This experiment was carried out in order to estimate the recovery days of root and stubble to the days after cutting, and contribution of specific stubble weight on the regrowth was examined using the relationships between the dry weight of shoot and yield components, and regrowth parameters by the days after cutting. The varieties examined were Maprima, Manhattan, Tove, Peramo, Caliente, Tempo and P-2 grown under individual plant basis. The results are may be summarized as follows: 1. Dry weight of root and stubble were recovered up to 13.5 and 11 days after cutting, respectively. 2. Dry weight of shoot(regrowth parts+stubble) was affected significantly by the varieties, stages of regrowth and variety x stage of regrowth. 3. The variety with tiller weight type showed higher average productivity of shoot than those of the variety with tiller number type. 4. Absolute growth rate(AGR) of shoot was correlated significantly with regrowth parts, stubble, root and weight of a tiller at the early stage of regrowth(up to 12 days after cutting), and correlated with regrowth parts, stubble, weight of tiller and stubble area at the late stage of regrowth(up to 20 days after cutting). 5. Contribution of specific stubble weight to absolute growth rate of shoot was different between the stages of regrowth. Thus, regrowth parts per specific stubble weight(RP1SSbW) and weight of tiller per specific stubble weight(WT1SSbW) contributed to absolute growth rate of shoot at the early stage of regrowth, and efficiency of specific stubble weight(ESSbW), regrowth parts per specific stubble weight (RPISSbW) and weight of a tiller per specific stubble weight(WT1SSbW) contributed to absolute growth rate of shoot at the late stage of regrowth. 6. Regrowth utilization rate(RUR) was one of the useful regrowth parameter to indicate the regrowth potential of grasses.
An expreiment with non-nodulating alfalfa (Medicago sativa L.) plants was designed to investigate the changes in protein contents and the activities of proteolytic enzymes during a regrowth period of 24 d. Shoot removal caused a depression of root growth and significantly reduced protein contents in roots. An initial decline of root proteins for the first 10 d was followed by a rapid recovery from d 11 to 24. The major increase of regrowing shoot weight occurred also from d 11. The activities of aminopeptidase and endoprotease slightly decreased in regrowing leaves, while protein contents remains stable after shoot removal. Roots exhibited source behaviour with a rapid increase of endoprotease activities for the first 10 d of regrowth; about a 370% increase over the initial level was observed. Increase in endoprotease activity in roots coincided with the time of protein remobilization after shoot removal, indicating the important role of endoproteases in protein degradation.
In this study, cryopreservation by droplet-vitrification was applied to pear (Pyrus spp.) germplasm. We focused on the development and assessment of various strategies for the selection of suitable tissue, osmoprotection, and dehydration. We also evaluated post-thaw recovery of cryopreserved explants by droplet-vitrification. Preferentially, we tested the effects of preculture and loading treatments to determine which tissues were more suitable, either the apical shoot tips or the axillary buds. Apical shoot tips showed the better regrowth rate than in vitro axillary buds. The most effective techniques for cryopreservation were as follows. Shoots from in vitro seedlings which had been cultured for about 5-6 weeks were cold-hardened at 4℃ for one week, excised shoot tips were precultured on liquid MS medium including 0.3 M sucrose for 31 hours and 0.7 M sucrose for 17 hours, osmoprotected in loading solution (LS) for 40 min, and then cryoprotected in dehydration solution (PVS3) for 90 min. In addition, we found that regrowth rates of explants on regrowth medium after exposure to liquid nitrogen (LN) were higher than those on MS medium. Results indicated that the highest regrowth percentage was 95.6% for 'Bartlett' cultivar and 68.9% for 'BaeYun No.3' cultivar. Consequently, apical shoot tips of two pear cultivars, 'Bartlett' (P. communis) and 'BaeYun No.3' (P. pyrifolia), were successfully cryopreserved by droplet-vitrification. Results of this study show that the enhanced droplet-vitrification method described in the present study could be used as an effective means for long-term storage of pear genetic resources.
Jinjoo Bae;Jae-Young Song;Ji-Won Han;Ho Cheol Ko;Sung-Hee Nam;Jung-Ro Lee;Ho-sun Lee
한국자원식물학회지
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제36권6호
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pp.562-570
/
2023
The droplet-vitrification technique for cryopreservation has proven successful across a diverse range of germplasm, ensuring safe and effective long term preservation. In this study, we investigate an effective cryopreservation protocol using the droplet-vitrification technique for shoot tips of Freesia hybrida cultivars 'Sunny Gold' and 'Sweet Lemon'. To determine optimal conditions for Freesia cryopreservation, we employed a carefully selected standard procedure along with additional treatments and alternative solutions. For 'Sunny Gold', the highest regrowth rate of 24% was achieved when shoot tips underwent dehydration with PVS3 solution for 120 minutes before direct immersion in liquid nitrogen (LN) for 1 hour, coupled with a standard protocol involving a two-step preculture with 0.3 M - 0.5 M sucrose, loading with C4 for 40 minutes, and unloading with 0.8 M sucrose for 40 minutes. In the case of 'Sweet Lemon,' regrowth of cryopreserved shoot tips was observed with dehydration treatments, including PVS2 (A3) for 60 minutes and PVS3 (B1) for 60 minutes, as well as longer exposure. The results reflect the distinct sensitivity of shoot tips to chemical toxicity and osmotic stress in these two genotypes. This study provides valuable evidence to consistently enhance the effectiveness of cryopreservation methods for the long-term conservation of Freesia germplasm.
Cryopreservation method using a droplet vitrification was applied to the thirty-one strawberry accessions of in vitro grown shoot tips. A protocol with 0.3 - 0.5 M preculture followed by C4 loading and B1 dehydration solutions efficiently implemented cryopreservation of twenty-six strawberry accessions. The highest regrowth rate was 85.8% for PHS0007 and others were ranged between 85.8% and 21.0%. A slightly modified protocol was applied to five accessions. With these two protocols, twenty-eight accessions obtained more than 40% regrowth rate. This study showed that the droplet vitrification method was able to practically implement cryopreservation of in vitro grown shoot tips of broad range of strawberry germplasm (105).
This study describes an efficient and widely applicable droplet-vitrification following cryopreservation for shoot tips of strawberry (Fragaria × ananassa Duch.) cvs. 'Wonkyo3114' and 'Gurumi40'. The shoot tips were precultured in Murashige and Skoog (MS) liquid medium supplemented with sucrose (0.3-0.5M). Precultured explants were osmoprotected with loading solution (LS, C4) containing 20% glycerol and 20% sucrose for 40 min and exposed to dehydration solution (B5) containing 40% glycerol and 40% sucrose for 40 min at 25℃, Subsequently, the explants were transferred onto droplets containing 2.5 μL PVS3 on sterilized aluminum foils (4 cm × 0.5 cm) prior to direct immersion in liquid nitrogen (LN) for 1 h. The highest regrowth rate (%) in both the cultivars was obtained when the shoot tips were precultured with MS + 0.3M sucrose for 40 h at 25℃. The cryopreserved shoots tips exhibited 55% regrowth rate by culturing in NH4NO3-free MS medium supplemented with 3% sucrose, 1.0 g/L casein, 1.0 mg/L GA3, and 0.5 mg/L BA for 5 weeks and in MS medium supplemented with 0.5 mg/L GA3 for 8 weeks. This result shows that droplet-vitrification could be employed as a promising method for cryostorage of strawberry germplasm.
The goal of this research was to develop an efficient cryopreservation protocol for germplasms of yam (Diosorea batatas), that were cultivated in Korea. Comparative studies with four other cryogenic techniques and subsequent experiments for shoot regrowth were conducted. in vitro-grown shoot-apices of the D. batatas were successfully cryopreserved by encapsulation-dehydration. The maximum survival of shoot-apices could be achieved when the precultured (with 0.3 M of sucrose for one day) and encapsulated (with a 3%(w/v) Na-alginate solution) apices were dehydrated for $3.5{\sim}4\;h$ prior to direct immersion in LN (liquid nitrogen). The frequency of regrowth rate of cryopreserved apices was not decreased during 3-month storage period. The thawing method markedly affected survival of the cryopreserved apices, and thawing at $40^{\circ}C$ for 3 min produced the best results. When cryopreserved apices were post-cultured on the post-culture medium (MS), supplemented with $0.2mgl^{-1}$ of BA ($N_6$-benzyladenine) and $0.2mgl^{-1}$ of kinetin, they showed direct shooting without callusing.
Sweet potato (Ipomoea batatas L.) shoot tips grown in vitro were successfully cryopreserved by encapsulation-vitrification. Encapsulated explants are very easily manipulated, due to the relatively large size of the alginate beads, and a large number of samples can be treated simultaneously. In this study, the effects of sucrose preculture, cryoprotectant preculture, and post-warm recovery media on regrowth, following liquid nitrogen (LN) exposure, were investigated to establish an efficient encapsulation-vitrification protocol for sweet potato. Shoot tips of plants grown in vitro were precultured in 0.3 M sucrose for 2 d before encapsulation. Encapsulated shoot tips were pre-incubated in liquid MS (Murashige and Skoog) medium containing 0.5 M sucrose for 16 h, before preculturing in sucrose-enriched medium (0.7 M sucrose) for 8 h. Shoot tips were osmoprotected with 35% plant vitrification solution 3 (PVS3) for 3 h, before being dehydrated with PVS3 for 2 h at $25^{\circ}C$. The encapsulated and dehydrated shoot tips were transferred to 2 mL cryotubes, suspended in 0.5 mL PVS3, and plunged directly into liquid N. High levels of shoot formation were obtained for the cv. Yeulmi (65.7%) and Yeonwhangmi (80.3%). The regrowth rates of cryopreserved samples in Yeulmi (78.9%) and Yeonwhangmi (91.3%), following culture on ammonium-free MS medium for 5 d, were much higher than those cultured on standard MS medium (65.7% and 80.3%, respectively). This encapsulation-vitrification is a promising method for the long-term preservation of sweet potato.
본 연구는 태풍에 의한 참다래 (골드러쉬) 조기 낙엽이 무착과 유목의 액아 발아와 착화에 미치는 영향을 분석하기 위해서 7, 8, 9, 및 10월에 인위적인 적엽처리를 하였다. 먼저 당해연도 액아의 재발아는 7월 적엽처리에서는 무처리의 23.2%와 마찬가지로 높은 재발아율을 나타냈다. 또한 8월의 경우 무처리의 재발아율은 5.8%로 낮았지만 적엽처리구는 17.23%의 높은 재발아율을 나타냈다. 하지만, 9월 적엽처리는 무처리의4.2%와 비슷한 낮은 재발아율을 나타냈으며, 10월 적엽처리에서는 재발아가 전혀 되지 않아 액아가 완전히 휴면에 진입한 것으로 판단되었다. 적엽처리에 의한 익년 착화율은 적엽시기와 적엽률에 따라 큰 영향을 받았다. 적엽 시기 중 7, 8, 9월에 75% 및 100% 적엽처리구는 무처리에 비해 유의성 있는 착화율 감소를 보인 반면, 10월 적엽처리는 적엽률에 관계없이 착화율에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 그리고 착화 신초 한 개에 맺히는 꽃봉오리 수의 경우 75% 이상 적엽이 될 경우 무처리에 비해 절반 이하로 감소 되었다. 이와 같은 결과는 7월과 8월의 경우 적엽에 의해 꽃눈의 원기형성이 진행되어야할 액아의 재발아율이 높아 원기 형성이 감소했기 때문이며, 9월과 10월은 액아의 꽃눈 원기 형성은 어느 정도 이루어졌으나 광합성 산물 생산을 위한 잎의 부족 또는 부재로 저장양분 축적이 부족하여 이듬해 봄 꽃눈의 형태적 분화가 감소되었기 때문인 것으로 판단된다.
Carbohydrate and soluble protein reserves and regrowth characteristics in response to cutting height were investigated over four regrowth cycles of turf-type perennial ryegrass(Lolium perenne L. cv. preludeII). When the plants were at the full-vegetative stage (twelve weeks-old), three sequential defoliations at 3, 6 and 9 cm above the root base were imposed at 2-week intervals. Shoot dry weight in all three treatments continuously decreased with progressing regrowth cycle and the decreasing rate was higher as cutting height was lowered. TNC (total non-structural carbohydrate) in stubble at the end of the fourth regrowth cycle in 3, 6 and 9 cm cutting height decreased by 98%, 82% and 27%, respectively, comparing the initial content. TNC in roots also largely decreased with similar pattern in response to cutting height, whereas the absolute amount was much less compared to stubble. Soluble protein in stubble in 3, 6 and 9 cm cutting height decreased by 98%, 82% and 57%, respectively, at the end of fourth regrowth. A significant correlations between TNC (r=0.906) or protein (r=0.879) at the fourth defoliation and dry weight of regrowing shoots at the end of fourth regrowth were observed. these results indicated that cutting height closely influences the levels of organic reserves available for new growth, and that the levels of reserves might provide a useful tool as a determinant for regrowth dynamics.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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