Kim, S. H.;Rhee, Y.;Kim, C. J.;Yoo, I. D.;Mheen, T. I.
Korean Journal of Microbiology
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v.24
no.2
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pp.127-132
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1986
Soybean nodule extract was prepared and tested for the effectiveness in the induction of asymbiotic nitrogen fixation of R. japonicum P-168. A Asymbiotic nitrogenase activity was increased over twice when glutamate was replaced by nodule extract in the induction media. Independently of the induction media, the nitrogenase activity in the assay media was also enhanced by the addition of nodule extract ($100-400{\mu}g$ protein/ml). The amount of ethylene in the assay media reached the highest point after 8 days incubation of R-168 and was decreased thereafter. The growth of R. japonicum R-168 was sensitive to the concentration of nodule extract. As a while, the effect of soybean root extract was not detected both in the induction of nitrogenase activity and in the growth of R. japonicum R-168.
The inoculation effect of the highly nitrogen fixing strains of R. japonicum were tested in the 3 kinds of soil with different cultural history onto Gycine max cv. Jang-yeob. The nodulation and nitrogen fixation activity in 3 test soils all showed the great increase in inoculated group compared to the non-inoculated group. The plant dry weight of the in-oculated groups were increased about 10% than that of the non-inoculated groups. The numerical index of the increase in total nitrogen fixation activity were 238% in the pre-cultivated, 266% in the immatured and 157% in the matured soil and these results suggested the clear effect of inoculation. Among the strains tested, R. japonicum R214 and Rl38 showed the excellent inoculation effect.
This study was carried out to research the biological characteristics among rhizobia and soybean seed and root lectins, and to obtain a basic imformation of host specificity in biological nitrogen symbiosis system. The results obtained were as follows: Purified seed lectin from soybean varieties of paldal, backwoon and hwangkeum formed immunoprecipitin lines with standard soybean seed lectin and the root lectins from soybean seedlings immunoelectrophoretically. Soybean seed and root lectins interacted with Rhizobium japonicum and Bradyrhizobium japonicum, but didn't interacted with Rhizobium. viceae, whereas pea lectin conjugated with R. viceae, but didn't bind with R. japonicum and B. japonicum. Lipopolysaccharides of B. japonicum and R. viceae were fractionated into LPS I and LPS II on the sephadox G-50. Lipopolysaccharides from B. japonicum showed rhe binding acitivity both with soybean seed lectin and root lectin, but those from R. viceae didn't show it with soybean seed and root lectins.
A series of green house experiment was conducted to find but the effect of fertilizer application and inoculation of rhizobium on the changes of amide-N, ureide-N and $NH_4-N$ concentration in stem and root exudates of soybean plant growth. The results obtained were summarized as follows ; 1. Five strains of indigenous Rhizobium japonicum-nitrogen fixing activity($C_2H_2$-reducing activity) was more than 6.4 to 20.1 nmole/hr/tube-were identified from 37 soil samples in 22 areas of farmers field throughout country. 2. These identified 5 strains of rhizobium were obtained high nitrate reductase but low ammonium and nitrite oxidase activities. Among 5 strains of rhizobium the Rhizobium japonicum RjK-134 was applied for this green house experiment. 3. Dry matter yield was increased by the combination of inoculation of Rhizobium japonicum RjK-134 with no fertilizer and without nitrogen fertilizer application. However, dry matter yield was decreased with application of N and NPK with inoculation of rhizobium. 4. The concentrations of amide-N and ureide-N were increased in xylem sap than that of root exudate and higher concentration was obtained ar 30 days after planting than flowering stage (45 days after planting). 5. The combination of NPK application with inoculation of Rhrizobium japonicum RjK-134 enhanced the increase of amide-N and ureide-N concentration in xylem sap and root exudate. 6. High ammonium-N concentration in xylem sap and root exudate were obtained in combination with without-fertilizer under no inoculation of rhizobium and N and NPK application with inoculation of rhizobium.
Experiments were carried out to elucidate the specific interactions between host plant, Phaseolus vulgaris, and symbiotic bacteria, Rhizobium Phaseoli. Purified P. vulgaris lectins and six species of cultured Rhizobium were subjected to agglutination test. Lectins from bean and R. phaseoli showed relatively high agglutination activity indicating that host plant lectins recognize carbohydrate moieties on the compatible Rhizobium cell surface. The specific carbohydrate receptors for binding of the lectins on the cell surface of R. phaseoli were found as mannose and galactose. The minimum concentration of sugars for the inhibition was 6.25mM. The lectin content of cultured plant roots was measured after germination and was maximum in 5-day seedlings. The nodulation was competitively inhibited by lectins for the plants cultured with Rhizobium cells. By immunochemical studies, there was some relationship in antigenic determinants between R. phaseoli and R. japonicum but no relationships were observed with other Rhizobium species. The results suggest that the infection by rhizobia to the roots of leguminous plants may be caused by the specific interaction of lectins with rhizobia.
Kim, Chang-Jin;Kim, Sung-Hoon;Rhee, Yoon;Yoo, Ick-Dong;Mheen, Tae-Ick
Applied Biological Chemistry
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v.28
no.3
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pp.149-155
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1985
590 strains of Rhizobia were isolated from root nodules of the legumes collected at 223 sites in Korea. According to their host specificities they were classified into R. japonicum(218 strains), R. phaseoli(101 strains), R. trifolii(97 strains), R. meliloti(4 strains), R. leguminosarium(1 strain), Rhizobium species(101 strains), and unidentified species(159 strains). 3 potent strains R-138, R-168, and R-214 of R. japonicum have been selected based on the infectivity to soybean cultivar and effeciency of nitrogen fixation. It was observed that the fast-growing strains of R. japonicum contained 1 to 4 plasmids of M.W. of 35-300 Md. However, plasmids were hardly detected for the slow-growing strains.
Rhizobium japonicum isolates from all around Korea could be classified into two groups, i.e., acid producing fast-growers with 2.4 hour mean generation time and non-acid producing slow-growers in yeast extract-mannitol medium with 13.1 hour mean generation time. Tested fast-growers were higher in 6-phosphogluconate dehydrogenase activity than slow-growers were and used sucrose as carbon source whereas slow-growers did not. Fast-grower R4, R257, R278, showed tolerance even in 0.5M NaCl or above and the growth of all the strains tested were inhibited at below pH 4.5. Relative symbiotic activities of nitrogen fixation for these isolated with Glycine max cv. Jangyeobkong (commercial soybean cultivar mostly cultivated in Korea) ranged 0.1 to 2.0 comparing to that of R. japonicum L-259 (NRRL), without regard to their growth rate.
Laboratory and pot experiment were carried out to find the symbiotic nitrogen fixing activities and the yield of dry matter on the several selected wild soybean plant. 1. Very high acetylene reducing(nitrogen fixing)activities were observed in isolated strains of Rhinchosis volubilies Lour. (924 nmole), Desmodium oldhami Oliver (844 nmole) and Glycine soja s. et z. (271 nmole/test tube/hr) while Rhizobium japonicum was only 0.6 nmole/test tube/hr. 2. On the serological reaction, eight isolated Rhizobium strains were sufficiently different to distinguish from the Rhizobium japonicum. 3. On the pot experiment with Glycine soja s. et z., A. Number of total nodules were higher in NPK+rice straw+Ca+Mo than in NoPK. However, little differences were observed in mumber of effective nodules. B. Yield of dry matter was increased with increasing of nitrogen content in plants. C. Estimated amount of fixed nitrogen in plant by an individual nodule was higher in NoPK than in NPK+rice straw+Ca+Mo.
To develop soybean inoculant the effects of inoculation with selected Rhizobium japonicum strains were tested in the field, and the results were as following. 1. With the inoculation of selected strains, increase of nodule number, nodule weight and nitrogen fixing activity were observed with or without applying N-fertilizer. 2. Chlorophyll contents was increased and senescence of plant was delayed with the inoculation of selected strains in case without applying N-fertilizer. But there was little difference of chlorophyll contents in case with applying N-fertilizer. 3. There were little differences of plant height and number of nodes, and some increase of plant stem dry matter and number of pods with inoculation of selected strains. 4. The mean yield of inoculation group (363-374kg/10a) was increased by 8-11% comparing to the uninoculated group (337kg/10a) in case without applyiag N-fertilizer. The mean yield of inoculated group (368-384kg/10a) was increased by 9-14% also in case with applying N-fertilizer.
Soybean rhizobia were isolated from 101 soybean (Glycine max.) cultivar which had been grown for the breeding experiment in Korea. Seven strains of the fast-growing soybean rhizobia and nine strains of the slow-growing soybean rhizobia were selected on the basis of their growth rate in AMA medium and their high ability of nodulation. The slow-growing soybean rhizobia were identified as Bradyrhizobium japonicum in the acetylene-reducing activity, microbial characteristics, and biochemical characteristics whereas the fast-growing soybean rhizobia were very similar to Rhizobium fredii.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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