The objectives of this investigation were to produce artificially an antitumor constituent by submerged culture of the mycelium of Coriolus versicolor (Fr.) Quel., to characterize the influence of various modifications of the nutrient and culture conditions with respect to the production, to determine chemical composition of the antitumor constituent, and to examine effects of the constituent on the immune response of mice. Submerged agitation of the mycelium in flasks containing a nutrient solution showed its adequate growth. Especially the mycelial growth in the medium containing glucose and yeast extract was abundant. The addition of cotton seed flour or ginseng waste to the medium increased the yield of mycelial growth and the production of the antitumor constituent. The replacement of glucose with starch also yielded the adequate growth. The antitumor constituent extracted from the mycelium and isolated from the culture filtrate was a protein-bound polysaccharide. The analyses of this constituent by GLC and amino acid autoanalysis showed that it contained four monosaccharides and fifteen amino acids. The protein-free polysaccharide of the constituent was also found to exert greater antitumor activity against sarcoma-180 in mice than the entire constituent. The antitumor constituent was found to potentiate the immune response of mice against sheep red blood cell. The protein-bound polysaccharide exerted more favorable influence on the immunity than the protein-free moiety.
고등균류의 배양액 및 균사체로부터 항암작용이 있는 단백다당류의 추출 및 정제방법에 관한 실험을 구름버섯 균사배양체를 이용하고 실시하였다. 실온에서 비이온성 계면활성제인 2% Triton X-100과 함께 교반시키면서 추출했을 때 얻어진 단백다당류의 함량이 이미 사용되어 온 $100^{\circ}C$ 열수에 의한 추출방법을 통해 얻을 수 있는 것보다 더 좋았다. 그러나 4 N NaCl을 포함한 2% Triton-X-100 용액으로 처리했을 때는 추출 후 ethanol 침전과정에서 단백다당류의 침전물을 얻을 수 없었다. 열수추출과 ethanol 침전과정에서 얻어진 단백다당류의 순도를 높이기 위해 chromatography를 이용한 정제실험을 하였다. alumina와 DEAE-Cellulose, DEAE-Sephadex를 각각 충전제로 하여 시료를 전개시키고 280nm에서의 흡광도를 기준으로 단백질 성분의 용출을 확인하고 이들 분획에 대하여 anthrone정색반응과 625nm에서의 흡광도를 측정함으로써 단백다당류를 분리, 정제하였다. 단백다당류의 정제는 alumina를 충전제로 사용하는 것보다 DEAE-Cellulose와, DEAE-Sephadex를 충전제로 한 chromatography에 의하여 더 효율적으로 정제되었다.
한국산(韓國産) 담자균류(擔子菌類)의 항암(抗癌) 성분(成分)을 탐색하기 위하여, 팽나무버섯의 자실체(字實體)를 온수(溫水)로 추출한 후, visking tube로 투석 및 냉동건조하여 단백성 다당류를 분리하였다. 이 성분을 ICR마우스에 이식한 sarcoma 180에 대한 종양억제작용을 실험하였던 바, 10mg/kg/day 용량(用量)을 10일간 투여한 군(群)에서 그 종양억제율이 대조군에 비하여 62.3%이었다. 처치군의 10마리중 3마리에서 그 종양이 완전히 퇴행하였다. 이 항암성분을 분석하였던 바, 42.4%의 다당류와 24.5%의 단백질을 함유하고 있었다. 그 다당류를 가수분해하여 분석하여 본 바, glucose, galactose, mannose, xylose 및 fucose의 5종의 단당류를 검출하였다. 그 단백질을 가수분해하여 16종의 아미노산을 확인하였다.
The hypoglycemic effects of 2 mushrooms, Pleurotus ostreatus and Lentinus edodes, on streptozotocin(STZ) induced diabetic rats were investigated in this study . Diabets mellitus was induced in male Sprague-Dawley rats by the injection of STZinto the tail vein at a dose of 45mg/kg. Sprague-Dawley male rats(200-250g) were assigned to one control and three STZ-diabetic groups. Diabetic groups were assigned to STZ-control, pleurotus ostreatus and Lenitinus edodes groups. All groups were fed a AIN 76 diet. The two experimental groups were fed with each protein-bound polysaccharide(150mg/kg BW) for 14 days and with carboxymethyl cellulose for STZ-control group. The body weight gain was monitored and the blood levels of glucose and cholesterol were measured . Levels of protein triglyceride, and free fatty acid in plasma were analysed. Serum aminotransferase activity as also measured. The body weight gain was lower in the all diabetic groups than in the of normal group. The weight of spleen was reduced by adminstration of the Lentinus edodes protein-bound polysaccharides. The result suggest that orally administered Lentinus edodes protein-bound polysaccharides exhibited hypoglycemic effect in STZ -induced diabetic rats and that these protein-bound polysaccharides may be useful for the management of diabetes mellitus.
아가리쿠스버섯에서 분리한 단백다당류를 분무건조한 분말의 저장안정성을 알아보기 위하여 저장 중 흡습특성을 조사하였다. 평형수분함량은 수분활성도가 높아짐에 따라 빠르게 증가하는 양상이었으며, 높은 온도에서 낮은 함량을 나타내었다. 단분자층 수분함량은 BET식보다 GAB식이 높은 유의성을 나타내었다. 수분활성도가 증가함에 따라 필요로 하는 흡습에너지가 낮아져 흡습엔탈피는 감소하여 흡습이 쉽게 이루어짐을 알수 있었다. 등온흡습곡선의 적합도는 Kuhn과 Oswin 모델이 $R^2$ 0.99 이상으로 높은 적합도를 나타내었고, Oswin 모델이 가장 편차가 작은 것으로 나타났다. 흡습 중 평형상대습도 예측 모델을 수립하기 위해 온도와 수분활성도의 경우 일차함수, 시간의 경우 로그함수가 높은 적합도를 보였으며, 평형상대습도 예측모델식은 수분활성도만을 변수로하는 모델식, 수분활성도와 시간을 변수로 하는 모델식과 수분활성도, 시간, 온도를 변수로 하는 모델식을 나타내어 가장 높은 $R^2$가 0.965로 나타났다.
버섯 균사체로부터 분리한 단백다당체의 Th1 cell 증식효과 및 각종 암세포에 대한 세포독성을 조사하였다. 단백다당체 시료는 영지버섯, 아가리쿠스, 표고버섯, 운지버섯, 그리고 상황버섯을 10$0^{\circ}C$에서 3시간 열수 추출하는 방법으로 조제하였다. Th1 cell의 세포증식을 조사한 결과, 10mg/$m\ell$ 농도에서 모든 시료가 40% 이상 억제하는 효과가 있는 것으로 나타났다. 7 종류의 암세포를 이용한 암세포 생존율을 조사한 결과, 1mg/$m\ell$ 농도에서 P388D1와 L1210에서 아가리쿠스는 2.4%와 39.7%, 표고버섯은 48.4%와 52.5%의 생존율을 보였다. Sarcoma 180으로 복수암을 유발시킨 마우스에게 아가리쿠스와 표고버섯으로부터 추출한 단백다당체를 섭취시킬 경우 생존율이 27~40%까지 유의적으로 증가하는 것으로 나타났다.
We investigated the optimum conditions for conversion of water-insoluble components of basidiocarps of Ganoderma lucidum to water-soluble components by hydrolyzing with chitinase. We also tried it with Ganoderma luciclum residue remaining after extracting hot water-soluble components of Ganoderma lucidum. After hydrolyzing under optimum conditions (20 ppm chitinase, 2% Ganoderma lucidum or 6% Ganoderma lucidum residue, at pH 3 and at $ 35^{\circ}C$), the contents of total water-soluble components (polysaccharide or protein) were measured, and it was found that the contents of water-soluble components increased to 1.5-2.7 fold. Michaelis constant, $K_m$ and maximum rate, $V_max$ calculated by Lineweaver-Burk plot for hydrolysis of Ganoderma lucidum were 1.75% and 0.02%/min respectively and those for hydrolysis of Ganoderma lucidum residue were 53.15% and 0.53%/min respectively The protein-bound polysaccharide was isolated after hydrolysis and molecular weights were measured by Sepharose CL-4B gel filtration and compared with the molecular weights of polysaccharide before hydrolysis.
This study was conducted to investigate the extraction characteristics of the polysaccharide from Jeseng mushroom (Fomitopsis pinicola Jeseng). Yields of the polysaccharide extracted from powdered mushroom by autoclaving(120, 30 min) with water at different pH and salt concentration were 8.2~9.2% in pH 5~11, 4.7~5.5% in 1~5% salt solution, respectively. The yield by the 0.05~1.0 N KOH-extraction was ranged 3.45~13.20%, while that by HAS-extraction(homogenizing after KOH swelling) using 1~2.5 N KOH 73.6~78.4%. Content of carbohydrate, protein, lipid and ash of the crude polysaccharide extracted from fruits body and its cultured mycelium by method of water extraction, KOH extraction(0.005~1N) and HAS-extraction were ranged 86.5~92.6%, 2.3~13.1%, 0.1~4.2% and 0.1~1.7%, respectively. The polysaccharide were composed of 62.0~77.8 g/g of pentose, 138.0~187.8 g/g of hexose and 21.2~117.3 mg/g of protein. From these results, the polysaccharide extracted was supposed to be a protein-bound polysaccharide.
식용버섯으로부터 항보체 활성물질을 탐색하여 새로운 소재화 연구의 일환으로 상황버섯(Phellinus linteus) 균사체로부터 항보체 활성 물질을 분리, 정제를 하였으며 화학적 특성을 검토하였다. 정제는 상황버섯의 열수추출한 후, 열수추출물(PL-0)를 한외여과하여 분자량별로 5개의 획분을 얻었다. 이 중, 300kDa 이상의 획분(PL-5)을 DEAE-Sepharose FF 이온교환 크로마토그래피, Sepharose CL-4B 겔여과 크로마토그래피를 실시하여 PL-5-IIIa 획분을 얻었다. PL-5-IIIa 획분을 HPLC를 행한 결과 단일 피크로 나타났으며 정제다당 PL-5-IIIa의 분자량은 800,000Da으로 측정되었다. 정제다당 PL-5IIIa는 64.2%의 당과 29.6%의 단백질로 구성되었으며 구성당은 galactose가 43.1%, mannose가 40.6%, fucose가 15.8%로 나타났다.
To find pharmacologically active hybrids among the inter-order protoplast fusants of Lentinula edodes and Ginoderma lucidam the antitumor test was performed and the fusant P22 was selected among them. The hot water and alkaline extracts from the cultured mycelia of P22 were purified and separated into four fractions by DEAE-cellulose anion exchange chromatography. When a dose of 20 mg/kg/day of each fractions was injected into ICR mice by i.p., the tumor inhibition ratio of Fr. IV against solid sarcoma 180 was the higher than any other fraction. Fr. IV was a protein-bound polysaccharide which was composed of 69. 12% polysacchafide and 9.76% protein and the molecular weight of Fr. IV was $6.7{\times}10^4$ dalton.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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