• Reproductive and Developmental Biology
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• 제29권4호
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• pp.241-245
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• 2005

Porcine oviduct epithelial cells (POEC) are widely used in co-culture experiments to improve early embryonic development, in vitro fertilization in embryo transfer programs for domestic animals and in vitro maturation of immature germ cells. POEC were mechanically isolated and cultured in tissue culture medium 199. Cells grew continuously, and confluent monolayers were formed after 7 days. After forming confluent monolayer of epithelial cells, supernatant was collected as the condition medium for maturing round spermatids in vitro. Round spermatids were also separated mechanically and cultured in the POEC condition medium. In this study we observed that $20\%$ of round spermatid cultured were matured into elongating spermatid after 24 h, and about $10\%$ of round spermatid cultured showed complete elongation (elongated spermatid) within $24\~48$ h of in vitro culture. No further development was observed within $50\~72$ h and transformed cells lost their viability after 72 h. These preliminary findings suggest that the condition medium from POEC may be possible to overcome the round spermatid block by improving the milieu of culture system.

• 한국가축번식학회지
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• 제22권4호
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• pp.395-403
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• 1998

본 연구에서는 돼지난자내 원형정자 주입후 수정율과 체외 배 발달을 조사하였다. 원형정자 주입 2시간 전에 인위적 전기자극을 주고 원형정자를 주입했을 때 난자들의 수정율이 주입 직후에 전기자극을 준 것들과 전기 자극을 주지 않은 것들보다 수정율이 높았다. 원형정자와 원형 정자핵을 각각 주입 한 후 전핵 형성율과 전핵 이동율을 조사하였으나 유의차를 발견할 수 없었다. 전핵의 형성과 이동중 미세소관의 움직임을 간접형광면역법 및 공춧점 현미경을 사용하여 조사해본 결과, 난활성 직후 난자의 표층에서 미세소관이 발생해서 이것에 의해 웅성 및 자성전핵이 난자 중심부로 이전됨을 볼 수 있었다. 원형정자와 원형정자핵 주입후 배양 6일째에 각각 25% 와 27%의 배반포로 형성되었고, 8 일째 형성된 배반포를 염색하여 관찰한 철과 세포수가 각각 평균 87에서 99개가 형성되었음을 알 수 있었다. 이러한 결과는 체외 성숙된 돼지 난자 내에 원형정자 혹은 원형정자 핵을 미세 주입하는 방법에 의해 정상척인 배발달을 하는 돼지 수정란 생산이 가능한 것을 보여주는 것이다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제23권3호
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• pp.327-331
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• 1996

Normal fertilization and pregnancy by round spermatid was achieved from nonobstructive azoospermia patient to be believed untreatable. Therefore, it is suggested that application of round spermatid in human ART program seems to be new treatment of male infertility. Also, it will be needed further research for evaluated fertilization mechanism by round spermatid injection.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권2호
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• pp.193-201
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• 1999

본 연구에서는 소 난자 세포질내 원형정자 및 원형정자 핵을 미세주입 후 수정과정과 체외 배 발달을 조사하였다. 원형정자 주입 3시간 전에 인위적 자극을 주고 원형정자를 주입했을 때 난자들의 수정률이 주입 직후에 자극을 준 것들과 자극을 주지 않은 것들 보다 높았다. 원형정자 주입과 원형 정자핵을 주입한 후 전핵 형성률과 전핵 이동률을 조사하였으나 유의차를 발견할 수 없었다. 전핵의 형성과 이동중에 미세소관의 움직임을 간접형광면역법 및 공촛점 현미경을 사용하여 조사해 본 결과, 난활성 직후 난자의 표층에서 미세소관이 발생해서 이것에 의해 웅성 및 자성전핵이 난자 중심부로 이전됨을 볼 수 있었다. 수정 후 원형정자의 세포질내 Mitochondria의 분포상태를 알아보기 위해 MitoTracker에 노출시킨 원형정자를 주입한 후 형광현미경에서 관찰해 보았다. 그 결과 원형정자의 Mitochondria가 주입 후 4-cell 이 전까지 는 관찰되었으나 그 이 후에는 발견 할 수 없었다. 원형정자를 미세주입한 후 소 난자를 체외에서 배양했을 때 2.5%의 난자가 배반포로 발달하였다. 이상의 결과는 체외 배양한 소 난자 내에 원형정자 혹은 원형정자 핵을 미세 주입하여 정상적인 수정과 배발달이 가능한 것을 보여 주는 것이다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제25권2호
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• pp.233-237
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• 1998

We demonstrated that the normal pregnancy and delivery by round spermatid injection (ROSI) into oocytes was achieved from nonobstructive azoospermia patient. In this case, the normal fertilization rate was 50%. All of the two pronuclear stage embryos cleaved and were transferred to the patient's uterus. A singleton pregnancy was achieved and resulted in the birth of normal female infant. This resuJt show that intracytoplasraic injection of round spermatid seems to be new treatment of nonobstmctive azoospermia male infertility. Further research is needed to evaluate the required culture conditions to induce progression of the round spermatid into a more elongated stage.

• 한국가축번식학회지
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• 제23권4호
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• pp.359-364
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• 1999

Recent advances in intracytoplasmic sperm (ICSI) and round spermatid injection (ROSI) would provide exciting opportunities not only for the male infertility but also for studying gamete physiology during fertilization and early development. Furthermore, intracytoplasmic sperm injection could be used to produce transgenic animal (Perry et al., 1999). However, it is not clear in the fertilization processes in mammalian oocytes following intracytoplasmic injection of spermatozoon, isolated sperm head or round spermatid. (omitted)

• Applied Microscopy
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• 제26권1호
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• pp.33-45
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• 1996

The spermatogenesis of Korean slug, Incilaria fruhstorferi are observed by electron microscope. The results are as follows: The spermatogenesis of Korean slug, Incilaria fruhstorferi, is processed through the five stages; Spermatogonia, primary spermatocyte, secondary spematocyte, spermatid and spermatozoon. The spermiogenesis, the differentiation of the spermatid, is also processed through the five stages. In stage 1, the numerous and round mitochomdria in the cytoplasm are moved around the nucleus of spermatid. In stage 2, the nucleus of spermatid transformed into the oval shape, and the oval nucleus is surrounded by many rough endoplasmic reticulum. In stage 3, the oval nucleus of spermatid is changed to be curved as an arrow, and then two centrioles appeared behind nucleus. The centriole is sucked into the cytoplasm. and almost all the chromatins are changed into heterochromatins. In stage 4, the nucleus of spermatid are transformed into the oval shape, when the lamella plate chromatin of spermatid form in the nucleoplasm. In stage 5, the oval nucleus is then transformed into the stream-line shape when the lamella plate chromatin of spematid gradually concentrated in the nucleus, and long axoneme ($65{\mu}m$ in length) form from the distal centriole. Two long mitochondria in the middle piece and the main piece of spermatozoon array spirally along a long axoneme, and the mitochondria matrix is gradually filled with electron-dense glycogen particles ($0.1{\mu}m$ in size). The axoneme of spermatozoon consists of typical 9+2 microtubular pattern.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2003년도 제3회 발생공학 국제심포지움 및 학술대회
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• pp.133-133
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• 2003

• 한국가축번식학회지
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• 제19권3호
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• pp.171-179
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• 1995

This study was carried out to investigate the fertilizing ability of round spematids isolated from seminiferous tubules. A round spermatid was introduced into the perivitelline space of a mature oocyte using Leitz micromanipulators and then subjected to electrofusion. Electrofusion was induced by applying a single DC pulse of 90V with a duration of 60$\mu$sec using Model 611 Square Wave Stimulator(Phipps and Bird, U.S.A) in 0.3 M sucrose fusion medium containing 0.05mM CaCl2 and 0.1mM MgSO4, Oocyte pre-activation was conducted by exposure to a single DC(80V, 80$\mu$sec) pulse in electrofusion medium at 1 hour before electrofusion. The incidence of fusion with pre-activated oocytes(23.8%, 57/239) was higher than that with nonactivated oocytes(6.7%, 3/45). The most of electro-stimulated mouse oocytes cleaved regardless of the success or failure of fusion. Karyotyping of embryos that developed into blastocysts after exposure to the fusion pulse were performe. We found that blastocysts from the fused oocytes were diploid whereas blastocysts from the unfused oocytes were haploid. About 11.7 and 11.5% of fused and unfused oocytes were developmental potentials of fused and unfused oocytes. Therefore, these results suggest that the mouse mture oocyte can be fertilized by fusion with a round spermtid and subsequently developed normally.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제7권2호
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• pp.89-93
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• 2003

짱둥어 정자의 미세구조 및 정자형성과정에 관한 연구를 하였다. 정소는 정자낭으로 구성되어 있으며 얇은 막으로 둘러싸여 있었다. 정자낭은 여러 발생단계의 정자들을 포함하고 있으며, 정자낭의 내강에는 다수의 정자들이 위치하고 있었다. 정소의 외막은 상피층, 콜라겐층, 근양체(myoid tissue)등으로 구성되어 있었다. 근양체는 정소 안쪽까지 연결되어서 정자낭 사이의 간질조직의 주요 구성체였다. 게 다가 핵과 다수의 미코톤드리아를 포함한 간세포(interstitial)도 관찰되었다. Synaptonemal complex가 1차 정모세포에서 확인되었다. 초기 정세포에서 과립상의 염색질로 구성된 구형의 핵이 관찰되었다. 치밀한 과립상의 염색질로 구성된 중기 정세포의 핵이 정세포의 한쪽에 자리잡고 있었고, 미코톤드리아가 다른 한쪽에 자리잡고 있었다. nuclear fossa가 후기 정세포의 미토콘드리아의 근처에서 관찰되었다.