본 연구는 유채(Brassica napus L.)의 배축을 이용하여 수량 증대 유전자인 ORE7 그리고 선발유전자로 제초제저항성을 나타내는 bar 유전자를 Agrobacterium 기법을 이용하여 형질전환 하였다. 효율적인 유채형질전환 기법을 확립하기 위해 한국 유채 '영산' 품종의 배축 절편체를 이용하여 Agrobacterium 접종 시, 20분간의 접종시간 그리고 3일간의 공동배양기간을 적용할 때 100개의 접종된 배축 절편체들로부터 약 32-36개 개체가 PPT (Phosphinothrixin) 20 mg/l 첨가된 선발배지에서 생존하여 높은 형질전환 효율을 보여주었다. 또한 본 연구에서 도입된 선발 및 생산성 증대 유전자 도입 여부를 확인하기 위해 PCR을 수행하여 도입여부를 확인하였다. 또한 생산성 증대 유전자 ORE 7 유전자와 같이 도입된 bar 유전자의 발현여부를 확인하기 위해 0.5% Basta 용액에 처리한 결과, 제초제저항성 형질이 발현됨을 확인하였다. 본 연구결과를 통해 향후 국내 유채품종을 대상으로 Agrobacterium을 이용하여 제초제 저항성, 건조저항성. 생산성 증대 형질 그리고 오일함량 증대 등의 유용형질 개량에 이용되리라 판단된다.
광역동 치료는 광감각제가 빛에 의해 활성화되면서 발생하는 화학 반응을 이용한 것으로, 치료 원리는 광화학 반응으로 자유 라디칼 및 반응성 산소가 생성되고 이 산물들에 의한 세포 독성으로 항균 효과를 가지게 되는 것이다. 이 연구의 목적은 치과 임상에서 널리 사용되는 광원(할로겐, LED)과 광감각제(erythrosine)를 이용하여, 치아 우식증과 연관된 세균인 Streptococcus mutans에 대한 광역동 치료의 항균 효과를 알아보고, 광감각제의 농도에 따른 광역동 치료의 효과를 평가하기 위함이다. 또한 임상 분리 균주와 표준 균주에 대한 광역동 치료의 효과를 비교해 보았다. 연구 결과, 표준 및 임상 분리 균주 모두 광감각제 처리 후 광조사를 시행한 군에서만 대조군에 비해 S. mutans의 유의한 감소가 나타났다. 또한 광조사를 시행한 군에서 첨가한 광감각제의 농도가 높을수록 S. mutans의 감소가 증가하는 것으로 나타났다. 표준 균주와 비교 시 임상 분리 균주에서는 표준 균주와 비슷하거나 약간 낮은 S. mutans의 감소가 나타났고, 이는 통계적으로 유의한 차이는 없었다(p < 0.05). 이상의 결과들로 보아 광감각제로 에리스로신의 사용과 광원으로 치과용 광중합기를 사용한 광역동 치료는 S. mutans 연관 질병에 대한 효과적인 치료 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.
저농도의 ethanol(3-7%, v/v)을 tryptic soy broth (TSB)에 첨가하여 L. monocytogenes의 증식과 생존에 미치는 효과를 이 세균의 최적온도(35$^{\circ}C$)와 저온(-20, 5$^{\circ}C$) 및 고온(45, 50, 55$^{\circ}C$)에서 검토하였다. 35$^{\circ}C$에서의 L. monocytogenes의 증식은 ethanol농도의 증가와 더불어 저해되었으며, 5% ethanol의 존재하에서는 긴 유도기를 거친 후에 증식이 시작되었으나 ethanol 7%에서는 생균수가 계속 감소하였다. 3-7%의 ethanol을 함유한 TSB에 $10^{5}$-$10^{6}$ cells/$m\ell$의 L. monocytogenes를 접종하여 저온(5$^{\circ}C$, -2$0^{\circ}C$)에 저장하였을 때 5$^{\circ}C$에서 세균은 5% 이하의 ethanol 첨가시에는 증식하였으나 -2$0^{\circ}C$에서는 저장초기에 생균수가 빠르게 감소한 후 감소속도는 느리게 진행되었다. 냉장과 동결저장에서 3%의 ethanol첨가로서 control의 90% 이상의 세균이 제거되었다. $10^{6}$-$10^{7}$ cells/$m\ell$의 L. monocytogenes를 접종하여 고온(45, 50, 55$^{\circ}C$)에 저장한 경우, L. monocytogenes의 생균수는 45$^{\circ}C$에서는 느리게 감소하였으며 3% 이하의 ethanol 첨가에 의한 항균효과는 뚜렷한 차이가 없었다. 5$0^{\circ}C$와 55$^{\circ}C$에서 생균수가 빠르게 감소하였는데 특히 55$^{\circ}C$에서는 3, 5, 7%의 ethanol첨가로서 세균의 사멸속도는 각각 control의 1.5배, 3배, 5배 정도 증가하였다.다.
Many studies on the mechanism of the inotropic action of cardiac glycosides have shown the possible intimate relationship between the mobilization of intracellular calcium and inotropic effect. Evidence obtained from recent studies suggests that cardiac glycosides may increase the intracellular $Ca^{++}$ concentration through the release of this ion from cellular or intracellular membrane. It seemed imperative to study the effect of ouabain on the interaction between mitochondria and $Ca^{++}$, because mitochondria are known to have a rather powerful $Ca^{++}$ pump mechanism which may have an important role on the regulation of intracellular $Ca^{++}$ concentration. The present investigations was made into the effect of ouabain on $Ca^{++}$ untake of mitochondria in the presence of ATP and its dependence on $K^+$ and $Na^+$ in the medium. The results are summarized as follows: 1. The rate of rise in the turbidity of superprecipitation was solely influenced by ionic strength of the medium, not by the species of ion, i.e. $Na^+$ or $K^+$. The higher ionic strength suppressed and the lower enhanced the rate of superprecipitation respectively. 2. No effect of ouabain was found on the rate of superprecipitation. 3. Mitochondria depressed the rate of superpretipitation, and the depressed rate of superprecipitation by mitochondria was reversed by ouabain, and the degree of this reversal was almost identical in $Na^+$ and $K^+$ medium. 4. $Ca^{++}$ uptake of mitochondria was inhibited by ouabain in the presence of ATP and the degree of inhibition showed the dose-response manner in terms of concentration of ouabain. 5. In the absence of ATP, mitochondria took or the $Ca^{++}$ in initial period but released it later. Such uptake and release of $Ca^{++}$ was not influenced by ouabain. 6. It is suggested that intracellular calcium mobilization by ouabain through the action upon the mitochondria was due to inhibition on ATP-dependent $Ca^{++}$ uptake by this agent, not to the action upon so called binding.
전신 진균감염 치료에 널리 사용되는 광범위 항진균제이며 대표적인 소수성 약물인 amphotericin B(AmB)의 효과적인 점막부착형 약물전달체로서 가용화제인 L-arginine, 점착성 고분자인 카보폴(carbopol), 온도감응성 고분자인 Poloxamer 407(P 407)로 구성된 하이드로젤 제형을 제조하였다. L-Arginine의 첨가로 AmB의 용해도가 2.6 mg/mL까지 향상되었으며, P 407 수용액은 20% w/v 이상의 농도에서 온도 변화에 따른 졸-젤-졸 상전이(phase transition)를 보였다. 이러한 상전이 온도는 약물 및 L-arginine의 존재에 의해 영향을 받았고, 점착성 고분자인 카보폴의 혼합에 의해 상전이 영역이 확장되었다. L-Arginine의 가용화 효과로 AmB의 약물방출특성이 향상되었고, 점착성 고분자인 카보폴의 첨가는 농도에 의존하여 약물방출을 지연시키는 효과가 있었다.
친환경 환원제인 글루코스를 사용하여 액상 반응으로 그래핀 산화물을 환원시킨 후 에어로졸 분무건조 공정을 통하여 구형의 그래핀 볼(Graphene Ball, GB)을 제조하였다. 제조된 입자는 FE-SEM 분석을 통하여 구형임을 관찰하였고, XRD 분석으로 구형 입자들의 결정형이 그래핀임을 확인하였다. GB의 구형도는 온도, 글루코스의 양, 암모니아수($NH_4OH$)의 주입에 따라 조절할 수 있었다. 제조된 GB 중, 암모니아수 주입 하에 온도가 높은 조건에서 제조된 GB가 높은 구형도를 보였다. 암모니아수 주입하에 진행된 액상반응에 주입된 글루코스의 양이 증가할수록 구형도가 높은 GB가 생성되었다. 가장 높은 구형도를 가지는 GB의 구형도는 1.1이었다. 상대적으로 높은 구형도를 가지는 GB가 낮은 구형도를 가지는 GB보다 응집성이 감소됨을 확인할 수 있었다. 추가적으로 GB의 전기화학 분석 결과를 통해 GB가 커패시터의 전극 재료로서의 가능성을 보여주었다.
혈전용해효소를 생산하는 Bacillus sp. J-19가 보편적인 한국의 조미제인 멸치젓갈에서 분리되었다. 그 혈전용해 효소는 에탄올 침전, Sephadex G-50을 이용한 젤 여과법 등을 포함하는 일련의 크로마토그래피 방법으로 순수분리 되었다. 조효소 추출액과 비교해서, 그 효소의 비활성은 1021배 증가하였고, 수율은 23%이었다. 순수분리한 효소의 분자량은 SDS-PAGE 상 약 45 kDa이었다. 특히, 합성기질인 serine protease (H-D-Ile-Pro-Arg-pNA,S-2288)에 대한 아미드활성은 약 17 U/mg이었다. 또한, 그 45 kDa 혈전용해효소의 60% 이상의 활성이 30%(w/v) sodium chloride 의 존재 하에서도 유지되었다. 이러한 발견들은 특이한 혈전용해효소를 제공해서, 실용적인 혈전용해제 개발을 유도할 수 있다.
본 연구에서 아카시아꽃잎을 기질로 미백효과와 항산화효과가 우수한 천연물질을 생산하는 플라스크 발효법을 개발하였다. 아카시아꽃잎 추출액은 tyrosinase 활성을 저해하지 않은 반면, 2년 전통발효액과 2년 전통발효액을 접종한 아카시아꽃잎 플라스크 발효액은 tyrosinase 활성을 저해하였다. 아카시아꽃잎 플라스크 발효농축액 10% 포함된 용액의 tyrosinase 활성 저해율은 40%였고 농축액 함량이 증가할수록 저해율도 증가하였다. 양성대조군인 알부틴($20mg\;mL^{-1}$)과 코직산($80{\mu}g\;mL^{-1}$)의 tyrosinase 활성 저해율은 각각 90%와 58%였다. 이는 플라스크 발효농축액 40%가 포함된 용액의 미백성능이 코직산($80{\mu}g\;mL^{-1}$)의 성능과 비슷함을 보여준다. 농축액이 20% 포함된 용액의 항산화활성은 56%였고 농도가 증가할수록 용액의 항산화활성도 점차 증가하여 농축액이 60% 포함된 용액의 항산화활성은 98%였다. 이는 항산화효과가 우수한 비타민 C 수용액($10mg\;mL^{-1}$)과 동일한 항산화능력이다. 모든 농도의 발효농축용액에서 95% 이상의 세포생존율을 나타내어 발효액은 독성이 없는 것으로 판명되었다. 실온에 보관된 아카시아꽃잎 발효상등액은 pH와 당도 변화가 없었고 분리, 변색, 및 변취 등의 관능적 성상의 변화가 없는 안정한 상태를 유지하였다. 본 결과는 아카시아꽃잎 플라스크 발효액이 안전하고 미백 및 항산화효과가 뛰어나 미백화장품 원료로 사용가능함을 보여준다. 이는 본 연구를 통하여 아카시아꽃잎 발효기간을 획기적으로 단축시킨 배양방법이 개발되었음을 시사한다.
Choudhury, Sk Mohiuddin;Bhuiyan, Mohammad Musharraf Uddin;Rahman, Mohammad Moshiur;Rahman, Md. Masudur;Sharif, Md. Newaz;Bhattacharjee, Jayonta;Bari, Farida Yeasmin;Juyena, Nasrin Sultana
한국수정란이식학회지
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제32권4호
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pp.311-317
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2017
Cryopreservation of oocytes by vitrification technique may contribute a lot in the field of reproductive biotechnology. The objectives of the present study were to evaluate the effectiveness of two cryo-devices for vitrification of immature oocytes of indigenous zebu cows. Slaughter house derived immature cumulus-oocyte-complexes (COCs) of cows were vitrified using 15% dimethyl sulphoxide (DMSO) as cryoprotective agent (CPA) with 0.5 mol sucrose in TCM 199 supplemented with 20% FBS. Vitrification of COCs was completed after immediate plunging of COCs loaded cryotop or French mini straw into the liquid nitrogen ($LN_2$). Then the COCs containing cryotop or French mini straws were warmed in 0.25 mol sucrose and 20% FBS supplemented TCM 199 followed by in vitro culture in $50{\mu}l$ droplets of bicarbonate buffered TCM 199 supplemented with 10% FBS, pyruvate, FSH and oestradiol for 24 hrs at $39^{\circ}C$ with 5% CO2 in humidified air. After maturation culture, oocytes were denuded and examined under inverted microscope for presence of polar body as the indication of maturation. Denuded oocytes were also stained by whole mount technique using 1% orcein to examine the maturation by presence of MII chromosomes. The in vitro maturation rate was significantly (p<0.05) higher in oocytes vitrified and warmed using crytop ($47.1{\pm}6.9%$) than that of French mini straw ($15.9{\pm}12.5%$). Moreover, in vitro maturation rate was significantly (p<0.05) highe r in control oocytes (not vitrified) ($84.5{\pm}14.2%$) than that of vitrified oocytes. In conclusion, cryotop is better than French mini straw as cryo-device for vitrification of bovine immature oocytes.
목적: 저산소증은 방사선 감수성을 현저히 감소시키며, 이에 대한 적응 반응에서 hypoxia-inducible factor 1 $\alpha$(HIF-1 u$\alpha$가 중요한 역할을 하고 있다. HIF-1 $\alpha$의 발현과 방사선 감수성과의 상관 관계를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 쥐의 간암 세포주인 hepalclc7 세포와 HIF-1 $\beta$가 결손되어 HIF-1 $\alpha$의 기능이 억제된 hepaIC4 세포를 사용했다 저산소 유사 물질인 desferrioxamine (DFX)을 전처치하고 6시간 뒤에 방사선조사를 하여 western blot으로 HIF-1 $\alpha$ 발현을 조사하였다. Apoptosis는 DNA 분절화, propidium iodide 핵염색, 그리고 apoptotic cell death detection ELISA kit를 이용하였다. MTT assay법으로 방사선 감수성을 측정하고 SF2$_{2}$ SF$_{8}$, 그리고 mean inactivation dose (MID)를 산출하여 통계적 분석을 하였다. 결과: Hepalclc7 세포에서는 DFX 전처치를 한 경우 방사선에 의해 HIF-1 $\alpha$의 발현이 증가했으나, hepalC4 세포 주에서는 변화가 없었다 Hepa1C4 세포의 방사선 감수성은 DFX처리에 따른 영향이 없었으나 hepalclc7 세포의 방사선 감수성은 DFX를 전처치했을 때 유의하게 감소하였다. 결론: 저산소 유사 물질인 DFX에 의해 유도된 HIF-1 $\alpha$가 쥐의 간암 세포주에서 apoptosis와 방사선 감수성을 감소시켰다 이러한 결과는 종괴내의 저산소 세포에서 방사선에 의해 HIF-1 $\alpha$가 유도되고 이로 인해 저산소 세포에서 방사선 감수성을 저하시키는 것으로 생각되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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