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착상전 이배체 단위발생 돼지난자의 체외 배양에서 세포사멸과 세포사멸에 관여하는 유전자의 발현에 관한 연구 (Apoptosis and Apoptosis Related Gene Expression in Preimplantation Porcine Diploid Parthenotes Developing In Vitro)

  • X. S. Cui;Kim, I. H.;Kim, N. H.
    • 한국가축번식학회지
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    • 제27권2호
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    • pp.169-177
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    • 2003
  • 본 연구는 착상전 이배체 단위발생 돼지난자를 체외 배양시 우태아혈청 (FBS), 우혈청 알부민 (BSA) 및 상피세포성장인자 (EGF)를 배양액에 첨가하였을 때 배반포, 총 세포수, 세포사멸 및 세포사멸에 관여하는 유전자의 발현을 조사하고자 수행하였다. 0.4% BSA를 배양액에 첨가하였을 때 2세포기 단위발생 난자의 배반포까지의 발달율이 증가되었다(P<0.01). FBS는 배반포의 총세포수를 감소시 켰고 세포사멸을 증가하였다(P<0.01). 그리고 EGF는 BSA가 존재하는 조건하에서 배반포의 총세포수를 증가하였는데 EGF와 BSA가 각각 단독으로 존재할 때는 이런 작용이 없었다. 세포사멸도 이와 이슷한 경향을 보였는데 EGF와 BSA가 각각 존재할 때에는 비처리군과 차이가 없었지만 함께 존재할 때에는 세포사멸을 감소시켰다. RT-PCR의 결과에 의하면 EGF는 BSA가 존재하는 배양액에서 Bcl-xL 유전자의 상대적 발현량을 증가시키고 Bak 유전자의 상대적 발현량에는 영향을 주지 않는 과정을 통하여 세포사멸을 감소시키는것 같다. 반면에 FBS는 Bcl-xL의 발현량을 감소시키고 Bak 유전자의 상대적 발현량을 증가시킨다. 이러한 결과는 세포사멸에 관여하는 유전자의 발현은 배양액의 첨가물에 따라 유의적으로 영향을 받으며, 체외배양시 배아의 초기발달에 관여함을 시사한다.

아연피리치온을 유효성분으로 표기한 화장품류에서 미표기 성분인 베타메타손 유도체의 검출 (Detection of Undeclared Betamethasone Derivatives in Cosmetic Products Labeled to Contain Zinc Pyrithione as the Active Ingredient)

  • 이정표;박성환;양성준;김선미;손경훈;윤미옥;최상숙
    • 대한화장품학회지
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    • 제35권1호
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    • pp.11-17
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    • 2009
  • 스테로이드 함유 표시가 없는 화장품에서 항염증 효과가 있는 글루코코티코스테로이드인 베타메타손프로피오네이트 성분이 검출되었다. 이 화장품은 외용스프레이 및 샴푸로서 주성분으로 아연피리치온을 함유하는 것으로 표기되어 있었다. 화장품에서 스테로이드 구조와 활성을 갖는 물질의 존재를 확인하기 위하여 실리카겔 박층판을 이용한 박층크로마토그래프를 사용하였으며 이 성분을 분리하기 위해 high-performance liquid chromatography (HPLC)를 이용하여 확인 및 정량을 수행하였다. 분취용 HPLC를 이용하여 스테로이드를 함유한 것으로 판단되는 분획을 모은 다음 nuclear magnetic resonance (NMR) 및 mass spectrometry (MS)를 이용하여 스테로이드 성분을 확인하였다. 스테로이드 표준물질로 베타메타손 17-프로피오네이트 및 베타메타손 21-프로피오네이트를 합성하여 사용하였고 이 표준물질과 HPLC 크로마토그램을 비교하여 스테로이드 성분의 함량을 분석하였다. 이 방법으로 아연피리치온 제제와 같은 일부 시판 화장품에서 스테로이드 성분을 확인하였고 reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP HPLC) 상의 유지시간 비교를 통하여 스테로이드 성분을 정량한 결과 시험한 총 8종의 화장품 시료 중 2개 제품에서 0.005 ${\sim}$ 0.02%의 베타메타손프로피오네이트가 검출되었다.

In Vitro Metabolism of a New Cardioprotective Agent, KR-33028 in the Human Liver Microsomes and Cryopreserved Human Hepatocytes

  • Kim Hyojin;Yoon Yune-Jung;Kim Hyunmi;Cha Eun-Young;Lee Hye Suk;Kim Jeong-Han;Yi Kyu Yang;Lee Sunkyung;Cheon Hyae Gyeong;Yoo Sung-Eun;Lee Sang-Seop;Shin Jae-Gook;Liu Kwang-Hyeon
    • Archives of Pharmacal Research
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    • 제28권11호
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    • pp.1287-1292
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    • 2005
  • KR-33028 (N-[4-cyano-benzo[b]thiophene-2-carbonyl]guanidine) is a new cardioprotective agent for preventing ischemia-reperfusion injury. This study was performed to identify the metabolic pathway of KR-33028 in human liver microsomes and to compare its metabolism with that of cryopreserved human hepatocytes. Human liver microsomal incubation of KR-33028 in the presence of NADPH and UDPGA resulted in the formation of four metabolites, M1, M2, M3, and M4. M1 and M2 were identified as 5-hydroxy-KR-33028 and 7-hydroxy-KR-33028, respectively, on the basis of LC/MS/MS analysis with the synthesized authentic standard. M3 and M4 were suggested to be dihydroxy-KR-33028 and hydroxy-KR-33028-glucuronide, respectively. Metabolism of KR-33028 in cryopreserved human hepatocytes resulted in the formation of M1, M2, and M4. These data show a good correlation between major metabolites formed in human liver microsomes and cryopreserved human hepatocytes. In addition, KR­33028 was found to inhibit moderately the metabolism of CYP1A2 substrates. Based on the results obtained metabolic pathway of KR-33028 is proposed.

PET영상용 미토콘드리아 막전위 감지기 (4-$[^{18}F]$Fluorophenyl)triphenylphosphonium의 합성 (Synthesis of (4-$[^{18}F]$Fluorophenyl)triphenylphosphonium as a Mitochondrial Voltage Sensor for PET)

  • 김동연;유국현;범희승;민정준
    • Nuclear Medicine and Molecular Imaging
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    • 제41권6호
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    • pp.561-565
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    • 2007
  • 목적: Tetraphenylphosphonium (TPP) salts를 비롯한 지용성 양이온들은 혈장 및 미토콘드리아막을 쉽게 통과할 수 있을 뿐 아니라 미토콘드리아 내의 음 전압에 이끌려 미토콘드리아의 내부에 직접적으로 섭취된다. 또한 tetraphenylphosphonium (TPP) salts는 암세포에 직접적으로 섭취될 뿐 아니라 미토콘드리아의 활동이 활발한 심근에서도 직접적 섭취가 일어나는 것으로 보고되어 있다. 따라서 이러한 특징을 가지는 tetraphenylphosphonium (TPP) salts에 $[^{18}F]$fluoride를 표지 할 수 있다면 암의 진단 및 미토콘드리아의 기능에 대해 연구 할 수 있는 새로운 분자 영상 추적자로써 사용할 수 있을 것이다. 대상 및 방법: 기준 물질인 (4-fluorophenyl)triphenylphosphonium (TPP)을 단일 반응으로 합성 하였으며, $[^{18}F]$이 표지된 TPP는 무담체$[^{18}F]$fluoride와 전구체인 4-iodophenyltrimethylammonium iodide를 이용하여 Kryptofix-2.2.2와 $K_2CO_3$존재 하에 두 단계의 반응으로 합성하였다. 결과: 기준물질인 (4-fluorophenyl) triphenylphosphonium (TPP)은 60%의 수율로 합성 되었으며, 표지 화합물인 $[^{18}F]$TPP의 방사 화학적 수율은 10-15%였다. 또한 radio TLC로 확인한 방사 화학적 순도는 $95.57{\pm}0.51%$ (n=11)이었다. 결론: 미토콘드리아의 막전위 차를 이용한 암 또는 심근 영상제제인 (4-$[^{18}F]$fluorophenyl) triphenylphosphonium의 합성에 성공하였다. 하지만 전임상, 임상에의 응용을 위해서는 방사화학적 수율을 더 개선시켜야 할 것이다.

자완치효산(紫莞治哮散散)과 과루지실탕(瓜蔞枳實湯)이 일차배양된 설치류(齧齒類) 기도(氣道) 배상세포(杯狀細胞)에서의 뮤신 분비에 미치는 영향 (Effect of Jawan-Chihyosan and Gwaru-Jisiltang on Secretion of Mucin by the First Cultivated Goblet Cells of Rodent's Airway)

  • 박정준;김윤식;설인찬
    • 동의생리병리학회지
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    • 제20권1호
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    • pp.69-75
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    • 2006
  • In the present study, the author tried to investigate whether four oriental medical prescriptions named, jawan-chihyosan (CHS), gwaru-jisiltang (GJT), and several single compounds, kaempferol, coumarin, betaine and ursolic acid significantly affect mucin release from cultured hamster tracheal surface epithelial (HTSE) cells. Confluent HTSE cells were metabolically radiolabeled with 3H-glucosamine for 24 hrs and chased for 30 min in the presence of CHS, GJT, kaempferol, coumarin, betaine and ursolic acid, respectively, to assess the effect of each agent on 3H-mucin release. Possible cytotoxicities of each agent were assessed by measuring lactate dehydrogenase(LDH) release. Additionally, total elution profiles of control spent media and treatment sample (CHS and GJT) through Sepharose CL-4B column were analysed and effect of CHS and GJT on MUC5AC mRNA expression in cultured HTSE cells were investigated. The results were as follows : (1) CHS and GJT significantly stimulated mucin release from cultured HTSE cells, with significant cytotoxicity , (2) CHS and GJT chiefly stimulated the 'mucin' release and did not affect significantly the release of the other releasable glycoproteins with less molecular weight than mucin. This result suggests that the three herbal prescriptions specifically stimulate the release of mucin ; (3) CHS and GJT significantly increased the expression levels of MUC 5AC mRNA. This result suggests that the three herbal prescriptions can affect the synthesis of mucin at gene level in cultured HTSE cells ; (4) Kaempferol and coumarin did not affect mucin release, however, betaine and ursolic acid stimulated mucin release. All the agents did not show significant cytotoxicity. We suggest that the effects of CHS and GJT, betaine and ursolic acid should be further investigated and it is of great value to find, from oriental medical prescriptions, novel agents which have the effective expectorant or mucoregulative effect on mucin secretion from airway goblet cells.

(호도약침액)胡桃藥鍼液 독성물질(毒性物質)에 의한 간조직(肝組織) 손상(損傷)에 미치는 영향(影響) (Effect of Juglandis Semen Herbal Acupuncture on Toxic Agent-Induced Liver Cell Damage)

  • 이경태;김철홍;윤현민;장경전;안창범;송춘호
    • Korean Journal of Acupuncture
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    • 제22권1호
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    • pp.117-132
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    • 2005
  • Objectives : This study was carried out to determine whether Juglandis Semen herbal acupuncture (JSA) exerts the protective effect against toxic agent-induced live. cell damage. Methods : The cell damage was estimated by measuring lactate dehydrogenase (LDH) release, and lipid peroxidation was estimated by measuring maiondialdehyde (MDA), a product of lipid peroxidation, in rabbit liver slices. Results : When tissues were incubated with 0.5 mM Hg for $10{\sim}120\;min$, LDH release and lipid peroxidation were increased as a function of incubation time, and these effects were significantly prevented by addition of 0.1% JSA. Hg increased LDH release and lipid peroxidation in dose-dependent manner over the range of $0.1{\sim}l\;mM$ concentrations, which were reduced by 0.1% JSA. When tissues were treated with 0.5 mM Hg in the presence of $0.05{\sim}l\;%$ JSA, LDH release and lipid peroxidation induced by Hg were prevented by JSA in a dose-dependent fashion. JSA at 0.5 and 1% prevented completely effects of 0.5 mM Hg. When tissues were treated with 0.5 mM Hg for 60 min, LDH release and lipid peroxidation were increased, which were significantly prevented by addition of 0.1 % JSA. tert-Butyl hydroperoxide (tBHP) increased LDH release and lipid peroxidation, which were significantly reduced by 0.1 % JSA. Such protective effects were similar to those of N,N'-diphenyl-p-phenylenediamine (DPPD), a potent antioxidant. When tissues were treated with 0.5 mM Hg, activities of catalase and glutathione peroxidase were inhibited, and glutathione content was also reduced. Such effects were prevented by JSA, but not by DPPD. JSA prevented Hg-induced morphological changes. Conclusions : These results indicate that JSA exerts the protective effect against liver cell injury induced by toxic agents through antioxidant action, and this effect may be attributed to an increase in activities of endogeous anitoxidant enzymes and GSH content. However, antioxidant effect of JSA is different from that of a well-known potent antioxidant DPPD.

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아그로박테리움 형질전환법을 이용한 수량증대 유채 식물체 개발 (Agrobacterium-mediated transformation produces transgenic oilseed rape with a high-yield trait)

  • 김종보
    • Journal of Plant Biotechnology
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    • 제50권
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    • pp.63-69
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    • 2023
  • 본 연구는 유채(Brassica napus L.)의 배축을 이용하여 수량 증대 유전자인 ORE7 그리고 선발유전자로 제초제저항성을 나타내는 bar 유전자를 Agrobacterium 기법을 이용하여 형질전환 하였다. 효율적인 유채형질전환 기법을 확립하기 위해 한국 유채 '영산' 품종의 배축 절편체를 이용하여 Agrobacterium 접종 시, 20분간의 접종시간 그리고 3일간의 공동배양기간을 적용할 때 100개의 접종된 배축 절편체들로부터 약 32-36개 개체가 PPT (Phosphinothrixin) 20 mg/l 첨가된 선발배지에서 생존하여 높은 형질전환 효율을 보여주었다. 또한 본 연구에서 도입된 선발 및 생산성 증대 유전자 도입 여부를 확인하기 위해 PCR을 수행하여 도입여부를 확인하였다. 또한 생산성 증대 유전자 ORE 7 유전자와 같이 도입된 bar 유전자의 발현여부를 확인하기 위해 0.5% Basta 용액에 처리한 결과, 제초제저항성 형질이 발현됨을 확인하였다. 본 연구결과를 통해 향후 국내 유채품종을 대상으로 Agrobacterium을 이용하여 제초제 저항성, 건조저항성. 생산성 증대 형질 그리고 오일함량 증대 등의 유용형질 개량에 이용되리라 판단된다.

광역동 치료가 구강 내에서 분리한 수종의 Streptococcus mutans의 생존력에 미치는 영향 (THE EFFECT OF PHOTODYNAMIC THERAPY ON THE VIABILITY OF STREPTOCOCCUS MUTANS ISOLATED FROM ORAL CAVITY)

  • 정지숙;박호원;이주현;서현우;이시영
    • 대한소아치과학회지
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    • 제39권3호
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    • pp.233-241
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    • 2012
  • 광역동 치료는 광감각제가 빛에 의해 활성화되면서 발생하는 화학 반응을 이용한 것으로, 치료 원리는 광화학 반응으로 자유 라디칼 및 반응성 산소가 생성되고 이 산물들에 의한 세포 독성으로 항균 효과를 가지게 되는 것이다. 이 연구의 목적은 치과 임상에서 널리 사용되는 광원(할로겐, LED)과 광감각제(erythrosine)를 이용하여, 치아 우식증과 연관된 세균인 Streptococcus mutans에 대한 광역동 치료의 항균 효과를 알아보고, 광감각제의 농도에 따른 광역동 치료의 효과를 평가하기 위함이다. 또한 임상 분리 균주와 표준 균주에 대한 광역동 치료의 효과를 비교해 보았다. 연구 결과, 표준 및 임상 분리 균주 모두 광감각제 처리 후 광조사를 시행한 군에서만 대조군에 비해 S. mutans의 유의한 감소가 나타났다. 또한 광조사를 시행한 군에서 첨가한 광감각제의 농도가 높을수록 S. mutans의 감소가 증가하는 것으로 나타났다. 표준 균주와 비교 시 임상 분리 균주에서는 표준 균주와 비슷하거나 약간 낮은 S. mutans의 감소가 나타났고, 이는 통계적으로 유의한 차이는 없었다(p < 0.05). 이상의 결과들로 보아 광감각제로 에리스로신의 사용과 광원으로 치과용 광중합기를 사용한 광역동 치료는 S. mutans 연관 질병에 대한 효과적인 치료 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.

저농도의 Ethanol에 의한 Listeria monocytogenes의 증식억제 (Inhibition of Listeria monocytogenes by Low Concentrations of Ethanol)

  • 박찬성;김미림
    • 한국식품조리과학회지
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    • 제11권4호
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    • pp.379-385
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    • 1995
  • 저농도의 ethanol(3-7%, v/v)을 tryptic soy broth (TSB)에 첨가하여 L. monocytogenes의 증식과 생존에 미치는 효과를 이 세균의 최적온도(35$^{\circ}C$)와 저온(-20, 5$^{\circ}C$) 및 고온(45, 50, 55$^{\circ}C$)에서 검토하였다. 35$^{\circ}C$에서의 L. monocytogenes의 증식은 ethanol농도의 증가와 더불어 저해되었으며, 5% ethanol의 존재하에서는 긴 유도기를 거친 후에 증식이 시작되었으나 ethanol 7%에서는 생균수가 계속 감소하였다. 3-7%의 ethanol을 함유한 TSB에 $10^{5}$-$10^{6}$ cells/$m\ell$의 L. monocytogenes를 접종하여 저온(5$^{\circ}C$, -2$0^{\circ}C$)에 저장하였을 때 5$^{\circ}C$에서 세균은 5% 이하의 ethanol 첨가시에는 증식하였으나 -2$0^{\circ}C$에서는 저장초기에 생균수가 빠르게 감소한 후 감소속도는 느리게 진행되었다. 냉장과 동결저장에서 3%의 ethanol첨가로서 control의 90% 이상의 세균이 제거되었다. $10^{6}$-$10^{7}$ cells/$m\ell$의 L. monocytogenes를 접종하여 고온(45, 50, 55$^{\circ}C$)에 저장한 경우, L. monocytogenes의 생균수는 45$^{\circ}C$에서는 느리게 감소하였으며 3% 이하의 ethanol 첨가에 의한 항균효과는 뚜렷한 차이가 없었다. 5$0^{\circ}C$와 55$^{\circ}C$에서 생균수가 빠르게 감소하였는데 특히 55$^{\circ}C$에서는 3, 5, 7%의 ethanol첨가로서 세균의 사멸속도는 각각 control의 1.5배, 3배, 5배 정도 증가하였다.다.

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Mitochondria의 Calcium Uptake에 미치는 Ouabain의 영향 (Effect of Ouabain on the Interaction of Mitochondria with Calcium)

  • 홍사악;박찬웅;김명석;정명희
    • 대한약리학회지
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    • 제8권1호
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    • pp.67-75
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    • 1972
  • Many studies on the mechanism of the inotropic action of cardiac glycosides have shown the possible intimate relationship between the mobilization of intracellular calcium and inotropic effect. Evidence obtained from recent studies suggests that cardiac glycosides may increase the intracellular $Ca^{++}$ concentration through the release of this ion from cellular or intracellular membrane. It seemed imperative to study the effect of ouabain on the interaction between mitochondria and $Ca^{++}$, because mitochondria are known to have a rather powerful $Ca^{++}$ pump mechanism which may have an important role on the regulation of intracellular $Ca^{++}$ concentration. The present investigations was made into the effect of ouabain on $Ca^{++}$ untake of mitochondria in the presence of ATP and its dependence on $K^+$ and $Na^+$ in the medium. The results are summarized as follows: 1. The rate of rise in the turbidity of superprecipitation was solely influenced by ionic strength of the medium, not by the species of ion, i.e. $Na^+$ or $K^+$. The higher ionic strength suppressed and the lower enhanced the rate of superprecipitation respectively. 2. No effect of ouabain was found on the rate of superprecipitation. 3. Mitochondria depressed the rate of superpretipitation, and the depressed rate of superprecipitation by mitochondria was reversed by ouabain, and the degree of this reversal was almost identical in $Na^+$ and $K^+$ medium. 4. $Ca^{++}$ uptake of mitochondria was inhibited by ouabain in the presence of ATP and the degree of inhibition showed the dose-response manner in terms of concentration of ouabain. 5. In the absence of ATP, mitochondria took or the $Ca^{++}$ in initial period but released it later. Such uptake and release of $Ca^{++}$ was not influenced by ouabain. 6. It is suggested that intracellular calcium mobilization by ouabain through the action upon the mitochondria was due to inhibition on ATP-dependent $Ca^{++}$ uptake by this agent, not to the action upon so called binding.

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