RNase A에 對한 RNA의 加水分解反應性은 spermine에 의하여 抑制되었다. Spermine의 濃度가 增加함에 따라 RNase의 活性度는 점점 減少하다가 plateau에 到達되었다. 同一한 條件에서 spermine의 濃度가 增加함에 따라 RNA의 粘性度는 점점 增加되어 RNase의 活性度에서의 spermine의 依存性과 같이 plateau에 이르게 되었다. RNase A에 對한 RNA의 加水分解反應性에 미치는 spermine의 抑制效果는 denatured(變性) DNA에 의하여 救濟되나 native(本性) DNA에 의하여서는 無關하였다. 이들 實驗結果는 spermine에 의하여 RNA의 分子間 aggregation이 일어나며 그로 因하여 RNA의 RNase A에 對한 加水分解反應性이 抑制될 수 있음을 보여준다.
To measure an effects of strontium on secretion of ${\alpha}$-amylase and RNase, wheat aleurone layers were isolated after the pre-incubation in a solution with or without 10 mM $SrCl_2$ or $CaCl_2$ for 3 days at $25^{\circ}C$ in the dark under aseptic conditions. The secretion of ${\alpha}$-amylase reached a maximum at 72 h after incubation. $Sr^{2+}$ induced more effectively secretion of ${\alpha}$-amylase than $Ca^{2+}$. The ${\alpha}$-amylase secretions by $Sr^{2+}$ or $Ca^{2+}$ ware about $2 (Ca^{2+})$ to $2.5 (Sr^{2+})$ fold higher than it without divalent ions, When aleurone layers were incubated without divalent ions, however, the ${\alpha}$-amylase was remarkably retained in the tissues. Total ${\alpha}$-amylase synthesis (ie. tissues + media) was slightly lowered by 10mM $SrCl_2$ addition. It seemed that the RNase secretion begins at 18 h after incubation. This meaned that the RNase secretion may process slower than ${\alpha}$-amylasee secretion. $Ca^{2+}$ effect on RNase secretion is stronger than $Sr^{2+}$ unlikely to ${\alpha}$-amylase. The secretion process is likely to be suddenly induced between 72 hand 96 h. These results suggested that the secretion was enhanced after the accumulation in aleurone layers.
Background: To develop a novel treatment strategy for hepatitis B virus infection, a major cause of liver chirosis and cancer, we aimed to make human monoclonal antibodies inhibiting RNase H activity of P protein playing in important role in HBV replication. In this regard, phage display technology was employed and demonstrated as an efficient cloning method for human monoclonal antibody. So this study analysed the usability of human monoclonal antibody as protein based gene therapy. Methods: RNase H of HBV was expressed as fusion protein with maltose binding protein and purified with amylose resin column. Single chain Fv (scFv) phage antibody library was constructed by PCR cloning using total RNAs of PBMC from 50 healthy volunteers. Binders to RNase H were selected with BIAcore 2000 from the constructed library, and purified as soluble antibody fragment. The affinity and sequences of selected antibody fragments were analyzed with BIAcore and ABI automatic sequencer, respectively. And finally RNase H activity inhibiting assay was carried out. Results: Recombinant RNase H expressed in E. coli exhibited an proper enzyme activity. Naive library of $4.46{\times}10^9cfu$ was screened by BIAcore 2000. Two clones, RN41 and RN56, showed affinity of $4.5{\times}10^{-7}M$ and $1.9{\times}10^{-7}M$, respectively. But RNase H inhibiting activity of RN41 was higher than that of RN56. Conclusion: We cloned human monoclonal antibodies inhibiting RNase H activity of P protein of HBV. These antibodies can be expected to be a good candidate for protein-based antiviral therapy by preventing a replication of HBV if they can be expressed intracellularly in HBV-infected hepatocytes.
쌀막걸리 제국중의 핵산관련물질 및 핵산분해효소의 소장을 시험하고 이들 조효소의 효소학적 성질에 대하여 실험한 결과는 다음과 같다. 1) 제국중 산하용성인은 약간 증가하였으나 총인은 그다지 변화가 없었다. 2) 제국중 AMP, IMP등은 약간 증가하였으나 ADP, ATP는 점차 감소하였다. 3) 시간의 경과에 따라 핵산분해효소의 활성은 증가하였다. 4) 국으로 부터 추출한 조효소액에서의 최적 pH는 대체로 RNase가 pH4.0~5.0, PDase와 PMase는 pH 4.0 이었다. 5) RNase와 PMase는 PH 4.0~5.0 부근에서 안정하였고 PDase는 pH4.0에서 대체로 안정하였다. 6) RNase, PDase, PMase의 최적온도는 모두 50~55$^{\circ}C$ 범위였다. 7) 세가지 효소의 열안정성은 RNase>PDase> PMase의 순이었고 특히 PMase는 열안정성이 낮아 7$0^{\circ}C$ 10분간 처리로서 거의 실활되었다. 8) C $u^{++}$, $Zn^{++}$은 RNase의 활성을 저해하였고, C $u^{++}$, NaF, $Na_2$HP $O_4$는 PDase, C $u^{++}$ NaF는 PMase의 활성을 저해하였다.
쌀막걸리 담금중의 핵산분해효소들의 소장과 이효소들을 DEAE-cellulose column chromatography에 의해 분리정제하고 일반적인 성질을 검토함은 물론 핵산관련물질의 변화를 조사한 결과는 다음과 같았다. 1. 담금일수가 경과함에 따라 RNase는 담금 3 일까지 다소 증가하였다가 그후 점차 감소하였으며 PDase 및 PMase는 초기부터 활성이 감소하였다. 2. RNase의 최적pH는 5.0부근이었고, PDase, PMase는 6.0부근이었으며 pH안정성은 대체로 $pH6.0{\sim}7.0$부근이었다. 3. RNase 및 PDase의 최적온도는 $55{\sim}60^{\circ}C$이고, PMase는 50부근이었으며 열안정성은 RNase는 $100^{\circ}C$ PDase는 $80^{\circ}C$에서 10분간반응으로 각각 80%, 90%실활되었으며 PMase는 $70^{\circ}C$에서 10분간 반응으로 거의 샐활되었다. 4. RNase는 $CU^{++},\;Zn{++}$, PMase는 $10^{-3}M\;Na_{2}HPO_{4}$처리로서 약 30%의 효소활성이 저해되었다. 5. 술덧담금 4일째까지 IMP는 증가하였으며 UMP, GMP, AMP는 감소하는 경향을 보였다.
Kim, Hoy-Taek;Moriya, Shigeki;Okada, Kazuma;Abe, Kazuyuki;Park, Jong-In;Yamamoto, Toshiya;Nou, Ill-Sup
Journal of Plant Biotechnology
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제43권1호
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pp.49-57
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2016
We isolated and confirmed two S-RNases, denoted as mpS1 and mpS2, from apple rootstock 'Marubakaido' (Malus prunifolia Borkh. Var. ringo Asami). These S-RNases contained and conserved five cysteine residues and two histidine residues, which are essential for RNase activity. The mpS1 showed high similarity to S5 (99.1%) of Malus spectabilis, whereas the mpS2 showed 99.5% nucleotide sequence similarity to S26 of (Malus ${\times}$ domestica) and 99.6% to S35 of (Malus sieversii) when compared with reported S-RNases. In amino acid sequences, the mpS1-RNase was almost similar to the S5-RNase of Malus spectabilis, and the mpS2-RNase was similar to the S35 of Malus sieversii, with only one bp being different from the S26-RNase of Malus ${\times}$ domestica. The 57 S-RNases of Malus species were renamed and rearranged containing the new S-RNases, as mprpS35 (mpS2) and mprpS57 (mpS1), for determining S-genotypes and identifying new alleles from apple species (Malus spp.).
식용 단백질 생산 균주인 S. cerevisiae ATCC 7754에 돌연변이를 유도하고, 핵산 함량이 높으면서도 성장 속도가 빠른 고핵산 축적 균주를 선별하였고 배양 특성을 조사하였다. Saccharomyces cerevisiae ATCC 7754는 pH $3{\sim}4$에서 최대 활성을 보이는 산성 RNase와 pH 9에서 최대활성을 보이는 알칼리성 RNase를 가지고 있는 것이 확인되었으며 산성 RNase의 활성이 훨씬 높았다. Saccharomyces cerevisiae ATCC 7754의 RNase는 금속염에 의하여 영향을 받는데 산성 RNase의 경우는 $0.08\;M\;HgCl_2$에 의하여 활성이 크게 저하되었고, 알칼리성 RNase경우는 2.0 M NaCl이나 KCl에 의하여 활성이 크게 저하되었다. 반면 알칼리성 RNase는 $0.05\;M\;CaCl_2$, $0.02\;M\;ZnSO_4$, $0.008\;M\;HgCl_{2}$에 의하여 활성이 증가되었다. Ethylmethane sulfonate, 자외선, 감마선을 이용한 돌연변이를 통하여 핵산 축적능이 뛰어난 KCl 감수성 균주를 선발하고 YPD 배지에서 배양하면서 건조 균체량과 리보핵산 함량을 측정하여 건조 균체 단위 무게당 리보핵산의 함량이 가장 높은 B24 균주를 고핵산 변이주로 선택하였다. B24 균주는 모균주와 비슷한 증식 특성을 나타내었는데, pH $4.5{\sim}5.5$에서 성장이 잘 되었고 리보핵산 축적은 pH 4.5와 5.0에서 가장 잘 일어났으며, 또한 탄소원으로 당밀을 사용한 경우가 세포 내에 리보핵산이 가장 많이 축적되었고 균의 생육도 빠름을 알 수 있었다. 발효기를 이용한 유가식 배양에서는 배양 초기에 균체내 리보핵산 함량이 급격히 증가하고 이후 정지기까지 서서히 감소하여 최종적으로 리보핵산 함량이 균체 건물량의 19.8%(w/w)로 모균주의 16.1% (w/w)에 비해 우수하였으며, 이때 최대 69.6 g/L(건물량)의 균체를 수득하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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