• 생명과학회지
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• 제14권1호
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• pp.26-31
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• 2004

본 연구는 redox regulator로 알려 진 Ref-1 (Redox factor-1)과 결합하는 새로운 단백질을protein-protein interaction의 원리를 이용한 방법인 yeast two-hybrid assay로 검색, 동정하고, 검색된 단백질의 in vitro, in vivo 기능을 규명하는 데 그 목적을 두고, mouse 11-day Embryo cNA library를 prey로, full length REF-1을 bait로 하여 yeast strain 인 HF7C에 cotransformatiom시킨 후 histidine, leucine, tryptophan이 결핍된 SD plate에서 키워 자란 yeast transformants를 $\beta$-galactosidaseassay하여 screening하여 분리한 세 개의 clone중 한 clone이 DNA sequencing으로 확인한 결과 mouse thioredoxin임을 확인하였다.

• 생명과학회지
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• 제17권7호통권87호
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• pp.905-909
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• 2007

Redox Factor-1 (Ref-1)은 손상된 DNA의 복구 및 많은 세포내 산화환원에 민감한 transcription factors의 활성화에 기여하는 양면의 역할을 수행하는 단백질이다. 본 연구에서는 혈관내피세포에서의 nitric oxide (NO) 생성과정에서 Ref-1의 역할을 살펴보았다. Ref-1의 세포내 과발현을 위하여 adenoviral vector를 사용하였고 bradykinin으로 자극한 혈관내피세포에서 생성되는 NO 측정을 위하여 fluorophore DAF-2를 사용하였다. Ref-1 과 발현은 bradykinin으로 자극한 혈관내피세포의 NO 생성을 증가시켰다. 또한 자극되지 않은 Ref-1 과발현 세포는 viral vector로 감염되지 않은 그리고 control로 사용한 AdD1312로 감염된 세포보다 높은 fluorescence intensity를 나타내었다. 이와 비슷하게, Ref-1 과발현은 bradykinin으로 자극한 세포뿐만 아니라 자극하지 않은 세포에서도 감염되지 않은 그리고 AdD1312로 감염된 세포와 비교할 때 endothelial NO synthase (eNOS)의 활성을 크게 증가시켰다. 이는Ref-1 자신이 eNOS의 효소활성을 직접 조절할 수 있다는 것을 의미한다. 결론적으로 Ref-1이 혈관계에서 NO생성에 의해 기인되는 endothelium-dependent vasorelaxation에서 중요한 역할을 한다는 것을 시사한다.

• 생명과학회지
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• 제18권12호
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• pp.1651-1656
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• 2008

Redox factor-1 (Ref-1)은 산화적으로 손상된 DNA의 복구와 세포내 산화환원에 민감한 전사인자들의 활성화에 필수적인 역할을 수행한다. 본 연구에서는 마우스 유래 혈관내피세포주 (MAE)에서 nitric oxide (NO) 생성과정에 관여하는 AKT 활성화의 측면에서 adenoviral vector를 사용하여 과발현된 Ref-1의 역할을 살펴보았다. NO 측정을 위하여 fluorophore DAF-2를 사용하였다. 과발현된 Ref-1은 bradykinin으로 자극한 세포뿐만 아니라 자극되지 않은 세포의 NO 생성도 증가시켰다. 놀랍게도 이 과발현된 Ref-1은 AKT의 직접적인 인산화를 유도하였으며, AKT 저해제로 널리 사용되는 wortmannin에 의해 반응이 억제되었다. 또한, Ref-1에 의한 직접적인 AKT 활성화를 증명하기 위하여 HA-tagged activation-deficient AKT를 과발현시키는 adenoviral vector를 사용하였다. 이 방법을 이용한 AKT 활성의 저해는 과발현된 Ref-1에 의한 NO 생성 및 bradykinin 자극에 의한 NO 생성을 억제하였다. 이들 결과는 Ref-1이 마우스 혈관내피세포에서 직접적인 AKT 인산화를 통하여 eNOS 활성화를 유도한다는 것을 의미한다.

• 생명과학회지
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• 제34권4호
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• pp.271-278
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• 2024

Redox factor (Ref)-1은 세포질과 핵을 오가며 산화환원(redox) 환경에 민감한 transcription factors의 조절과 손상된 DNA의 교정 등 다양한 기능을 수행하는 단백질이다. 하지만, 단핵구(monocyte)의 대식세포(macrophage)로의 분화과정에서 Ref-1의 역할은 잘 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 인간 단핵구세포주 THP-1을 이용하여 Ref-1의 단핵구 분화과정에 미치는 영향을 조사하였다. 분화제 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)는 시간이 지날수록 세포의 부착능을 증가시키고 포식기능의 현저한 증가를 보이지만, Ref-1의 세포 내 양을 현저히 감소시켰다. Ref-1의 억제제인 E3330와 siRNA 기법을 이용한 Ref-1 knock- down은 PMA에 의한 세포 부착능과 막표면 분화인자의 발현을 현저히 감소시켰다. 이는 PMA에 자극을 받은 THP-1 세포의 분화 초기과정에는 Ref-1의 역할이 절대적으로 필요하다는 것을 의미한다. 단핵구 분화과정에서 Ref-1의 작용기전을 조사하기 위하여, PMA로 자극한 THP-1 세포의 세포질과 핵에서 Ref-1의 분포를 조사하였다. 놀랍게도, PMA 자극은 Ref-1을 빠르게 핵으로 이동하는 결과를 나타내었다. Ref-1의 핵으로의 이동이 단핵구 분화에 필요함을 증명하기 위하여, nuclear localization sequence (NLS)가 제거된 Ref-1 vector를 사용하였다. 그 결과, 핵으로의 이동이 제한된 ∆NLS Ref-1의 과발현은 PMA 자극에 의한 막표면 단백질의 발현 억제와 포식기능의 현저한 감소를 보였다. 이를 종합하면, Ref-1은 분화제 자극에 의한 분화 유도 초기과정에 핵으로 이동하여 다양한 분화인자의 발현에 관여하는 것으로 보인다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제13권6호
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• pp.431-436
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• 2009

The role of apurinic/apyrimidinic endonuclease1/redox factor-1 (Ref-1) on the lead (Pb)-induced cellular response was investigated in the cultured endothelial cells. Pb caused progressive cellular death in endothelial cells, which occurred in a concentration- and time-dependent manner. However, Ref-1 overexpression with AdRef-1 significantly inhibited Pb-induced cell death in the endothelial cells. Also the overexpression of Ref-1 significantly suppressed Pb-induced superoxide and hydrogen peroxide elevation in the endothelial cells. Pb exposure induced the downregulation of catalase, it was inhibited by the Ref-1 overexpression in the endothelial cells. Taken together, our data suggests that the overexpression of Ref-1 inhibited Pb-induced cell death via the upregulation of catalase in the cultured endothelial cells.

• 대한약리학회:학술대회논문집
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• 대한약리학회 2006년도 The 6th Congress of the Federation of Asian and Oceanian Physiological Societies
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• pp.112.2-112.2
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• 2006

• Journal of Chest Surgery
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• 제40권8호
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• pp.529-535
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• 2007

배경: 산화제와 항산화제 사이의 불균형은 폐암의 발생에 중요한 역할을 하는 것으로 생각되는 산화 스트레스를 유발한다. APE/ref-1은 DNA의 복구와 많은 전사인자들의 산화환원 조절에 연관된 다 기능성 단백질이다. 그러나 폐암에서 APE/ref-1 발현수준의 변화는 알려져 있지 않다. 대상 및 방법: 49명의 수술적으로 제거한 비소세포성 폐암 환자를 대상으로 하였다. APE/ref-1 항체에 대한 면역조직화학적 염색을 하였고, 특이 항체에 대한 Western blot을 시행해 발현 정도를 분석하였다. 결과: APE/ref-1은 주로 폐암 조직의 비 암세포 부분은 핵에 국한되어 존재하였고, 암세포는 핵과 세포질 모두에 존재하였다. 비소세포성 폐암의 핵과 세포질의 APE/ref-1의 발현은 증가되어 있었고 이는 임상적인 병기와도 상관관계를 보였다. 대표적인 항산화 물질인 catalase는 비소세포성 폐암에서 현격하게 감소되어 있었다. 결론: APE/ref-1, 특히 세포질 내의 APE/ref-1의 증가는 산화스트레스에 보상적으로 일어나는 것으로 생각하며 catalase의 감소는 폐암의 특성을 나타내는 세포 외부의 산화환원과정에 근본적인 역할을 하는 것으로 생각한다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제14권3호
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• pp.139-144
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• 2010

In this study, we evaluated the role of apurinic/apyrimidinic endonuclease1/redox factor-1 (Ref-1) on the tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$) induced cyclooxygenase-2 (COX-2) expression using A549 lung adenocarcinoma cells. TNF-$\alpha$ induced the expression of COX-2 in A549 cells, but did not induce BEAS-2B expression. The expression of COX-2 in A549 cells was TNF-$\alpha$ dose-dependent (5~100 ng/ml). TNF-$\alpha$-stimulated A549 cells evidenced increased Ref-1 expression in a dose-dependent manner. The adenoviral transfection of cells with AdRef-1 inhibited TNF-$\alpha$-induced COX-2 expression relative to that seen in the control cells ($Ad{\beta}gal$). Pretreatment with $10\;{\mu}M$ of SB203580 suppressed TNF-$\alpha$-induced COX-2 expression, thereby suggesting that p38 MAPK might be involved in COX-2 expression in A549 cells. The phosphorylation of p38 MAPK was increased significantly after 5 minutes of treatment with TNF-$\alpha$, reaching a maximum level at 10 min which persisted for up to 60 min. However, p38MAPK phosphorylation was markedly suppressed in the Ref-1-overexpressed A549 cells. Taken together, our results appear to indicate that Ref-1 negatively regulates COX-2 expression in response to cytokine stimulation via the inhibition of p38 MAPK phosphorylation. In the lung cancer cell lines, Ref-1 may be involved as an important negative regulator of inflammatory gene expression.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제25권1호
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• pp.59-68
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• 2021

Arterial thrombosis and its associated diseases are considered to constitute a major healthcare problem. Arterial thrombosis, defined as blood clot formation in an artery that interrupts blood circulation, is associated with many cardiovascular diseases. Oxidative stress is one of many important factors that aggravates the pathophysiological process of arterial thrombosis. Apurinic/apyrimidinic endonuclease 1/redox factor-1 (Ref-1) has a multifunctional role in cells that includes the regulation of oxidative stress and anti-inflammatory function. The aim of this study was to investigate the therapeutic effect of adenovirus-mediated Ref-1 overexpression on arterial thrombosis induced by 60% FeCl3 solution in rats. Blood flow was measured to detect the time to occlusion, thrombus formation was detected by hematoxylin and eosin staining, reactive oxygen species (ROS) levels were detected by high-performance liquid chromatography, and the expression of tissue factor and other proteins was detected by Western blot. FeCl3 aggravated thrombus formation in carotid arteries and reduced the time to artery occlusion. Ref-1 significantly delayed arterial obstruction via the inhibition of thrombus formation, especially by downregulating tissue factor expression through the Akt-GSK3β-NF-κB signaling pathway. Ref1 also reduced the expression of vascular inflammation markers ICAM-1 and VCAM-1, and reduced the level of ROS that contributed to thrombus formation. The results showed that adenovirus-mediated Ref-1 overexpression reduced thrombus formation in the rat carotid artery. In summary, Ref-1 overexpression had anti-thrombotic effects in a carotid artery thrombosis model and could be a target for the treatment of arterial thrombosis.

• Korean Journal of Acupuncture
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• 제29권1호
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• pp.37-46
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• 2012

Objectives : The gnarl of Pinus densiflora, called Songjeol in Korea, has been used as a medicinal herb for the treatment of inflammatory-related diseases such as arthralgia, myalgia and bruise. However, the molecular actions and mechanisms have not been clearly investigated. The aim of this study was to clarify the anti-inflammatory activity of Pinus densiflora gnarl pharmacopuncture (PDGP) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 cells. Methods : Cytotoxicity was assessed by XTT assay. The amount of nitric oxide (NO) production was determined by nitrite assay. The mRNA expressions of interleukin-$1{\beta}$ (IL-$1{\beta}$), interleukin-6 (IL-6), cyclooxygenase-2 (COX-2) and heme oxygenase-1 (HO-1) were analyzed by RT-PCR. Reactive oxidative species (ROS) generation was measured using the fluorescence microscopy. In addition, inducible nitric oxide synthase (iNOS) and redox factor-1 (Ref-1) protein expressions were detected by Western blotting. Results : PDGP inhibited NO production and ROS generation in LPS-stimulated RAW264.7 cells. At the mRNA level, PDGP suppressed IL-$1{\beta}$, IL-6 and COX-2 expression. On the other hand, PDGP induced HO-1 mRNA expression. Furthermore, PDGP suppressed iNOS and Ref-1 protein expression. Conclusions : This result suggests that PDGP can act as a suppressor agent on NO and iNOS through induction of HO-1, and play an useful role in blocking inflammatory responses.