We previously reported that p53 plays a role as a key regulator in the tetraploid G1 checkpoint, which is activated by actin damage-induced cytokinesis blockade and then prevents uncoupled DNA replication and nuclear division without cytokinesis. In this study, we investigated a role of Skp2, which targets CDK2 inhibitor p27/Kip1, in actin damage-induced tetraploid G1 arrest. Expression of Skp2 was reduced, but p27/Kip1 was increased, after actin damage-induced cytokinesis blockade. The role of Skp2 repression in tetraploid G1 arrest was investigated by analyzing the effects of ectopic expression of Skp2. After actin damage, ectopic expression of Skp2 resulted in DNA synthesis and accumulation of multinucleated cells, and ultimately, induction of apoptosis. These results suggest that Skp2 repression is important for sustaining tetraploid G1 arrest after cytokinesis blockade and is required to prevent uncoupled DNA replication and nuclear division without cytokinesis.
들뢰즈, 가타리는 "안티-오이디푸스"에서 프로이트, 라캉의 욕망론을 결핍으로서의 욕망인 관념론적 환상이라고 비판하면서 유물론적 욕망론의 가능성을 모색한다. 이들은 프로이트, 라캉이 욕망을 오이디푸스 가족 모델에 가두고, 욕망의 리비도의 흐름을 차단했다고 비판한다. 이 글은 욕망에 대한 정신분석 계열과 분열분석 계열의 해석이 상이한 이유를 이들의 주요 개념 가운데, '억압'과 '무의식'에 대한 해석의 차이에서 찾는다. 그에 따라 우선 프로이트, 라캉의 억압의 양상을 살피고, 이들이 보지 못한 '심리적 억압'과 '사회적 억압'의 구별의 유의미를 들뢰즈, 가타리의 해석에 따라 추적한다. 그 다음, 프로이트, 라캉은 무의식을 정신 활동의 방어 기제에 의해 축출된 영역이나, 언어처럼 구조화된 무의식의 차원으로 이해한다. 이에 반해 들뢰즈, 가타리는 이들의 무의식에 대한 해석과 전혀 다르게 접근한다. 이 글은 이들의 무의식에 대한 다양하고도 새로운 해석 가운데, 특히 고아인 무의식, 생산적 무의식, 분자적 무의식을 집중해서 분석한다. 결론적으로 무의식에 대한 새로운 해석에 따라 욕망과 억압의 문제도 전혀 다르게 볼 수 있음을 보이고자 한다. 이들의 분열분석이 과연 현실에서 어떻게 적용 가능한지에 대한 실천적 적용 가능성을 탐색해 보고자 한다.
담자성 효모인 Trimorphomyces papilionaceous 는 생장에 thiamine 을 요구하는 최적배양온도는 25.deg.C 이며 넓은 범위의 pH (4.0-7.0) 에서 잘 자랐고 최소배지네 여러가지 탄소원을 가하고 (1%) 배양하여 균의 생장과 laccase 의 역가를 조사하였다. Glucose, frutose, mannose, sucrose 와 xylose 배지에서 OD 0.8 이상으로 자랐고 (A group), galactose 와 gluconate 의 경우 OD 0.3-0.6 (B group), 그리고 arbinose, lactose 와 pyruvate 배지에서 CD0.1-0.2 를 보였다. (C-group), Ribose, acetate, citrate, lactate 와 oxaloctate 는 이용하지 못하였다. Laccase 는 C group 배지에서 가장 높은 역가를 보였고 (8 u 이상), B group 배지에서 4-6 unit, A group 배지의 경우 가장 낮은 1.5 unit 이하를 보였다. 이균을 glucose 와 arabinose 가 혼합된 배지에 배양할 경우 laccase 는 catabolite repression 에 의하여 조절되었다.
토양에서 분리 동정한 phenylalanine 생산균인 Intrasporangium속 방선균의 phenylalanine 생합성 분지경로의 대사조절 특성을 조사하기 위해 chorismate mutase와 prephenate dehydratase를 부분정제한 결과 chorismate mutase는 prephenate dehydratase와 전혀 별개의 단백질로서 두 종의 isoenzyme, chorismate mutase I (CM I)과 chorismate mutase II (CMII)로 구성되어 있음을 알았다. CMI은 최종대사산물인 L-phenylalanine, L-tyrosine 및 L-tryptophan에 대해 완전내성을 보였으나 CMII는 1.5mM tyrosine에 의해서 약 50% 활성 저해를 나타내었다. 이에 비해 prephenate dehydratase는 0.02 mM phenylalanine 존재하에서 95% 이상의 활성 저해를 나타냈으나 이와 같은 L-phenylalanine 활성 저해효과는 positive effector인 L-tyrosine과 L-methionine에 의해 크게 감소되었다. 또한 chorismate mutase 생합성은 feedback repression을 받지 않는데 비해 prephenate dehydratase는 1mM phenylalanine 존재에 의해 약 94%의 효소합성 저해를 나타냈다. 그러나 5mM tyrosine을 동시에 첨가했을 때는 전혀 저해효과를 인식할 수 없었다. 따라서 Intrasporangium속 방선균 역시 대다수의 다른 미생물 균종과 마찬가지로 phenylalanine 분지 경로에서 prephenate dehydratase에 의해 촉매되는 두번째 반응이 가장 중요한 대사조절 단계가 되고 있다는 것을 알 수 있었다.
본 연구에서 갈락토즈를 거의 사용하지 않고 glucose repression 정도가 줄어든 변이주를 이용하여 fed-batch를 통한 발현최적화를 수행하였다. 두 균주에서의 GAL promoter에 의한 외래단백질 생산시 glucose repression 정도에 대해 조사하였는데 대조구 Y2805는 글루코즈가 다 소비된 후 2∼3시간 지난 후 발현이 시작되나 변이주 Y334는 약 0.5 g/L 글루코즈 농도에서 25%정도의 발현이 이루어짐에 따라 변이주 Y334는 GAL promoter에 미치는 glucose repression 정도가 매우 약한 장점을 확인하였다. 배양 중 재조합 미생물인 두균주 변이주 Y334와 대조구 효모 Y2805의 plasmid stability에 대해 안정한 균주임을 알 수 있었으며 대조구 Y2805의 경우도 plasmid stability는 90%로 유지됨을 알 수 있었다. GAL promoter에 의한 외래 단백질 생산시 글루코즈와 갈락토즈, 에탄올의 소비속도를 조사하였는데, 글루코즈와 에탄올의 소비속도는 거의 비슷하였으나 갈락토즈 소비속도는 Y2805는 0.1232 g/L/hr/O.D.이고 변이주 Y334는 0.0131 g/L/hr/O.D. 이다. 또한 mutant Y334와 대조구 효모 Y2805의 Fed-batch 시의 올바른 feeding 방법을 구하기위한 실험을 수행하여 각 균주의 Fed-batch 실험에서의 최적 발현 방법을 획득하였다.
The internal regions of nuclear small subunit rRNA from 6 plaeurotus species and 5 Pleurotus ostreatus strains were amplified by PCR and sequenced. The DNA sequences of 8 Pleurotus strains (P. ostreatus NFFA2, NFFA4501, NFFA4001, KFFA4001, KFCC11635, P florida, P. florida, P. sajor-cuju, P. pulmonarius, and P. spodoleucus) were idential, but P. cornucopiae differed from them in two bases out of 605 bases. However, p[hylogenetic analysis of the sequences by DNA-distance matrix and UPGMA methods showed that P. ostreatus NFFA2m1 and NFFA2m2, known as mutants of P. ostreatus NFFA2, belonged to anther group of Basidiomycotina, which is close to the genus Auricularia. The difference of the SSU rDNA sequences of P. cornucopiae from other Pleurotus species tested corresponds to the difference of mitochondrial plasmid type present in Pleurotus species as observed by Kim et al. (1993, Korean J. Microbiol. 31, 141-147).ishement of silencing at the HMR/hsp82 locus can occur in G1-arrested cells. Cell cycle arrest at G1 phase was achieved by treatment of early log a cell cultures with .alpha.-factor mating pheromone, which induces G1 arrest. The result suggests that passage through S phase (and therefore DNA replication) is nor required for re-establishing silencer-mediated repression at the HMNRa/HSP82 locus. Finally, to test whether de nono protein synthesis is required for re-establishment of silencer-mediated repression, cells were pretreated with cycloheximide (500 /.mu.g/ml) 120 min. It was apparent that inhibiting protein synthesis delays, but does not prevent, re-establishment of silencer-mediated repression. Altogether, these results indicate that re-establishment of silencer-mediated repression is not dependent on the DNA replication and has no requirement for protein synthesis.
이 연구는 효모 세포를 catabolic repression과 derepression시켰을 때, poly-P 합성 및 분해에 직접 관련된 tripoly-Pase와 poly-Pase의 활성도 동태를 조사하여 세포내 인산 대사 조절양상을 해석하고자 하였다. 또 TLC 방법을 통하여 무기 폴리인산을 분석하고, 배양시기 및 인산 첨가배양에 따른 무기폴리인산의 세포내 축적 상태, 세포내 위치, 전환과정을 조사하기 위해 염색을 통한 volutin 과립의 세포학적 관찰을 행하였다. Tripoly-Pase 활성도는 catabolic repression시킨 세포에서 derepression된 세포에 비하여 6배 이상 증가하였으며, poly-Pase 활성도는 산 불용성 무기폴리인산인 poly-P-"B"가 최대 축적량을 나타날 시기에 최대의 활성도를 보였다. Linear poly-P의 분석에서는 tripoly-P가 주로 검출되었고 n>8이상인 poly-P가 다량 검출되었다. catabolic derepression시킨 세포에서 volutin과립의 형성을 세포학적으로 관찰하였을 때, 세포벽에 존재하는 산 불용성 무기 폴리인산이 우선적으로 합성되었으며, 배양함에 따라 세포질, 핵 또는 액포로 전이되었다.
염소 베타-락토글로불린 유전자 프로모터의 유선 조직 특이성은, 비 발현 세포에서 -470 에서 -205 부위에 의해서 매개되는 억제 조절에 의해서 보증된다. 이 음성 조절 기작과 억제 조절을 매개하는 인자를 확인하기 위하여 상류 염기 서열을 자세히 분석하였다. 상류 염기 서열은 어느 방향으로 위치하든 연결된 베타-락토글로불린 유전자 프로모터의 활성을 억제할 수 있었다. 이와 같이 규명된 염소 베타-락토글로불린 유전자의 잠정적 음성 조절 인자는 다른 유전자의 프로모터들에 대해서는 다양한 활성을 보였는데, herpes simplex 바이러스의 thimidine kinase 프로모터는 상류 염기서열의 방향에 따라 억제 또는 활성화되었으며, SV40 프로모터는 억제되기보다는 오히려 활성화되었다. 염소 베타-락토글로불린 유전자의 억제 조절 인자를 포함하는 조절 부위는 비 유선 세포인 HeLa 및 CV-1 세포에서 추출된 핵 추출물에 의해서 이동성이 강력하게 지연되는 반면, 유선세포인 HC11 세포의 핵 추출물에 의해서는 약하게 지연되었다. 이와 같은 활성 억제와 인자 결합간의 연관성은 foot-printing 분석에서 관찰된 결합 부위가 염소의 베타-락토글로불린 유전자의 조직특이적 억제에 작용할 음성 조절 인자일 가능성을 시사한다.
In this study, repression of the body is defined as a restriction on natural developments or movements and a modification either temporarily or permanently of the human body in shape, color, texture and odor. In addition, it involves physical and (or) mental pain. Chinese foot-binding and the Western corset are extreme examples of female body's being repressed in the history of fashion. The analysis of this type of repression will be based on historical research and theoretical concepts such as Darwin's (1809-1882) survival condition, Freud's (1856-1939) renunciation of desire, Weil's (1909-1943) privilege, and Foucault's (1926-1984) L'Usage des Plaisirs(the use of pleasure). Chinese foot-binding symbolically represents ideal beauty, the distinction of an ethnic group, and a desire for improved social status in the struggle for political power. It also represents psychology and a esthetics of eroticism and fetishism that originate from a man's desire and his individual taste. Symbolically, the Western corset represents abundance and fecundity, obedience and devotion to religion, the sanctity of God and ideal beauty as defined by political power. It also represents psychology and aesthetics of eroticism and fetishism as man's desire and a fashion icon. In conclusion, Chinese foot-binding was pursuit of power in male ideology but Western corset was a power struggle between God and mankind.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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