자연계로부터 식물병원균인 Pseudomonas syringae pv. Tabaci에 감염하는 bacteriophage 를 분리하였다. 이 phage의 안정성을 조사한 결과 중성 부근 pH에서 가장 안정하였고 50${\circ}C$ 이상에서는 안정성이 급격히 감소하였으며 흡착시간 별로는 10분까지는 빠른 흡착율을 보이다가 그 후부터는 서서히 감소하였다. 또한 흡착에는 금속이온을 필요로 하였으며 흡착온도는 20${\circ}C$에서 가장 높게 나타났고 20~40분에서 가장 높게 나타났다. 또한 배양온도에 따라 plaque 양상이 달랐는데 10${\circ}C$에서는 clear plaque를, 20, 30${\circ}C$에서는 turbid plaque를 형성하였다. 20${\circ}C$에서 잠복기는 약 3시간이었고 평균 방출수는 200PFU/cell이었다. 유전물질로는 ds DNA를 가지고 있었고 크기는 30kb 정도이었다.
Pseudomonas syringae pv. tabaci(Pa45) Tox$^{-}$ cells were infected with phage Ps90 strain isolated form the natural source, and the Ps90 lysogenized bacterial cells were then obtained. The lyxohenized cells produced tabtoxin and the phage induction occured when the cells treated with mitomycin C. The Southren hybridization alnalysis of the four EcoRI-treated plasmid fragments and the EcoRI-digested genomic DNA of Tox$^{+}$ and Tox$^{-}$ strains using phage DNA as a probe showed that only those DNA fragment of Tox$^{+}$ strain were related to the Ps90 phage DNA. Based on these results, the tabtoxin producing DNA fragments of the bacteris are presumed to have originated from the same phage DNA, and to be responsible for the pathogenecity of the bactrial strains.
Pseudomonas syringae pv. tabaci는 숙주인 담배에 감염하여 들불병(wild fire)을 일으키는 식물 병원성 세균이다. 이 세균의 pathogenicity island (PAI)는 Type III secretion system 및 병원성 유전자들을 암호화하고 있으며, 병원성 조절에 있어 핵심적인 역할을 한다. 최근 식물 병원성 세균인 Ralstonia solanacearum에서 식물 세포 접촉을 매개로 하여 hrp gene cluster를 양성조절하는 PrhA (plant regulator of hrp) receptor가 발견되었다. 본 연구에서는 P. syringae에서 식물세포에 의해 hrp 유전자가 유도되는지 확인하기 위해, prhA 유사체를 동정하고 PrhA 결실돌연변이주(BL11)를 구축하였다. BL11은 숙주 감염 실험에서 병원성이 현저히 감소하였고, 식물 세포현탁액에서 hrpA 유전자의 발현수준이 hrp 유도배지에서 보다 3배 더 높게 나타났다. 이러한 결과들을 근거로 PrhA가 식물세포접촉에 의한 조절에 중요한 역할을 한다는 것을 확인하였으며, hrpA-gfp reporter fusion을 사용하여 이를 다시 검증하였다.
식물의 잎에 세균성 정무늬병을 야기시키는 식울 병원성균인 Pseudomonas syringae pv. tuhaci는 tabtoxin 이라는 phytotoxin 을 생성하는데 이 toxin을 미생물학적으로 간편하게 검색하는 방법플 여러가지 지시균주를 사용하여 각족 배지에서 검토하였다. Minimal A agar medium에서는 tabtoxin 검색에 Agrobactcrium tumefaces가 가장 유용한 균주였으며 minimal glucose agar m$\varepsilon$dium 에서도 역시 마찬가시의 견과를 얻였다 Complex agar medium 에서는 사용된 모든 지시균주에 대해 증식저지환이 형성되지 않아, tabtoxin이 생성되지 않음알수 있었다. 배양온도에 따른 tabtox의 생성능은 $20^{\circ}C$ 빛 $30^{\circ}C$ 에서 최적이였으며 배양시간이 경과함에 따라 tabtoxin 생성량이 증가 하였다. Glutamine을 minimal glucose agar medium에 첨가하여 tabtoxin 에 대한 지시 균주의 반응은 첨 가한 glutamine 의 양이 증가할수록 tabtoxin에 의한 생육억제가 감소함을 알 수 있었다.
Pseudomonas syringae pv. tabaci 11528은 담배를 숙주로 하여 wildfire disease를 일으키는 식물 병원성 세균이다. P. syringae pv. tabaci psyR deletion mutant를 이용하여 swarming motility, tabtoxin 생산능, siderophore 생산능, AHL 생산능 등의 phenotypic test를 수행하였다. psyR deletion mutant는 wild-type 균주보다 swarming motility가 증가하였고, tabtoxin 생산 또한 증가하였다. 하지만 siderophore와 AHL 생산능은 감소하였고 virulence 또한 지연되었다. 이러한 결과로 PsyR이 QS regulator로 작용한다는 사실과 더불어 병원성 유전자의 조절에도 관여한다는 것을 확인하였다. PsyR이 각각의 병원성 유전자의 발현을 조절하는 regulator들에게 미치는 영향을 전사단계에서 확인하기 위해 fur, gacA, psyI, prhI, prhA, hrpR, hrpA 유전자들을 정량적 real-time PCR (qRT-PCR) 방법으로 확인하였다. 또한 PsyR에 의한 병원성 유전자 조절이 DNA상에 직접적으로 결합하여 일어나는 것인지 아니면 다른 경로를 통해 간접적으로 일어나는 것인지를 확인할 필요가 있어 정제한 PsyR 단백질과 병원성 관련 유전자들의 upstream region 서열을 이용하여 electrophoretic mobility shift assay (EMSA)를 수행한 결과 본 연구에서 선정한 병원성 관련 유전자들이 PsyR에 의해 직접적으로 조절되지는 않는다는 사실을 밝혔다.
Park, Myung-Ryeol;Kim, Young-Cheol;Park, Ju-Yeon;Han, Song-Hee;Kim, Kil-Yong;Lee, Sun-Woo;Kim, In-Seon
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제18권10호
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pp.1659-1662
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2008
Pseudomonas chlororaphis O6 exhibits induced systemic resistance (ISR) against P. syringae pv. tabaci in tobacco. To identify one of the ISR metabolites, O6 cultures were extracted with organic solvents, and the organic extracts were subjected to column chromatography followed by spectroscopy analyses. The ISR bioassay-guided fractionation was carried out for isolation of the metabolite. High-resolution mass spectrometric analysis of the metabolite found $C_{9}H_{9}O_{3}N$ with an exact mass of 179.0582. LC/MS analysis in positive mode showed an $(M+H)^{+}$ peak at m/z 180. Nuclear magnetic resonance ($^{1}H,\;^{13}C$) analyses identified all protons and carbons of the metabolite. Based on the spectroscopy data, the metabolite was identified as 4-(aminocarbonyl) phenylacetate (4-ACPA). 4-ACPA applied at 68.0 mM exhibited ISR activity at a level similar to 1.0 mM salicylic acid. This is the first report to identify an ISR metabolite produced by P. chlororaphis O6 against the wildfire pathogen P. syringae pv. tabaci in tobacco.
Plant matrix metalloproteases (MMPs) are a family of apoplastic metalloproteases closely related to human matrilysins. Up-regulation of Nicotiana benthamiana matrix metalloprotease 1 (NMMP1) expression by treatment with pathogens, ethephon and aging indicates that the gene is related to plant defense and the aging process through ethylene signaling. NMMP1 expression was higher than in normal growth leaves following infection with an incompatible pathogen Pseudomonas syringae pv. tomato T1 or a compatible pathogen P. syringae pv. tabaci and in aged leaves. Transient overexpression of NMMP1 in N. benthamiana leaves lowered the growth of P. syringae pv. tabaci. However, NMMP1-silenced leaves showed increased growth of P. syringae pv. tabaci. These data strongly suggest that NMMP1 in N. benthamiana is a defense related gene, which is positively regulated by ethylene.
선학초 (전초) 메탄올 조추출물이 오이 세균성모무늬병균인 Pseudomonas syringae pv. lacrymans, 토마토 풋마름병균인 Ralstonia solanacearum 및 담배세균성들불병균인 Pseudomonas syringae pv. tabaci에 대해서 항균활성을 나타내었다. 활성성분을 silica gel column 및 HPLC로 순수분리하여 LC-Mass 분석 결과 분자량 682.7을 갖는 물질로 추정 할 수 있었으며, 선학초에서 분리된 물질중 분자량 687.2를 나타내는 Agrimol A와 B를 구별하기 위하여 $^1H-NMR$, $^{13}C-NMR$ 스팩트럼 분석 결과 항균활성성분이 Agrimol B임을 확증할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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