본 연구의 목적은 항생제 내성 균과 유전자 및, 항생제 내성 전달을 제어하는데 필요한 살균능 (CT, 농도 * 접촉 시간)을 서로 비교하는데 있다. 이를 위하여, 이를 위해 각기 다른 염소 주입농도(C)와 접촉시간(T)에 따라 각각의 항생제 내성 제거를 산정하였다. 그 결과 항생제 내성균 90%(1 log)이상 제어를 위해서는 CT 값(176~353 mg min/L)이 필요하였으며, 항생제 내성 유전자의 제거를 위한 CT 값은 195~372 mg min/L 이었다. 또한 항생제 내성 유전자의 전이 90% 이상 제거를 위한 CT 값은 187~489 mg min/L이었다. 따라서, 본 연구조건에서는 항생제 내성 유전자 및 유전자의 전이에 대한 제어를 위해서는 항생제 내성균 제어보다 더 높은 소독능이 필요함을 알 수 있었다.
As a material of metal-ceramic prosthesis, nickel as a form of Ni-Cr alloy has been used for many dental prostheses in many cases. However, several problems in use of the alloy have been revealed (ex : tissue stimulation, skin allergy, hypersensitivity, cytotoxicity and carcinogenecity). Little is known about nickel with respect to the relationship between Ni-prosthesis and gaining of Ni-resistance in oral microorganisms. The present study was undertaken to check wheather use of Ni-prosthesis leads to occurrence of Ni-resistant microorganisms. So this study may suggest the possible relationships between the oral microorganisms and nickel-resistance in oral environment. Bacteria were isolated from the gingival crevicular fluid on the pateints wearing Ni-Cr prosthesis. The isolated bacteria were tested for their Ni-resistance in nickel containing media at different concentration from 3mM to 110mM. E. coli HB101 was used as control. The Ni-resistant bacteria were isolated and biochemically identified. The Ni-resistant bacteria were tested several bio-chemical, molecular-biological tests. Performed tests were ; measuring the growth curve, antibiotic test, growth ability test in liquid media, isolation of the chromosome and plasmid, digestion of DNA by restriction enzyme, electrophoresis of chromosome and plasmid DNA, identification of Ni-resistant genes by the DNA hybridization. The results were as follows: 1) The bacteria isolated from gingival crevicular fluid on the patients wearing Ni-Cr alloy pros-thesis showed nickel-resistance. 2) The isolated microorganisms grew at nickel containing media of high concentrations (60mM-110mM). 3) Based on the biochemical tests, the isolated microorganisms were identified as Enterococcus faecalis(13 cases), Klebsiella pneumoniae(1 case) and Enterobacter gergeviae(1 case). 4) Enterococcus faecalis expressed not only nickel resistance but also the multi-drug resistance to several antibiotics ; chloramphenicol, kanamicin, streptomycin, lincomycin, clindamycin. However, all strain showed the sensitivity against the tetracycline. 5) DNA hybridization result suggest that there is no homology between the previousely known gene of nickel resistance in Klebsiella pneumoniae and chromosomal DNA of Enterococcus faecalis.
Various kinds of antibiotic intramammary infusions are used for treatment of bovine mastitis. As antibiotic-resistant bacteria are increased, the therapeutic rate for bovine mastitis is decreased. The goal of this research is to detect significant synergic effects of combination of antibiotics with sulbactam, $\beta$-lactamase inhibitor, on methicilin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). We used 5 strains of MRSA isolated from bovine mastitis with clinical and subclinical signs. All of the bacteria isolated had resistance to oxacillin and showed multi-resistant patterns in the antimicrobial susceptibility tests. Minimal bactericidal concentrations of ampicillin, amoxicillin, cephalexin, ampicillin/sulbactam(2:1), amoxicillin/sulbactam (2:1), and cephalexin/sulbactam (1:1) were measured according to broth microdilution method suggested by National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS, M31-A2) to compare the synergic effects of sulbactam combination with each antibiotic alone. Ampicillin and amoxicillin showed synergic antibacterial activity to 4 and 3 respectively in 5 strains of MRSA in combination with sulbactam. This study demonstrates that ampicillin/sulbactam and amoxicillin/sulbactam can be therapeutic choices for mastitis associated with MRSA.
Identification of antibiotic resistant bacteria isolated from animals is necessary for seeking a proper treatment and for preventing the spread of the bacteria among animals. Methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP) is of worldwide concern in veterinary medicine. This study was conducted to investigate the antimicrobial susceptibility of Staphylococcus pseudintermedius (S. pseudintermedius) isolated from dogs and cats. Out of the total number of 150 specimens, 35 isolates (23.3%) were identified as S. pseudintermedius when tested by MALDI-TOF MS (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectroscopy). Among them, 5 isolates (14.3%) were the case of MRSP. In the results of the antimicrobial susceptibility test, the isolates of S. pseudintermedius were susceptible to amikacin (100%), cephalothin (100%), vancomycin (100%), amoxicillin (85.7%), oxacillin (85.7%), enrofloxacin (82.8%), chloramphenicol (80%). On the other hand, they were resistant to penicillin (71.4%), tetracycline (48.6%), ampicillin (37.1%), kanamycin (31.5%), erythromycin (31.4%), respectively.
세균의 항균제 내성율은 지난 몇십년 동안 지속적으로 상승하였으며 mobile genetic elements를 통한 항균제내성인자들의 전파는 다제내성세균의 출현 및 확산을 가중시켰다. 본연구에서는 임상검체에서 분리된 aminoglycoside에 비감수성 대장균 33주를 대상으로 mobile genetic elements를 통해 전파될 수 있는 aminoglycoside 내성인자를 조사하였다. 16S ribosomal RNA methyltransferases (RMTases)와 aminoglycoside-modifying enzyme (AME)유전자가 PCR과 DNA 염기서열분석을 통해 검출되었다. 그 결과 aac(3')-II 유전자(54.5%)를 포함하고 있는 균주가 제일 많았으며 그 다음으로 aph(3')-Ia 유전자(18.2%)가 많았고 aac(6')-Ib 유전자(15.2%)를 포함하는 균주도 있었다. RMTase 유전자는 본 연구에서는 검출되지 않았다. aac(3')-II 유전자를 포함하고 있는 18균주 중 17균주가 gentamicin에 내성을 보였으며 이중 16균주는 tobramycin에도 내성을 보였다. aac(6')-Ib 유전자를 포함하고 있는 5균주는 모두 tobramycin에 내성을 보였다. 본 연구에서 AME 유전자를 획득하는 것은 사람에서 분리된 대장균이 aminoglycoside에 내성을 나타내는 중요한 기전 중 하나임이 확인되었다. 사람으로부터 분리된 세균을 대상으로 지속적으로 항균제 내성인자를 조사하는 것은 내성세균의 확산을 막는데 필요할 것으로 사료된다.
Aquaculture practices to ensure greater production, such as high density breeding and excessive feeding, are become stressors that raise the prevalence of diseases. Accordingly, increasingly large volumes of antibiotics are used more frequently each year. Long term use antibiotics can generate resistant bacteria, which interrupt treatments and cause a potential transfer to human bodies. Thus, antibiotic resistance is of importance in public health. Tetracycline (Tc) is one of the typical medicines used in the aquaculture drugs, which has a wide range of application including gram-positive and gram-negative bacteria. In the examination of 153 strains isolated from olive flounder (Paralichthys olivaceus) farms located in Jeju in 2016, it turned out that a total of 84 strains were resistant to Tc or oxytetracycline (OTC). The extent to which the strains are resistant to Tc and OTC was confirmed through MIC test, mostly within the range of 25 to $100{\mu}g/m{\ell}$. Twelve different types of tet genes were detected using single and multiplex PCR in the 84 Tc-resistant strains. The PCR was used to find tet(K), tet(M), tet(O), and tet(S), which are known to exist primarily in gram positive strains. According to the results, - tet(S) is the most dominant gene in 49 strains of Streptococcus parauberis, accounting for 63.2%. And there were two strains that have two different types of resistant genes. The multiplex PCR was used to detect tet(A), tet(B), tet(C), tet(D), tet(E), and tet(G), which are commonly found in gram-negative strains. Each of tet(B), tet(D), and tet(B)&(M) was found in a strain presumed to be Vibrio sp., and only tet(D) was found in 10 Edwardsiella tarda strains.
Plectasin, the first defensin extracted from a fungus (the saprophytic ascomycete Pseudoplectania nigrella), is attractive as a prospective antimicrobial agent. The purpose of this study was to establish a bacterium-based production system and evaluate the antimicrobial activity of the resulting plectasin. A gene encoding plectasin, with the codon preference of Escherichia coli, was optimized based on its amino acid sequence, synthesized using genesplicing with overlap extension PCR, and inserted into the expression vector pGEX-4T-1. The fusion protein was expressed in the soluble fraction of E. coli and purified using glutathione Stransferase affinity chromatography. Plectasin was cleaved from the fusion protein with thrombin and purified by ultrafiltration. The purified plectasin showed strong, concentrationdependent antimicrobial activity against gram-positive bacteria, including antibiotic-resistant bacteria, especially penicillin-resistant Enterococcus faecium. This antimicrobial activity was equal to chemically synthesized plectasin and was maintained over a wide range of pH and temperatures. This soluble recombinant expression system in E. coli is effective for producing plectasin at a relatively lower cost, and higher purity and efficiency than prior systems, and might provide a foundation for developing a large-scale production system. Overall, plectasin shows potential as a novel, high-performance, and safe antibiotic for the treatment of refractory diseases caused by drug-resistant bacterial strains.
Biofilm 내부의 항생제 내성 박테리아의 성장형태는 만성감염과 질병을 발생한다. 인위적 형성한 biofilm의 체외실험 모델 시스템 통한 항생제 침투 실험을 수행하였다. 항생제 내성 균주 (E. coli, S. aureus)는 항생제 내성균주 은행으로부터 획득하였다 Ca-alginate bead를 인위적 biofilm으로 사용하였고, 세포 생존률을 향상시키기 위해 공기 압축을 이용한 세포 포획 실험도 측정되었다. biofilm의 항생제 감수성은 항생제의 농도 따라 최저 저해 농도 (MIC)를 이용하여 측정되었다. bead생성에 따른 안정성은 bead를 형성하지 않은 세포와 비교하여 감소하였다. 항생제에 민감한 E. coli의 경우 시간이 지남에 따라 균체수도 감소하였으나, 항생제 내성 E. coli는 일정한 균체수를 유지하였다. bead형성 후 항생제 투여 효과는 항생제 내성이 있고, 낮은 농도의 항생제를 처리할수록 더 높은 생존률을 보였다.
Gentamicin에 저항성을 나타내는 세균을 병원 하수로부터 분리하여 aminoglycoside-(3)- N-acetyltransferase를 암호화하는 유전자인 aac(3)II의 존재여부를 dot-blot hybridization으로 조사하였다. aac(3)II유전자의 일부를 탐침으로 사용한 결과 gentamicin저항성 세균의 41% (39/95)가 이 유전자를 가지고 있었다. aac(3)II와 Tn3에서 각각 설계된 primer를 사용한 PCR 결과 aac(3)II를 가지고 있는 39개 균주 중 13개 균주가 TnS-aac(3)II구조를 가지고 있음을 알 수 있었다. aac(3)II의 상류에 Tn3를 가지고 있는 13개 균주의 gentamicin에 대한 최소억제농도는 가지고 있지 않은 균주에 비해 상대적으로 높았다. 13개 균주를 동정한 결과 5개는 Eschelichia coli, 3개는 Acinetobacter johnsonii, Enterobacter agglomerans와 Micrococcus luteus가 각각 2개, 그리고 1개의 Pseudomonas facilis로 동정되었다. 이러한 결과들은 Tn3-aac(3)II구조가 gentamicin 저항성 세균들에서 널리 분포하고 있음을 말해준다.
An antimicrobial molecule was purified from centipede, Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch, by reverse phase-HPLC. Its molecular weight was determined to be 1208.5493 by using matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry. Total amino acid composition analysis revealed that it consists of E, G, P, V, L, F, and W. It exhibited a broad antimicrobial spectrum against not only Gram-negative, but also Gram-positive bacteria. Furthermore, it was found to have an antimicrobial activity against vancomycin resistant enterococci (VRE). It may be a useful molecule for a new antibiotic development, especially against drug-resistant bacteria. We suggest that it may playa role in the defense system of this animal. This is the first report of a peptidic antimicrobial substance from centipede.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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