Background Chitosan (CS) is a well-known antimicrobial dressing material. Moreover, widely used amniotic membranes contain growth factors beneficial for wound healing. Herein, we created a novel amnion-conjugated CS-alginate membrane dressing and tested its wound healing potency in a diabetic swine model. Methods The bovine amniotic powder growth factor contents were evaluated by protein assay, and the powder's wound healing effects were assessed in vitro by HaCaT cell scratch closure. In vivo, two minipigs developed streptozotocin-induced diabetes. Serial serum glucose measurements and intravenous glucose tolerance tests were performed to confirm their diabetic status. Twelve square-shaped wounds created on each pig's back were randomly divided into control (n = 4), CS (n = 4), and amnion-CS (AC; n = 4) groups and treated accordingly with different dressings. Wound healing in each group was assessed by measuring wound contraction over time, capturing wound perfusion with indocyanine green (ICG) angiography, and histologically analyzing inflammatory markers. Results Amniotic powder elution promoted HaCaT cell migration in the scratch wound model, suggesting its beneficial in vitro wound healing effects. In vivo, the CS and AC groups showed earlier wound contraction initiation and reepithelialization and earlier wound perfusion improvement by ICG angiography than the control group. Additionally, the wound size of the AC group at week 3 was significantly smaller than those in the control group. There was no significant difference in the numbers of acute and chronic inflammatory cells between the groups. Conclusion The amnion-conjugated CS-alginate membrane, as well as CS dressing alone, could be a favorable dressing option for diabetic wounds.
태아와 성체의 상처치유과정에서 다른 점으로는 태아 상처가 염증반응과 반흔조직의 생성이 없이 신속히 치유됨을 들 수 있다. 태자상처의 비반흔성 치유와 세포외기질의 역할을 연관지어 해석하려는 노력이 진행중에 있으나, 각 실험 동물종간의 차이 및 세포외기질 구성요소의 다양성등 많은 변수가 아직 미결의 과제로 남아 있다. 본 연구의 목적은 토끼 태자의 상처 치유과정에서 반흔조직의 형성과 관련이 있는 세포외기질의 주요성분인 교원질 I, III, IV, V형, fibronectin, laminin의 시기적 출현 및 분포양상을 조사하기 위한 것이다. 뉴질랜드산 횐 토끼를 임신 3기의 중반인 24일째에 자궁절개술을 시행하고 태자에 인위적으로 구순열상을 만든 후, 봉합한 군(봉합군)과 봉합하지 않은 군(비봉합군), 정상대조군(sham operation group)으로 나누고 이들을 각각 수술후 1, 2, 3, 5, 7일째에 희생시켜 상처치유에 대한 육안관찰 소견과 H & E 염색 소견 및 교원질 I, III, IV, V형, fibronectin, laminin의 면역조직화학적 염색 소견을 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 봉합군과 비봉합군에서 전기간동안 염증반응은 없었다. 2. 비봉합군의 재상피화가 봉합군에 비해 다소 느렸다. 3. 교원질 I, III, V형은 봉합군과 비봉합군에서 2일군까지는 발견되지 않았고 3일군이후 존재하였으나 염색정도가 인접정상조직이나 정상대조군에 비하여 증가하지 않았다. 4. 상피 기저막에서 교원질 IV형의 염색소견은 봉합군과 비봉합군에서 3일군이 다소 증가하였으나 그후 감소하여 인접정상조직이나 정상대조군과 차이가 없었고, laminin의 염색 소견은 봉합군과 비봉합군에서 5일군이후 발견되었고 염색정도의 증감없이 7일군까지 유지되었고 인접정상조직이나 정상대조군과 차이가 없었다. 5. 혈관내피세포 기저막에서 laminin과 교원질 IV형의 염색소견은 인접정상조직이나 정상대조군에 비해서 증가하지 않았다. 6. Fibronectin은 봉합군과 비봉합군에서 fibrin clot과 창상 기저부 및 창상연을 따라 3일군까지 염색소견이 증가하였다가 그후 감소하여 인접정상조직이나 정상대조군과 차이가 없었다.
연속형 $CO_2$ 레이저와 펄스형 $CO_2$ 레이저를 이용한 돼지 피부절개 시 창상 치유에 미치는 영향을 평가하고자 본 실험을 실시하였다. 다섯 마리의 돼지(Landrace x Yorkshire) (45-51 kg, 4-6 개월령, 수컷 3마리, 암컷 2마리)를 이용 하였고, 각각의 돼지에서 우측 및 좌측의 등쪽 피부에 대칭적으로 연속형 $CO_2$ 레이저와 펄스형 $CO_2$ 레이저를 이용하여 절개($2{\times}2{\times}2cm^2$) 하였다. 양측 피부 절개는 Maxon 3-0 를 이용하여 봉합하였다. 수술 후 3, 7, 14, 21일에 병리조직학적 검사를 실시하였다. 창상 부위의 재상피화는 연속형 $CO_2$ 레이저 군에 비해 펄스형 $CO_2$ 레이저군에서 더 많이 이루어졌다. 육아조직 형성은 창상후 경과일 3일에 펄스 $CO_2$ 레이저군에서 유의적으로 높게 나타났다(P < 0.05). 섬유아세포는 창상후 경과일 7일에 펄스형 $CO_2$ 레이져군에서 유의적으로 많게 형성되었다(P < 0.05). 결론적으로 피부절개 시에 있어서 펄스형 $CO_2$ 레이저는 연속형 $CO_2$ 레이저에 비하여 재상피화, 육아조직형성 및 섬유아세포가 더 높게 나타났으며, 레이저 시술에 따른 조직손상을 적게 나타내었다. 따라서 피부절개 시에 있어서 펄스형$CO_2$ 레이저가 연속형 $CO_2$ 레이저 보다 더 적합할 것으로 판단된다.
Purpose: Many topical agents had been used for burn or wound treatment. An awareness of topical agents on various aspects of wound healing permits the clinician to choose the most appropriate material to advantageously control the wound process and final results. Although polydeoxyribonucleotide (PDRN) was used as a tissue repair stimulating agent in a number of human diseases, such as ulcers and burns, its wound healing effects were largely unreported. We aimed to compare the woundhealing effects of PDRN and common dressing materials on full-thickness skin defect in the mouse. Methods: Full-thickness skin defects were made on the back of mice (N=60). The mice were divided into the following 4 groups according to the dressing used for the wounds: group O (Polydeoxyribonucleotide cream), group I (Polydeoxyribonucleotide solution), group M (Medifoam$^{(R)}$), and group G (dry gauze, control group). We analyzed the gross findings, wound sizes and histological findings for the groups. Results: The rate of wound size was decreased in order of group I, group O, group M and group G. The histological findings revealed that the I group showed more reepithelialization and granulation tissue formation and less inflammatory cell infiltration than the other materials. The grade score of wound healing was increased in order of group I, group O, group M and group G. Conclusion: PDRN applicated wound dressings can be used for treating a full-thickness skin defect wounds. Considering its superior efficacy in comparison to the efficacies of other wound dressings, PDRN soaked gauze dressing should be preferentially used for the treatment of fullthickness skin wounds.
상처회복과정은 염증, 재상피화, 그리고 기질의 재형성등을 포함한 포괄적인 생물학적 반응이다. 생물학적 분류체계에서, 회복능력은 매우 다양한데, 일반적으로 하등동물이 고등동물에 비교해 단순하며 뛰어난 것으로 알려져 있다. 따라서, 하등동물들을 이용한 실험모델은 상처회복과 치유의 기작을 연구하는데 자주 이용되고 있다. 양서류를 이용한 피부 상처회복과정 동안의 조직화학적 특성들을 규명하기 위하여 한국산 무당개구리(Bombina orientalis)를 이용하였다. 1일, 10일 그리고 16일의 조직에서 점액물질이 활발하게 분비되는 것을 확인하였으며, PAS (periodic acid shiff)와 Alcian blue (pH 2.5) 반응에 강하게 염색되었다. PTAH(phosphotungstic acid hematoxylin) 염색을 통하여 상처 후 10일 조직에서 상처주변의 진피층에서 콜라겐의 합성이 증가하는 것을 확인하였다. 또한, 세포의 유사분열의 시점을 확인하기 위한 MG-P (methyl green pyronin)염색에서 초기에는 3시간과 6시간에 강한 염색반응을 관찰하였고, 이는 23일과 27일 조직에서도 동일한 패턴으로 이어졌다.
상처치유는 growth factor와 cytokine들의 복합적인 작용에 의해 일어나는 과정이다. GM-CSF는 호중구와 대식세포를 분화시키고 각질세포를 증식시키는 다면발현성 사이토카인으로 여러 세포에서 재조합되어 사용되고 있다. (주)핸슨바이오텍에서 개발한 rice cell 유래의 재조합 rrhGM-CSF는 다른 세포에서 유래된 GM-CSF들보다 탄수화물 측쇄가 많은 것이 특징이다. rrhGM-CSF의 창상치유효과를 알아보기 위하여 햄스터에 만성 당뇨를 유도하여 상처치유가 어려운 동물모델을 만든 후, 등쪽에 인위적으로 피부 전 층을 제거하여 창상을 유발하였다. 실험군에는 rrhGM-CSF가 포함된 연고를 적용하고, 대조군에는 base cream만을 적용하여 재상피화되는 과정과 피부조직의 구조 및 PCNA 반응을 통한 세포증식 정도를 비교하였다. 육안 및 조직학적 관찰 결과, rrhGM-CSF를 적용한 그룹의 재상피화 속도가 더 빨랐으며, PCNA 면역조직화학적 조사에서도 증식하는 각질세포의 수가 대조군보다 상대적으로 많은 것으로 나타남으로써, rrhGM-CSF에 의한 피부상처 치유 효과를 관찰할 수 있었다. 이러한 결과들로 미루어 보아 벼세포 유래의 rrhGM-CSF는 국소적인 피부 창상 치유에 효과적인 것으로 보이며, rrhGM-CSF의 풍부한 당화 사슬은 이 단백질이 상처부위에 안정된 상태로 기능을 나타냄으로써 효과를 오랫동안 지속시킬 수 있었던 것으로 사료된다.
Purpose: Adipose-derived stromal cells (ADSCs) are multipotent cells that have been found to promote wound healing through the process of angiogenesis and reepithelialization. Generally, it is well known that the antigenicity of ADSCs doesn't affect stem cell therapy. In this study, we investigated the effect of allogeneic ADSCs in the wound healing process by applying allogeneic ADSCs on the wound healing splint model of mice. Methods: Adipose tissue was harvested from the epididymal fat pads of BALB/c and C57BL/6 mice. Twenty four mice BALB/c were divided into three groups; control, isogeneic, and allogeneic groups. Two full thickness defects with 6 mm diameters were created on the back of BALB/c mice. $1{\times}10^6$ ADSCs from BALB/c mice were applied on the isogeneic group. In the allogeneic group, ADSCs from the C57BL/6 mice were applied. No cells were applied to the control group. The sizes of the wounds were evaluated in 3, 5, 7, 10, and 14 days after the wounds were applied, and tissues were harvested in 7 and 14 days for histological analysis. Results: Wound healing rates had showed significant increase in 10, and 14 days when the isogeneic group was compared to the control group, but the allogeneic group showed significantly decrease compared to the isogeneic group (p<0.05). Histological scores in the isogeneic group were significantly high, but significantly lower in the allogeneic group when compared to the isogeneic group in 2 weeks (p<0.05). In the isogeneic group, thick inflammatory cell infiltration with abundant capillaries were observed in 1 week, and thick epithelium with many large capillaries were observed in 2 weeks. Conclusion: When isogeneic ADSCs were applied to wounds, they presented a faster wound healing rate compared to controls and the allogeneic group. Unlike general stem cell therapy, these findings suggest that cell therapy targeted at enhancing wound healing may benefit from the use of ADSCs with identical antigenicity, as opposed to allogeneic or xenogenic ADSCs.
The purpose of this study is to assess healing effect of the green tea on Staphylococcus contaminated wound. On the back of 7 dogs, 6 full-thickness skin wounds($2cm{\times}2cm$) were made and Staphylococcus intermedius was inoculated. Each wound was applied with the 2%(experimental group I), 1%(experimental group II) extract of green tea and normal saline(control group I) after inoculation. The wound contraction rate of the experimental group I and II was higher than that of the control group in entire period. And from the $6^{th}\;to\;22^{nd}$ day, the wound contraction rate of the experimental group I and II was significantly higher than that of the control group(p<0.05). The occupation rate of wound healing in the experimental group I was higher than that of the control group from $0\;to\;9^{th}$ day except from $1^{st}\;to\;2^{nd}$ day and also higher than that of the experimental group II from $0\;to\;3^{rd}$ day except from $1^{st}\;to\;2^{nd}$ day. And the occupation rate of wound healing in the experimental group II was higher than that of the control group from $1^{st}\;to\;8^{th}$ day except from $2^{nd}\;to\;3^{rd}$ day. According to concentration of green tea extract increased, the wound contracted more vigorously in earlier period. The tensile strength of the experimental group I and II was significantly higher than that of the control group(p<0.05). And that of the experimental group I was also higher than in the experimental group II(p<0.05). The number of S. intermedius in the experimental group I and II was decreased more rapidly than that of the control group. From the $4^{th}$ to the $11^{th}$ day, the number of S. intermedius in the experimental group I was significantly lower than that of the experimental group II and the control group. And from the $4^{th}$ to the $7^{th}$ day, the number of S. intermedius in the experimental group was significantly lower than that of the control group. The histopathological findings of the experimental group I and II were similar to those of the control group on the $1^{st}\;and\;4^{th}$ day. On $14^{th}$ day, reepithelialization was completed in the experimental group I and II except the control group. Higher wound contraction rate, better bacteriocidal action, higher tensile strength and better histopathological findings were observed in the experimental group I and II than in the control group. These results suggest that the topical application of green tea extract can promote contaminated wound healing in dogs.
성체의 상처 치유과정중 반흔조직 형성에 수종의 성장인자가 관련이 있는 것으로 보고되고 있으나, 태자의 피부상처가 반흔형성없이 치유되는 기전에 관한 성장인자의 역할은 아직 알려져 있지 않다. 따라서 본 연구의 목적은 토끼태자의 상처 치유과정에서 반흔조직의 형성과 관련이 있는 수종 성장인자의 분포를 조사하기 위한 것이다. 뉴질랜드산 흰 토끼를 임신 3기의 중반인 24일째에 자궁절개술을 시행하고 태자에 인위적으로 구순열상을 만든 후, 봉합한 군(봉합군)과 봉합하지 않은 군(비봉합군), 정상대조군(sham operated control group)으로 나누고 이들을 각각 수술후 1, 2, 3, 5, 7일째에 희생시켜 상처치유에 대한 육안관찰 소견과 H & E 염색 소견 및 $TGF-{\beta}1,\;TGF-{\beta}2$, PDGF, bFGF의 면역조직화학적 염색 소견을 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 봉합군과 비봉합군에서 전기간동안 염증반응과 반흔조직의 형성 그리고 신생 혈관의 형성 증가는 없었다. 2. 비봉합군의 재상피화가 봉합군에 비해 다소 느렸다. 3. bFGF는 정상대조군, 봉합군과 비봉합군에서 차이가 없었다. 4. PDGF는 봉합군과 비봉합군에서 1, 2일군에서 증가하였다가 그후 감소하여 정상대조군과 차이가 없었다. 5. $TGF-{\beta}$는 봉합군과 비봉합군에서 1, 2일군에서 약간 증가하였다가 그후 감소하여 정상대조군과 차이가 없었다. $TGF-{\beta}1$에 비하여 $TGF-{\beta}2$의 검출양이 많았다.
엑소좀은 세포에서 분비되는 작은 소낭체로서, 기원세포와 조직에 따라 다양한 기능을 수행하며, 세포생존 및 세포 간 커뮤니케이션에 중요한 역할을 한다. 최근 엑소좀을 활용하여 종양연구, 면역질환 개선, 질병진단 bio-marker 개발 등 다양한 분야에서 연구가 진행되고 있으나, 피부세포에서 분비기전 및 피부 생리적 기능에 대한 연구는 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구에서 인체피부 유래 각질형성세포(HaCaT)로부터 분리된 엑소좀이 피부각질형성세포의 증식과 이주에 미치는 영향을 확인하고자 하였다. HaCaT으로부터 ExoQuick-TC를 활용하여 엑소좀을 분리하고, 열처리 엑소좀(boiled exosome)과 무처리 엑소좀(unboiled exosome)으로 구분하였다. HaCaT 유래 엑소좀은 농도 의존적으로($0.1{\sim}20{\mu}g/mL$) HaCaT의 증식을 유도하였으며, $20{\mu}g/mL$에서 대조군(control)에 비해 각각 $186.96{\pm}3.87%$(열처리) 또는 $193.48{\pm}10.48%$(무처리)의 증식 유도활성을 나타내었다. 또한 HaCaT 유래 무처리 엑소좀은 농도 의존적인($0.1{\sim}20{\mu}g/mL$) HaCaT의 이주활성을 나타내었고, $20{\mu}g/mL$에서 대조군에 비해 $179.39{\pm}4.89%$의 이주를 유도하였다. 그러나 열처리 엑소좀은 이주 유도활성을 나타내지 않았다. 뿐만 아니라 무처리 HaCaT 유래 엑소좀은 collagen sprout outgrowth를 농도 의존적으로 유도함을 확인하였다. 이러한 결과를 통해서 HaCaT 유래 엑소좀은 지질 및 열에 안정한 물질이 세포의 증식을 유도하고, 단백질 또는 열에 불안정한 물질이 세포의 이동 및 sprout out growth 활성에 관여하는 것으로 확인되었다. 따라서 피부각질형성세포 유래 엑소좀은 피부의 재상피화 및 상처치유 등의 활성을 나타낼 수 있으며, 향후 화장품소재로서 응용 가능성이 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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