• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권2호
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• pp.161-168
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• 1986

E. coli-S. cerevisiae shuttle vector인 plasmid YRp7을 이용하여 B. amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase gene을 E. coli 내에 cloning하였다. 이때 제한 효소 Sau 3 AI에 의해 얻어진 $\alpha$-amylase gene의 크기는 약 1.95kb정도였으며 E. coli내에서 비교적 안정하게 유지되고 발현되었다. 재조합 plasmid p-EA24를 함유한 E. coli는 B. amyloliquefaciens의 약 65% 정도의 $\alpha$-amylase를 생성하였으며, 최적온도, pH, CaCl$_2$의 영향등 $\alpha$-amylase의 효소학적인 성질을 비교 조사해 본 결과 B. amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase와 동일하였다. 또한 E. coli에서 생성된 $\alpha$-amylase로 70% 정도가 periplasmic space에 존재하였으며 나머지는 세포 내부에 존재함을 알았다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제34권3호
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• pp.218-223
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• 1995

담배와 고추의 주요해충인 담배나방 [Helicoverpa assulta(Guenee)]의 미생물적 방제법을 개발하기 위하여, 아직 국내에서 보고되지 않은 담배나방 핵다각체병 바이러스 담배나방 사충으로 부터 분리하고, 바이러스의 전자현미경 관찰 및 바이러스 DNA의 제한효소 분석 등을 통한 생화학적 특성을 조사하였다. 담배나방 핵다각체병 바이러스의 다각체는 구형에 가까운 20면체로서 크기는 평균 약 1.0$\mu$m 정도이고, 다수의 바이러스 입자가 다각체 단백질에 포매되어 있었다. 포매된 바이러스 입자는 한개의 봉상 nucleocapsid가 하나의 envelope 내에 매립된 형태의 SNPV(single embedded nuclear polyhedrosis virus)로, 형태는 전형적인 봉상으로서 그 크기는 약 $65nm\times300nm$ 였다. 또한 다각체 단백질의 SDS-PAGE 분석 결고, 분자량은 약 31 Kd이었으며, 담배나방 핵다각체병바이러스 DNA를 분리하여 EcoRI. HindIII 등 수종의 제한효소로 처리분석한 결과, 그 genome의 크기는 약 120Kb 정도였다. 본 핵다각체병바이러스는 담배나방 유충에만 병원성을 나타내 기주특이성을 보였다.

• 대한수의학회지
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• 제50권3호
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• pp.239-246
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• 2010

Among 203 avian pathogenic Escherichia coli (APEC) isolated from poultry with colibacillosis in korea, 14 isolates were selected from total 68 isolates transferred R plasmid and classified into 5 groups on the basis of antimicrobial minimal inhibitory concentration (MIC) pattern, farm source and O serotype. An association between clonal origin and R plasmid of them was investigated by R plasmid profile, restriction endonuclease analysis and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The strains that showed the same or very similar antimicrobial MIC pattern, but different farm source and O serotype, revealed different PFGE pattern, which seemed to be different clonal origin. And the strains that showed the same MIC pattern and O serotype, revealed different PFGE pattern, seemed to be originated from different clone. Also the strains showing the same MIC pattern and farm source, but different O serotype, revealed to be different clonal origin. The strains that showed the same or similar MIC pattern, farm source, and O serotype, revealed identical or similar PFGE pattern, which seemed to belong to be one clone. Meanwhile, horizontal transfer of R plasmid seems to be common in APEC with regardless of O serotype and clone of the strains. These results indicate that rapid and accurate epidemiological survey of APEC can be possible by the combination of O serotyping, plasmid profiling and PFGE analysis following the classification of them into groups of antimicrobial drug resistance pattern.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권3호
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• pp.245-250
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• 1986

청주시 무심천의 하천수에서 항생물질에 내성을 나타내는 Gram 음성 세균을 분리하여 수질환경에서 일어나는 R 플라스미드의 전이를 연구하였다. 분리된 균주사이에서 접합에 의한 R 플라스미드의 전이는 실험실 환경에서 1.1$\times$$10^{-6}$-1.2$\times$$10^{-7}$, 하천의 수질환경에서 1.2$\times$$10^{-7}$-1.0$\times$$10^{-9}$으로 나타나, 자연의 수질환경에서도 R 플라스미드의 전이가 일어남을 확인하였다. 또 T-44 균주의 Ap$^{r}$Cm$^{r}$Tc$^{r}$ 플라스미드는 형질전환에 의하여 E. coli HB 101에 1.7$\times$$10^{-6}$의 비율로 전이되었다. 분자의 크기가 약 9.01kb로 측정된 Ap$^{r}$Cm$^{r}$Tc$^{r}$플라스미드 DNA를 제한효소로 처리한 결과 이 플라스비드에는 EcoRI과 BamHI의 절단부위가 각각 하나씩 존재하고 P-stI의 절단부위는 3개가 있었다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제28권3호
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• pp.105-112
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• 1989

누에(Bombyx mori)와 흰불나방(Hyphantria cunea)으로 부터 분리된 핵다각체병바이러스(nuclear polyhedrosis virus: NPV)를 동정하기 위하여 전자현미경 관찰한 결과, BmNPV 다각체의 크기는 $3 \mu\textrm{m}$ 정도의 18면체로 외형이 균일하였으나, HcNPV는 1.5-$2 \mu\textrm{m}$ 정도이며 부정형이었다. Alkaline protease를 부활화시킨 후 SDS-PAGE한 다각체 단백질의 分子물은 BmNPV가 30 KD, HcNPV는 31 KD인 major band와 이들의 중합체(polymer)로 생각되는 57 KD, 112 KD의 minor band들이 관찰되었다. 또한 virion 단백질을 SDS-PAGE한 후 은염색한 결과, BmNPV는 분자량 9.6~112 KD인 47개의 band, HcNPV 경우는 분자량 9.4~l11 KD인 48개는 band가 관찰되었다. BmNPV와 HcNPV DNA의 제한효소 처이에 의한 전기영동 패턴을 관찰했으며, 각각의 genome 크기는 BmNPV가 약 116.4 Kb, HcNPV의 약 114.6 Kb였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제21권12호
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• pp.1336-1344
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• 2011

This study details and examines a novel ligation-mediated polymerase chain reaction (LM-PCR) method. Named the LM-PCR/Shifter, it relies on the use of a Class IIS restriction enzyme giving restriction fragments with different 4-base, 5' overhangs, this being the Shifter, and the ligation of appropriate oligonucleotide adapters. A sequence of 4-base, 5' overhangs of the adapter and a 4-base sequence of the 3' end of the primer(s) determine a subset of the genomic restriction fragments, which are amplified by PCR. The method permits the differentiation of bacterial species strains on the basis of the different DNA band patterns obtained after electrophoresis in polyacrylamide gels stained with ethidium bromide and visualized in UV light. The usefulness of the LM-PCR/Shifter method for genotyping is analyzed by a comparison with the restriction endonuclease analysis of chromosomal DNA by the pulsed-field gel electrophoresis (REA-PFGE) and PCR melting profile (PCR MP) methods for isolates of clinical origin. The clustering of the LM-PCR/Shifter fingerprinting data matched those of the REA-PFGE and PCR MP methods. We found that the LM-PCR/Shifter is rapid, and offers good discriminatory power and excellent reproducibility, making it a method that may be effectively applied in epidemiological studies.

• 환경생물
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• 제18권1호
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• pp.53-61
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• 2000

서울시 소재 지하수 중 중금속으로 오염되어 음용수 이외의 생활 용수로 사용하고 있는 1개 정점과 음용수로 사용하고 있는 1개 정점, 대조군으로 강화도 천연 동굴의 1개 정점을 대상으로 실험을 실시하였다. 지하수 세균군집의 유전적 다양성의 변화를 보기 위해 지하수 세균 군집에서 16SrDNA를 증폭하는 primer로 PCR(polymerase chain reaction)을 실시한 후 ARDRA(amplified ribosomal DNA restriction analysis) 지문 분석으로 비교하였다. 16S rDNA를 증폭하여 제한효소 지문분석을 한 결과 in situ와 음용수에서 유전적 다양성이 상대적으로 크게 나타났다. 지하수 세균 군집의 ARDRA지문 분석은 상이한 환경과 서식지를 반영한 유전적 차이를 빠르게 비교 분석할 수 있었으며 지하수의 오염도에 따른 미생물의 다양성(천연 동굴>음용수>오염수)을 확인할 수 있었다.

• 미생물학회지
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• 제24권4호
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• pp.357-363
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• 1986

Synthesis of threonine and methionine in yeast, Saccharomyces cerevisiae shares a common pathway from aspartate via homoserine. HOM6 gene encodes homoserine dehydrogenase (HSDH) which catalyzes the inter-conversion of beta-aspartate semialdehyde and homoserine. The level of HSDH is under methionine specific control. A recombinant plasmid (pEK1: 13.3kb), containing HOM6 gene, has been isolated and cloned into E. coli by complenemtary transformation of a homoserine auxotrophic yeast strain M-20-20D (hom6, trp1, ura3) to a prototrophic M20-20D/pEK1, using a library of yeast genomic DNA fragments in a yeast centromeric plasmid, YCp50(8.0kb). Isolation of HOM6has been primarily confirmed by retransformation of the original yeast strain M20-20D, using the recombinant plasmid DNA which was extracted from M20-20D/pEK1 and subsequently amplified in E. coli. Eleven cleavage sites in the insery (5.3kb) have been localized through fragment analysis for 8 restriction endonucleases; Bgl II(2 site), Bgl II(1), Cla I(3), Eco RI(1), Hind III(2), Kpn I (1), Pvu II(1) and Xho I(1).

• 대한미생물학회지
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• 제21권1호
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• pp.47-52
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• 1986

A heat-labile enterotoxin and no heat-stable enterotoxin producing($LT^+ST^-$) plasmid (110 kilobases in size) was isolated from an enterotoxigenic Escherichia coli of human strain O15:H11 and used for analysis of the $LT^+$ deoxyrionucleic acid region using recombinant DNA technology. A DNA segment containing the $LT^+$ DNA region which was one restriction endonuclease BamHl fragment(6.2 kb in size) was joind to a small multicopy plasmid, pUC9. E. coli K-12 strain, JM103 harboring the chimeric plasmid produced greater amounts of LT than did the enterotoxigenic E. coli O15:H11 strain. The BamHl fragment was further digested with various restriction endonucleases and contained no HindIll restriction site which is an essential in $LT^+ST^+$ plasmid. The detailed DNA sequencing of this $LT^+ST^-$ plasmid is required.

• 한국어병학회지
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• 제8권1호
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• pp.31-36
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• 1995

HcNPV DNA genome 을 제한효소 EcoRI 으로 절단하여 그들의 일부 절편을 pUC8 vector 에 cloning 한 후 E. coli JM 83 세포에 형질 전환시켰다. 이 결과 24 개의 EcoRI 절편중 12 개의 절편이 cloning 되었다. 이들 제조합체중 4 개는 eNP-O, eNP-Q, eNP-R, eNP-S 라 명명하였다. 또한 이들 제조합체의 외래 유전자 발현을 SDS-PAGE 에 의해 단백질 패턴을 분석하였다. 그 결과 제조합체 eNP-O, eNP-Q, eNP-R 에서는 E. coli JM 83 숙주세포의 단백질 밴드와 비교하여 다른 분자량을 갖는 밴드가 나타났다.