• 제목/요약/키워드: Reporter

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다양한 진핵생물 세포에서 전사 연구에 사용될 수 있는 Luciferase Reporter Plasmid의 개발 (Versatile Luciferase Reporter Plasmids for Transcription Studies in Diverse Eukaryotic Cells)

  • 조영석;한동욱;백금희;박승필;윤상순;임운기;김정락;김한도;강호성
    • 한국동물학회지
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    • v.39 no.4
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    • pp.378-386
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    • 1996
  • 우리는 두 가지의 새로운 luciferase reporter plasmid를 개발하였는데 그 하나는 이 plasmid에 promoter조각을 삽입한 다음에 그 promoter의 활성을 측정하는 용도로 사용 될수 있고, 다른 하나는 매우 낮은 basal promoter 활성을 갖고 있기 때문에 진핵생물의 전사 조절인자의 연구에 도움이 될 수 있다. 후자의 reporter plasmid에는 17염기쌍의 initator 와 Spl,GAL4그리고 일부 Drosophila homeodomain protein의 결합우뷔에 해당하는 cis elements등을 들어 있다.그리고 tranciption termination을 촉진할 수 있는 signal을 initiator앞서 삽입하여 이런 reporter plasmid에 존재할 수 있는 cryptic promoter에서 시작된 transcript가 luciferase reporter cDNA로 진행되는 것을 방지하는 개선된 reporter plasmid를 제조하여 promoter활성을 Drosophila Schneider line 2 cells을 이용한 transient transfection assay방법으로 측정하였다. 여기에 사용한 termination 촉진 signal은 SV40 polyadenylation signal의 3연속 조각(AAA)과 tenscription termination signal이 포함된 것으로 믿어지는 mouse c-mos 유전자의 일부조각 (UMS)이다. 기대한으로 이 두가지의 signal을 삽입하였을 때 basal promoter활성이 최대한으로 감소하였으며 이 두 가지 signal을 삽입된 reporter plasmid를 사용하여 promoter의 활성을 보다 sensitive하게 측정하였다. 이 reporter plasmid는 Droiophlla melanogaiter뿐만 아니라 포유동물을 포함한 고등생물의 전사 조절인자 연구의 한 도구로 사용될 수 있을 것이다.

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저산소유도인자 HIF-1, 암 억제인자 P53과 고아 핵수용체 Nur77의 발현을 지표로 하는 발암독성예측 세포주의 개발 (Establishment of Reporter Cell Lines that Monitor Activities of Hypoxia Inducible Factor-1, P53 and Nur77 for Assessment of Carcinogenicity)

  • 홍일;서희원;이민호;김지원;정진호;이병훈;이미옥
    • Toxicological Research
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    • v.23 no.3
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    • pp.231-238
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    • 2007
  • Evaluation of potentials of chemicals to alter expression of genes that are involved in carcinogenesis may serve useful tools in toxicological research. In this investigation, we developed reporter cell lines that expressed luciferase in response to transactivation of hypoxia inducible factor-1, P53 tumor suppressor and Nur77 of which roles have been well established in cancer development and progression. Whereas these reporter cell lines displayed low constitutive backgrounds, the reporter activities were significantly enhanced in response to $desferriosamine/CoCl_2$, adriamycin or 6-mercaptopurine, which are hypoxia mimicking chemicals, P53 activator or Nur77 inducer, respectively. The activation of the reporter was time- and dose-dependent. Known tumor initiators and promoters, such as phorbol 12-myristate 13-acetate and phorbol 12, 13-dicaprinate induced the reporter activity at as low as 10nM in these stable cell lines. Further, known anti-tumor promoters, such as ascorbic acid and ${\beta}-carotene$ repressed the reporter activities. These results indicate that our stable reporter cell lines could serve as a useful system for rapid assessment of carcinogenicity of toxic chemicals.

The art of reporter proteins in science: past, present and future applications

  • Ghim, Cheol-Min;Lee, Sung-Kuk;Takayama, Shuichi;Mitchell, Robert J.
    • BMB Reports
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    • v.43 no.7
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    • pp.451-460
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    • 2010
  • Starting with the first publication of lacZ gene fusion in 1980, reporter genes have just entered their fourth decade. Initial studies relied on the simple fusion of a promoter or gene with a particular reporter gene of interest. Such constructs were then used to determine the promoter activity under specific conditions or within a given cell or organ. Although this protocol was, and still is, very effective, current research shows a paradigm shift has occurred in the use of reporter systems. With the advent of innovative cloning and synthetic biology techniques and microfluidic/nanodroplet systems, reporter genes and their proteins are now finding themselves used in increasingly intricate and novel applications. For example, researchers have used fluorescent proteins to study biofilm formation and discovered that microchannels develop within the biofilm. Furthermore, there has recently been a "fusion" of art and science; through the construction of genetic circuits and regulatory systems, researchers are using bacteria to "paint" pictures based upon external stimuli. As such, this review will discuss the past and current trends in reporter gene applications as well as some exciting potential applications and models that are being developed based upon these remarkable proteins.

Construction of a Bioluminescent Reporter Using the luc Gene and meta-Cleavage Dioxygenase Promoter for Detection of Catecholic Compounds

  • Park, Sang-Ho;Lee, Dong-Hun;Oh, Kye-Heon;Kim, Chi-Kyung
    • Journal of Microbiology
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    • v.38 no.3
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    • pp.183-186
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    • 2000
  • Several types of bioluminescent reporter strains have been developed for the detection and monitoring of pollutant aromatics contaminating the environment. In this study, a bioluminescent reporter strain, E. coli SHP3, was constructed by fusing the luc gene of firefly luciferase with the promoter of pcbC responsible for the meta-cleavage of aromatic hydrocarbons. the bioluminescence expressed by the luc gene in the reporter was well triggered by the promoter when it was exposed to 2,3-dihydroxybiphenyI (2,3-DHBP) at 0.5 to 1 mM concentrations. The bioluminescent response was more extensive when the reporter strain was exposed to 5 mM catechol and 2 mM 4-chlorocatechol. These different types of bioluminescent responses by E. coli SHP3 appeared to be characterized by the nature of the aromatics to stress. Since E. coli SHP3 responded to 2,3-DHBP quite sensitively, this reporter strain could be applied for detecting some catecholic pollutants.

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전문기자와 시민기자 블로그 콘텐츠의 저널리즘적 특성에 관한 비교 연구: 감시견과 상호작용성을 중심으로 (Journalistic Differences between Blogs of Professional Reporter and Citizen Reporter: Focused on Watchdog and Interactivity)

  • 김민하;신윤경
    • 한국언론정보학보
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    • v.53
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    • pp.73-99
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    • 2011
  • 이 연구는 사회 감시견과 상호작용성의 차원에서 살펴 본 기자 블로그의 저널리즘적 특성이 전문기자 블로그와 시민기자 블로그 간에 어떻게 다르게 나타나는지를 비교 분석하였다. 사회의 감시견은 블로그 콘텐츠의 연성화 정도와 내용에 반영된 언론과 정부와의 관계의 측면에서 분석하였고, 상호작용성은 댓글 분석을 통해 규명하였다. 분석대상은 대표적인 시민기자 신문인 <오마이뉴스>와 이와 유사한 이념적 지향성을 지닌 <한겨레>의 전문기자 블로그다. 분석 결과, <오마이뉴스> 시민기자 블로그의 게시물이 <한겨레> 전문기자 블로그 게시물 보다 연성뉴스를 더 많이 다루고 있었으나 정부와 상호 비판적인 견제관계를 유지하는 경향이 상대적으로 강하게 드러나 시민기자 블로그와 전문기자 블로그가 서로 다른 측면에서 사회 감시견의 특성을 보여준다는 사실이 드러났다. 그리고 기자 블로그 게시물에 달린 댓글을 분석하여 파악한 상호작용성은, 댓글의 단순한 상호작용은 <오마이뉴스>에서 더 활발하게 이루어졌으나, 소통적 상호작용은 <한겨레>에서 더욱 강하게 나타난다는 결과를 얻었다.

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KBS 기자의 직업적 성취에 관한 주관성 탐색 (Exploring Subjectivity Concerning Occupational Achievements of KBS Journalists)

  • 정제혁;유상원
    • 한국콘텐츠학회논문지
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    • v.21 no.1
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    • pp.227-242
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    • 2021
  • 공영방송 KBS를 비롯해 한국 언론인들의 전문직주의는 미성숙 상태라는 평가가 일반적이다. 본 연구는 Q 방법론을 활용하여, 기자의 직업적 성취에 대하여 KBS 기자들과 시민들이 형성하고 있는 주관성을 탐색하였다. 이를 통해 한국 언론전문직주의 미성숙 상태에 관한 언론인의 주관성 차원의 배경과 이유를 파악하고자 하였다. KBS 기자 30명과 4년제 대학 언론고시반 대학생 10명, 그리고 다양한 연령대의 일반인 40명, 총 80명을 상대로 기자의 직업적 성취와 관련된 내용의 95개의 진술문을 활용하여 '승진/발탁되는 기자'를 조건으로 소팅을 진행하여 총 3개의 Q 요인을 추출하였고, 이를 다시 각 요인별 양(+) 하부 요인과 음(-) 하부 요인으로 구분하여 총 6개의 기자에 대한 인식과 태도 유형을 발견하였다. 그 결과 KBS 기자의 직업적 성취에 관한 주관성은 '전문직형 기자', '모사꾼 기자', '조직충성형기자', '열혈기자', '입신양명기자', '착실한 직업인'으로 명명된 6개의 인식 유형으로 정리되었다. 본 연구는 기존 한국 기자의 직업 정체성 연구를 더욱 심화시키고 확장시켰다는 데 의의를 가질 수 있다.

유전자 발현 영상기법 (Imaging Gene Expression)

  • 이경한
    • 대한핵의학회지
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    • v.34 no.1
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    • pp.1-9
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    • 2000
  • The rapid progress of molecular genetic methods over the past two decades has necessitated the development of methods to detect and quantify genetic activity within living bodies. Reporter genes provide a rapid and convenient tool to monitor gene expression by yielding a readily measurable phenotype upon expression when introduced into a biological system. Conventional reporter systems, however, are limited in their usefulness for in vivo experiments or human gene therapy because of its invasive nature which requires cell damage before assays can be performed. This offers an unique opportunity for nuclear imaging techniques to develope a novel method for imaging both the location and amount of gene expression noninvasively. Current developments to achieve this goal rely on utilizing either reporter enzymes that accumulate radiolabeled substrates or reporter receptors that bind specific radioligands. This overview includes a brief introduction to the background for such research, a summary of published results, and an outlook for future directions.

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네트워크 CCTV와 스마트 단말기를 연동한 이동체 추적 시스템 (Moving Object Tracing System using Network-connected CCTV and Smartphone)

  • 임승균;이상욱
    • 한국콘텐츠학회논문지
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    • v.13 no.12
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    • pp.519-529
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    • 2013
  • 본 논문에서는 네트워크 CCTV와 스마트 단말기를 연동한 이동체 추적 시스템을 소개한다. 긴급 상황 발생 시 신고자의 단말기는 GPS 위치 정보를 획득하고 이를 중앙 서버로 전송한다. 중앙 서버는 신고자 위치를 위험지역으로 저장하고 신고자 촬영이 가능한 CCTV를 선택하여 추적촬영 명령을 한다. 동시에 보호자 및 유관기관에 신고자의 CCTV영상을 전송하여 신속한 대처를 할 수 있게 한다. 신고자가 주변 및 목적지의 위험 여부를 알고 싶을 때 중앙 서버에서 위험지역 정보를 알려줌으로써 신고자 스스로 안전을 도모할 수 있도록 한다.

Development of a Reporter System for In Vivo Monitoring of γ-Secretase Activity in Drosophila

  • Hong, Young Gi;Roh, Seyun;Paik, Donggi;Jeong, Sangyun
    • Molecules and Cells
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    • v.40 no.1
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    • pp.73-81
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    • 2017
  • The ${\gamma}$-secretase complex represents an evolutionarily conserved family of transmembrane aspartyl proteases that cleave numerous type-I membrane proteins, including the ${\beta}$-amyloid precursor protein (APP) and the receptor Notch. All known rare mutations in APP and the ${\gamma}$-secretase catalytic component, presenilin, which lead to increased amyloid ${\beta}$-peptide production, are responsible for early-onset familial Alzheimer's disease. ${\beta}$-amyloid protein precursor-like (APPL) is the Drosophila ortholog of human APP. Here, we created Notch- and APPL-based Drosophila reporter systems for in vivo monitoring of ${\gamma}$-secretase activity. Ectopic expression of the Notch- and APPL-based chimeric reporters in wings results in vein truncation phenotypes. Reporter-mediated vein truncation phenotypes are enhanced by the Notch gain-of-function allele and suppressed by RNAi-mediated knockdown of presenilin. Furthermore, we find that apoptosis partly contributes to the vein truncation phenotypes of the APPL-based reporter, but not to the vein truncation phenotypes of the Notch-based reporter. Taken together, these results suggest that both in vivo reporter systems provide a powerful genetic tool to identify genes that modulate ${\gamma}$-secretase activity and/or APPL metabolism.

The Rat Myosin Light Chain Promoter-Driven DsRed Reporter System Allows Specific Monitoring of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell- Derived Cardiomyocytes

  • Choi, Seung-Cheol;Lim, Do-Sun
    • Reproductive and Developmental Biology
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    • v.32 no.1
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    • pp.21-25
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    • 2008
  • Bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) have the capacity for self-renewal and differentiation into a variety of cell types. They represent an attractive source of cells for gene and cell therapy. The purpose of this study is to direct the specific expression of the DsRed reporter gene in $Sca-1^+$ BMMSCs differentiated into a cardiomyogenic lineage. We constructed the prMLC-2v-DsRed vector expressing DsRed under the control of the 309 tp fragment of the rat MLC-2v 5'-flanking region. The specific expression of the DsRed reporter gene under the transcriptional control of the 309 bp fragment of the rat MLC-2v promoter was tested in 5-azacytidine healed-$Sca-1^+$ BMMSCs over 2 weeks after the prMLC-2v-DsRed transfection. The prMLC-2v-DsRed was specifically expressed in the $Sca-1^+$ BMMSCs with cardiomyogenic lineage differentiation and it demonstrates that the 309 bp sequences of the rat MLC-2v 5'-flanking region is sufficient to confer cardiac specific expression on a DsRed reporter gene. The cardiac-specific promoter-driven reporter vector provides an important tool for the study of stem cell differentiation and cell replacement therapy in ischemic cardiomyopathy.