고등어 유문수조직중에 분포하는 알칼리성단백질분해효소의 정제조건을 검토하고 염석, DEAE-Sephadex A-50 칼럼 크로마토그래피 및 Sephadex G-100 겔 여과에 의해 3종류의 알칼리성단백질분해효소의 분리${\cdot}$정제방법을 확립하였다. 유문수조직중에 분포하는 알칼리성단백질분해효소의 추출용매는 $1\%$ NaCl 용액이 가장 효과적이었다. 정제된 가칭 Enz, A, B 및 C의 각 알칼리성단백질분해효소는 전기영동적으로 균질함이 증명되었으며, 조효소에 비해 고유활성이 Enz. A는 34배, B는 53배 그리고 C는 37배로 각각 증가하였다. 각 효소의 수율은 조효소에 대해 $1.6\%,\;2.1\%$ 및 $1.5\%$였고, 총수율은 $5.2\%$였다.
유제품, 김치 및 신생아 분변 등에서 유산균을 분리하여 우유 casein을 분해시켜 배양상등액에 존재하는 serine의 함량을 측정함으로써 간접적으로 CPP 생산을 평가하였다. CPP 생산 능력은 OPA방법으로 측정했을 때 E. faecalis A-2 균주가 1.244 mg/mL로 가장 많은 peptide를 생산 하였다. 본 실험에 사용된 유산균의 경우, 세포내 효소와 세포외 효소로 각각 나누어 proteolytic 활성을 평가한 결과 세포내 효소에 의한 proteolytic 활성은 E. faecalis A-6 균주가 가장 높은 것으로 나타났으며, 세포외 효소에 의한 proteolytic 활성은 L. plantarum A-14 균주에서 가장 높게 나타났다. 가용성 칼슘함량은 Leuconostoc mesenteroides A-1(11 mg/dL), E. durans A-16(10.481 mg/dL), 그리고 L. planatarum A-3(10.356 mg/dL) 균주의 경우에는 대조구보다 높은 유리 칼슘함량을 나타내었다. 따라서 이러한 유산균을 이용한다면 소장 내에서 칼슘 흡수를 극대화시킬수 있는 장점이 있어 이들 유산균을 이용한 고칼슘 제품 개발이 가능할 것이다.
Escherichia coli K-12 (E. coli K-12) is a representative indicator globally used for distinguishing and monitoring dynamic fates of pathogenic microorganisms in the environment. This study investigated how to most critically quantify lacZ ($\beta$-galactosidase) gene in E. coli K-12 by two different real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) in association with three different DNA extraction practices. Three DNA extractions, i.e., sodium dodecyl sulfate (SDS)/proteinase K, magnetic beads and guanidium thiocyanate (GTC)/silica matrix were each compared for extracting total genomic DNA from E. coli K-12. Among them, GTC/silica matrix and magnetic beads beating similarly worked out to have the highest (22-23 ng/${\mu}L$) concentration of DNA extracted, but employing SDS/proteinase K had the lowest (10 ng/${\mu}L$) concentration of DNA retrieved. There were no significant differences in the quantification of the copy numbers of lacZ gene between SYBR Green I qPCR and QProbe-qPCR. However, SYBR Green I qPCR obtained somewhat higher copy number as $1{\times}10^8$ copies. It was decided that GTC/silica matrix extraction or magnetic beads beating in combination with SYBR Green I qPCR can be preferably applied for more effectively quantifying specific gene from a pure culture of microorganism.
B. subtilis 168 균주는 배양중 항균물질을 배지중으로 분비하며 배양상등액은 몇몇 그램 양성균을 저해한다. B. cereus와 L. monocytogenes의 저해 정도가 가장 컸었다. 배양상등액을 proteas와 proteinase K로 처리할 경우 항균력이 상실되어서 항균물질은 단백질성(박테리오신) 임을 알수있었다. Tricine SDS-PAGE에 의해서 박테리오신 분자량은 5 kDa으로 확인되었다. 박테리오신은 민감한 균을 죽임으로써 생육을 저해하는 것으로 밝혀졌다. 이상 결과들에서 B. subtilis 168은 청국장과 같은 B. cereus 오염이 문제되는 발효식품들의 종균으로 유용할 것으로 생각된다.
모기 살충성 Bacillus thuringiensis subspangiensis 21-2균주의 용혈성 내독소 단백질의 특성을 검토하고자 21-2균주의 용혈성을 가진 유전자를 Escherichia coli HBIO쎄 형질전환시켰다. 이들 중에서 형질전환 균주 47은 독소 단백질을 생산하며 2.5 kb DNA을 함유한다는 것을 효소항체법, immunoblot및 DNA전기영동법으로 확인하였다. 또한, 형질전환 균주 47-5는 2.5 kb DNA를 다시 Hind ll견 절단하여 pUC118 연결시켜서 조제하였다 그 결과형질전환 균주 47-5은 1.Bkb DNA를 함유하며, 23 kD꺼 독소 단백질을 발현하고, 발현된 독소 단백질은 Aedes aegypti모기 유충에 독성을 나타내었다. 또한 23 kDa의 내독소 단백질 그 자체로는 사람의 적혈구를 용해하지 못하였으나, proteinase K로 처리한 후에는 적혈구에 대해 용혈성을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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