슘과 인의 흡수율 및 보유율, 대퇴골의 칼슘 및 인 함량, 소장의 가용성 및 불용성 칼슘 함량을 측정하였다. 그 결과는 다음과 같다. 불가사리에서 추출한 칼슘에 칼슘흡수증진 물질을 첨가했을 경우, 성장 및 식이섭취량은 실험군 간에 차이가 없었다. 혈청 칼슘과 인 농도 및 ALP 활성은 실험군 간에 유의적인 차이가 없었다. 칼슘의 보유율과 겉보기 흡수율은 불가사리칼슘+CPP군과 불가사리칼슘+citrate-malate군이 높았다. 인의 보유율은 차이가 없었으나, 겉보기 흡수율은 불가사리칼슘+CPP군에서 높았다. 소장 내용물의 가용성 분획 중 칼슘 함량은 실험군 간 유의적인 차이가 없었다. 반면 불용성 분획의 칼슘 함량은 불가사리칼슘+CPP군, 불가사리칼슘+citrate-malate군 및 불가사리 칼슘+ISO군에서 유의적으로 낮았다. 식이로부터 유래된 장내 가용성 칼슘 함량은 불가사리칼슘+CPP군에서 가장 높았다. 대퇴골의 무게, 칼슘 및 인의 함량은 실험군 간에 유의적인 차이가 없었다. 이상의 결과에서 불가사리 칼슘은 흰쥐의 일반적인 성장 및 기능에 영향을 미치지 않으면서도 칼슘의 흡수율은 높아 새로운 칼슘급원으로서 이용가능성이 높음을 시사하였다. 그러나 대체로 골격 대사에는 영향을 미치지 못했다. 또한 칼슘흡수증진 물질을 첨가하였을 경우에 CPP와 citrate-malate가 불가사리칼슘의 흡수율을 높여, 불가사리칼슘에 CPP와 citrate-malate를 첨가할 경우 보다 좋은 효과가 기대된다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제42권3호
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• pp.73-80
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• 2012

Purpose: The purpose of this study was to investigate the effects of the immunosuppressants FK506 and cyclosporin A (CsA) on the osteogenic differentiation of rat mesenchymal stem cells (MSCs). Methods: The effect of FK506 and CsA on rat MSCs was assessed in vitro. The MTT assay was used to determine the deleterious effect of immunosuppressants on stem cell proliferation at 1, 3, and 7 days. Alkaline phosphatase (ALP) activity was analyzed on days 3, 7, and 14. Alizarin red S staining was done on day 21 to check mineralization nodule formation. Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) was also performed to detect the expressions of bone tissue-specific genes on days 1 and 7. Results: Cell proliferation was promoted more in the FK506 groups than the control or CsA groups on days 3 and 7. The FK506 groups showed increased ALP activity compared to the other groups during the experimental period. The ALP activity of the CsA groups did not differ from the control group in any of the assessments. Mineralization nodule formation was most prominent in the FK506 groups at 21 days. RT-PCR results of the FK506 groups showed that several bone-related genes-osteopontin, osteonectin, and type I collagen (Col-I)-were expressed more than the control in the beginning, but the intensity of expression decreased over time. Runx2 and Dlx5 gene expression were up-regulated on day 7. The effects of 50 nM CsA on osteonectin and Col-I were similar to those of the FK506 groups, but in the 500 nM CsA group, most of the genes were less expressed compared to the control. Conclusions: These results suggest that FK506 enhances the osteoblastic differentiation of rat MSCs. Therefore, FK506 might have a beneficial effect on bone regeneration when immunosuppressants are needed in xenogenic or allogenic stem cell transplantation to treat bone defects.

• 대한치과보철학회지
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• 제54권3호
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• pp.203-209
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• 2016

목적: 치주조직재생을 위해서는 치주인대세포의 증식 및 이주를 촉진시키는 것이 필수적이나 현재까지 이것을 만족시키는 재생술식은 없다. 최근 법랑기질유도체(enamel matrix derivatives)가 치주조직 재생 술식에 적용되고 있으나 그 기전에 대해서는 완전히 알려지지 않았다. 따라서 본 연구의 목적은 법랑기질유도체가 치주인대세포의 증식과 성장인자 발현에 미치는 영향에 대하여 알아보고자 함이다. 재료 및 방법: 건강한 성인의 제 3 대구치로부터 치주인대세포를 추출한 후, 법랑기질유도체(Emdogain (Biora, Malmo, Sweden))의 농도가 각각 0, 12.5, 25, 50, 100, and $200{\mu}g/mL$인 배지에서 배양시켰다. 치주인대 세포증식과 알칼리성 인산분해효소(alkaline phosphatase) 활성도를 측정하고, 발현되는 성장인자를 평가하였다. 결과: 치주인대세포의 세포증식은 $25{\mu}g/mL$이상의 농도의 법랑기질유도체를 첨가한 군에서, 알칼리성 인산분해효소 활성도는 $50{\mu}g/mL$의 법랑기질유도체를 첨가한 군에서 각각 유의하게 증가하였고, $50{\mu}g/mL$의 법랑기질유도체를 첨가한 군에서 치주인대세포의 VEGF (vascular endothelial growth factor)와 TGF(transforming growth factor)-${\beta}$의 발현이 유의하게 증가하였다. 결론: 법랑기질 유도체는 인간 치주인대세포의 세포증식과 알칼리성 인산분해효소 활성을 증진시키고, VEGF와 TGF-${\beta}$등 성장인자의 발현을 촉진함으로써 치주조직 재생에 기여할 수 있을 것이다.

• The Journal of Advanced Prosthodontics
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• 제3권3호
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• pp.145-151
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• 2011

PURPOSE. This study was performed to investigate the ability of recombinant human-bone morphogenic protein-2 immobilized on a heparin-grafted bone substrate to enhance the osteoblastic functions. MATERIALS AND METHODS. The Bio-$Oss^{(R)}$, not coated with any material, was used as a control group. In rhBMP-2-Bio-$Oss^{(R)}$ group, rhBMP-2 was coated with Bio-$Oss^{(R)}$ using only deep and dry methods (50 ng/mL, 24 h). In heparinized rhBMP-2-Bio-$Oss^{(R)}$ group, dopamine was anchored to the surface of Bio-$Oss^{(R)}$, and coated with heparin. rhBMP-2 was immobilized onto the heparinized- Bio-$Oss^{(R)}$ surface. The release kinetics of the rhBMP-2-Bio-$Oss^{(R)}$ and heparinized rhBMP-2-Bio-$Oss^{(R)}$ were analyzed using an enzyme-linked immunosorbent assay. The biological activities of the MG63 cells on the three groups were investigated via cytotoxicity assay, cell proliferation assay, alkaline phosphatase (ALP) measurement, and calcium deposition determination. Statistical comparisons were carried out by one-way ANOVA test. Differences were considered statistically significant at $^*$P<.05 and $^{**}$P<.001. RESULTS. The heparinized rhBMP-2-Bio-$Oss^{(R)}$ showed more sustained release compared to the rhBMP-2-Bio-$Oss^{(R)}$ over an extended time. In the measurement of the ALP activity, the heparinized group showed a significantly higher ALP activity when compared with the non-heparinized groups (P<.05). The MG63 cells cultivated in the group with rhBMP-2 showed increased calcium deposition, and the MG63 cells from the heparinized group increased more than those that were cultivated in the non-heparinized groups. CONCLUSION. Heparin increased the rhBMP-2 release amount and made sustained release possible, and heparinized Bio-$Oss^{(R)}$ with rhBMP-2 successfully improved the osteoblastic functions.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제35권3호
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• pp.222-228
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• 2010

본 연구의 목적은 현재 치근단 역충전재로 널리 사용되고 있는 MTA와 새롭게 개발된 제품인 DB를 MG63 세포를 사용하여 비교하는 것이다. 치근단 역충전재료로는 MTA, DB, IRM을 사용하였고 대조군으로는 tissue culture plastic을 사용하였다. 각 재료를 혼합하고 혼합물의 경화가 일어나도록 24시간 동안 놓아두었다. MG63 세포를 각 군에 뿌려준 후 세포가 재료에 부착될 수 있도록 4시간 배양하였다. 치근단 역충전재를 세포에 접촉시킨 후 세포수준의 초기 반응을 관찰하였다. 12시간 더 배양한 후 세포가 각 재료에 붙어 있는 정도를 관찰하고, 각 재료가 골형성에 미치는 영향을 알아보기 위해 ELISA를 이용하여 $TGF{\beta}1$, OC를 측정하였고 ALP의 양도 측정하였다. 결과는 일원배치분산분석법으로 통계처리하였다. 그 결과, 재료에 부착이 일어난 세포의 수 항목과 OC 항목에서만 MTA와 DB간에 통계적으로 차이가 없었다. 다른 항목들에서는 모든 군 간에 통계적으로 유의한 차이가 있었다. DB가 MTA와 완전히 같은 세포반응을 보이지는 않았지만 부착이 일어난 세포의 수는 재료의 생체적합성을 나타내며 OC는 골형성 정도를 나타내므로 DB가 역충전 재료로 사용된다면 MTA와 유사한 결과를 보일 것으로 예측된다.

• 대한한방내과학회지
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• 제24권1호
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• pp.44-54
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• 2003

Objectives : This study was done to investigate the protective effects of Gagaminjakdowha-Tang on liver injury of rats induced by $CCl_4$ and d-galactosamine. Methods : All animals were divided into 5 groups, those were normal group(untreated), control group(treated with 0.9% Saline solution), sample I group(200mg/kg administrated), sample II group(400mg/kg administrated), Silymarin(200mg/kg administrated) group. Liver injury of rats were induced by $CCl_4$ and d-galactosamine, and then the serumtransaminase(ALT & AST) alkaline phosphatase(ALP), lactic dehydrogenase(LDH) for enzyme activities, Liver cytosol malondialdehyde(MDA), catalase, superoxide dismutase(SOD), glutathione S-transferase(GST) and glutathione-peroxidase(GPX) for enzyme activities were measured. Results : The inhibitory effects on the serum ALT activities were noted in both sample I and sample II group. The inhibitory effects on the serum AST activities were noted in only sample II group. The inhibitory effects on the serum ALP activities were noted in both sample I and sample II group. The inhibitory effects on the serum LDH activities were noted in only sample II group. The inhibitory effects on the liver cytosol malondialdehyde were noted in only sample II group. The decresed effects on the liver cytosol catalase activities were inhibited in only sample II group. The decresed effects on the liver cytosol superoxide dismutase activities were inhibited in only sample II group. The decresed effects on the liver cytosol GST activities were inhibited in only sample II group. The decresed effects on the liver cytosol GPX activities were inhibited in only sample II group. The inhibitory effects of the serum ALT activities were noted in both sample I and sample II. The inhibitory effects of the serum AST activities were noted in only sample II group. The inhibitory effects of the serum ALP activities were noted in only sample II group. The inhibitory effects of the serum LDH activities were noted in both sample I and sample II group. Conclusions : Gagaminjakdowha-Tang has protective effects against liver injury in rats induced by $CCl_4$ and d-galactosamine.

• 대한한방내과학회지
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• 제29권1호
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• pp.265-277
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• 2008

In order to investigate the protective effects of Gami Yugan-tang on liver damage in rats induced by $CCl_{4}$ and d-galactosamine, the serum transaminase(ALT & AST), alkaline phosphatase(ALP), lactic dehydrogenase(LDH), superoxide dismutase(SOD), catalase, glutathione S-transferase(GST), glutathione peroxidase(GPX) for enzyme activities, and lipid peroxidation were measured. All animals were divided into 4 groups: normal group (untreated), control group (treated with 0.9% saline solution), sample I group (treated with 740mg/kg Gami Yugan-tang), and sample II group (treated with 1,480mg/kg Gami Yugan-tang). The results were as follows : 1. The results of liver damage in rats induced by $CCl_4$ : The protective effects of ALT were displayed in sample I and sample II, and AST, ALP, LDH, SOD, catalase, GST, GPX, and lipid peroxidation were noted in sample II group. It showed slight necrosis of hepatic cell and pathologic changes, for example, inflammatory cells infiltration were improved in sample II group compared to the control group. 2. The results of liver damage in rats induced by d-galactosamine : The inhibitory effects of AST, ALT, LDH, and ALP activities were noted in both sample I and sample II groups. The findings from this experiment suggests that Gami Yugan-tang has protective effects against liver damage in rats induced by $CCl_{4}$ and d-galactosamine.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제35권4호
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• pp.949-959
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• 2005

이 연구는 임플란트를 식립하기를 원하는 전신건강상태가 양호하며 구강위생상태가 좋은 14명 환자(남자:8명, 여자:6명, 평균나이 : 44세)의 20개의 발치와 내에 흡수성 차폐막(BioMesh. Sam Yang Corporation, Korea)과 함께 탈회냉동 건조동종 골(dem-ineralized freezedried bone allografts, $250-500{\mu}m$. Pacific Coast Tissue Bank, U.S.A.)과 이종골(Bovine-Bone, Bio-Oss 0.25-1.0 mm, Geistlich, Biomaterials and Osteohealth, Switzerland)을 1:1(부피)로 혼합하여 이식한 후 그 치유양상을 관찰하고자 조직학적 및 면역조직화학적으로 평가하였다. 이직재가 탈락되는 것을 방지하기 위하여 발치한 후 1개윌이 경과된 후에 이식재와 차폐막을 위치시켰다. 표본제작을 위하여 이식술을 시행한 지 약 6개윌 후에 임플란트를 식립하기 직전 식립부위에서 trephine bur로 골을 채취하였는데, 20증례 중 7증례에서 임플란트를 식립하기 전에 차폐막이 노출되었다. 차폐막이 노출되지 않은 것을 대조군으로, 노출된 것을 실험군으로 설정하였다. 조직학적인 관찰을 위하여 통상적인 방법에 따라 탈회 표본을 제작하였고, alkaline phosphotase(ALP)틀 이용하여 면역조직화학적 염색을 시행한 후 골 형성 상태를 평가하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 본 연구에서는 발치와내에서 골유도재생술 후 나타나는 치유 형태를 5가지 형태로 분류할 수 있었다. Type I, II와 III는 새로운 골 형성을 나타내지 않았고, 면역조직화학적 검사 시 ALP 음성 소견을 나타내었다. Type V는 새로운 골 형성과 ALP 양성 소견을 나타내었으나 염증, 괴사, 결합조직의 증식 등은 없었다. Type IV와 Type V의 차이는 결합조직의 증식여부로 구분되었다. 막이 노출되지않은 증례들 중 7 증례에서는 Type V의 치유 형태를, 2증례에서는 Type IV의 치유 형태를 나타내었다. 막이 노출되었던 증례에서는 Type I, II, III의 다양한 치유 형태를 나타내었다. 본 연구결과, 발치와 내에 골유도재생술을 시행한 후 차폐막의 노출 여부가 신생골 형성에 중요한 영향을 미칠 것으로 사료되며, 본 연구에서 분류한 치유 형태가 향후 골유도재생술 후의 결과 분석에 활용될 수 있을 것으로 사료된다.

• Maxillofacial Plastic and Reconstructive Surgery
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• 제38권
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• pp.11.1-11.8
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• 2016

Background: Silk cocoon is composed of multiple layers. The natural silk cocoon containing all layers was cut as a rectangular shape as defined as total group. The inner and outermost layers were removed from the total group and the remained mat was defined as the middle group. The objectives of this study was to compare the total group with the middle group as a barrier membrane for the guided bone regeneration. Methods: The effects of these materials on the cellular proliferation and alkaline phosphatase (ALP) expression of MG63 cells were explored. For comparing bone regeneration ability, bilateral bone defects were created in calvarial areas in ten adult New Zealand white rabbits. The defects were covered with silk membranes of the middle group, with silk membrane of the total group used as the control on the contralateral side. The defects were allowed to heal for 4 and 8 weeks. Micro-computerized tomography (${\mu}CT$) and histological examination were performed. Results: The middle group exhibited a higher MTT value 48 and 72 h after treatment compared to the total group. ALP expression was also higher in the middle group. The results of ${\mu}CT$ and histologic examination showed that new bone formation was significantly higher in the middle group compared to the total group 8 weeks postoperatively (P < 0.05). Conclusions: In conclusion, the middle layer of the silk cocoon supports guided bone regeneration better than unprocessed silk cocoon.