• 한국축산식품학회지
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• 제39권3호
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• pp.459-473
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• 2019

Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) has low resistance to low pH and bile salt in the gastrointestinal juice. In this study, the gel made from whey protein concentrate (WPC) and pullulan (PUL) was used as the wall material to prepare the microencapsulation for LGG protection. The gelation process was optimized and the properties of gel were also determined. The results showed the optimal gel was made from 10% WPC and 8.0% PUL at pH 7.5, which could get the best protective effect; the viable counts of LGG were 6.61 Log CFU/g after exposure to simulated gastric juice (SGJ) and 9.40 Log CFU/g to simulated intestinal juice (SIJ) for 4 h. Sodium dodecyl sulphite polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) confirmed that the WPC-PUL gel had low solubility in SGJ, but dissolved well in SIJ, which suggested that the gel can protect LGG under SGJ condition and release probiotics in the SIJ. Moreover, when the gel has highest hardness and water-holding capacity, the viable counts of LGG were not the best, suggesting the relationship between the protection and the properties of the gel was non-linear.

• 한국식물병리학회지
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• 제3권4호
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• pp.239-244
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• 1987

감자 걀쪽바이로이드(PSTV) RNA분자를 포함한 저분자량의 식물성 RNA분자에 대해서 0M부터 8M까지의 요소농도구배를 가진 폴리아크릴아마이드겔을 이용하여 1/40, 1/10로 희석한 완충액조건과 $17^{\circ}C,\;37^{\circ}C,\;57^{\circ}C$의 온도조건에서 전기영동을 실시하였다. 바이로이드의 RNA분자가 환상과 선상의 두가지 분자로 나뉘어지는 변성조건에서는 1/40로 희석한 TBE완충액을 포함하는 요소농도구배겔을 $57^{\circ}$에서 전기영동을 실시하는 것이 효과적이었다. 변성된 환상의 바이로이드분자에 대한 전기 영동적 이동성은 주로 요소의 농도에 따라 영향을 받는 것으로 보이는데, 이와 더불어 저 농도의 TBE완충액이 요소농도구배겔에서 환상과 선상바이로이드분자 사이에서 전기영동적 분리를 증가시켜 주었다.

• 한국동물학회지
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• 제26권3호
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• pp.211-217
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• 1983

한국인집단에서 Transferrin C subtypes와 Haptoglobin polymorphism의 분포 및 유전자 빈도에 관한 본 연구에서 얻은 결과는 다음과 같다. 제주집단에서 관찰된 Transferrin C subtypes은 주로 $T_{f}C_{1}, T_{f}C_{2}$ 및 $T_{f}C_{1}-C_{2}$형이었는데 $T_{f}C_{1}$과 $T_{f}C_{1}-C_{2}$이 51%와 42%로 나타났으며, 유전자 빈도는 $T_{f}C^{1}, T_{f}C^{2} 및 T_{f}D^{Jeju}$가 각각 0.7220, 0.2743 및 0.0037이었다. Haptoglobin의 유전자 빈도는 서울집단에서 460명, 제주집단에서 502명을 대상으로 추정한 결과 서울집단에서 $Hp^1 = 0.304, Hp^2 = 0.696$이었고, 제주집단에서는 0.269와 0.731이었으며 두 집단사이에 빈도 차이는 유의하지 않았다.

• 대한의생명과학회지
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• 제8권4호
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• pp.211-215
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• 2002

The baculovirus/Sf9 cell expression can be employed as a powerful system for producing large amounts of the human erythrocyte glucose transporter, GLUT1 heterologously In order to exploit the system further, it is necessary to develop a convenient method for demonstrating that the transporter expressed in insect cells is biologically active. To achieve this, we have expressed the human CLUT1 in insect cells and photolabelled the expressed protein with [$^3$H] cytochalasin B, a potent inhibitor of the human erythrocyte glucose transporter. Subsequently, the labelled proteins were analysed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Membranes labelled with [$^3$H] cytochalasln B in the presence of L-Glucose yielded a single sharp peak of labelling of apparent $M_r$ 45,000 on SDS/polyacrylamide gels. The mobility of this peak corresponded exactly to that of the band detected by anti-glucose transporter antibodies on Western blots of membranes prepared from insect cells infected with recombinant virus. In addition, the sharpness of the radioactive peak provides further evidence for the conclusion that the expressed protein is much less heavily and heterogeneously glycosylated than its erythrocyte counterpart. No peak of labelling was seen with the membranes prepared from non-infected Sf9 cells. Furthermore, the incorporation of label into this peak was completely inhibited by the presence of 500 mM-D-Glucose during tile photolabelling procedure, showing the stereoselectivity of the labelling. These evidences clearly show that human glucose transporter expressed in insect cells exhibits native-like biological activity, and that photolabelling with [$^3$H] cytochalasin B can be a convenient means for analysing the biological activity of the transport protein expressed in insect cells.

• Applied Biological Chemistry
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• 제42권1호
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• pp.39-44
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• 1999

각각 다른 성장기의 한우 등심에서 추출한 단백질을 이차원 전기영동법으로 분리하여 젤 상의 단백질 전개 양상을 비교하였다. 성장 0, 6, 12, 24 개월령의 한우 등심 단백질들을 길이 16 cm 튜브젤에서 등전점에 따라 분리하고, 이차원적으로 $18{\times}20$ cm, 12% SDS-polyacrylamide gel 전기영동 하여 단백질을 분리하였다. 등전점 3.0에서 9.0 그리고 분자량 15,000에서 100,000 Da 사이의 단백질들이 분리되어 Silver 염색법으로 명확히 구분할 수 있었다. 흥미롭게, 성장과정에서 단백질 발현이 증가했거나 감소한 단백질들은 저분자 단백질들 이었다. 성장 과정 중 증가된 단백질들을 분리하기 위해 수용성 단백질들을 조직으로부터 1% Triton X-100 으로 추출하였다. 그리고 이를 30%와 50% 황산암모니아로 분획하였다. 이와 같이하여 각 단백질들의 분리조건을 결정하였다. 이들 조건을 이용하여 발현이 증가된 단백질들을 분리하고 PVDF membrane에 옮겨서 아미노산 서열을 결정하여 단백질을 규명하였다.

• KSBB Journal
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• 제5권2호
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• pp.141-149
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• 1990

Aspergillus niger유래의 $\beta$-glucosidase를 (1)glutarald-ehyde를 가교제로 한 chitin과 chitosan담체에 covalent linkage (2)Amberite IRA93과 DEAE-cellulose담체에 succinylation시킨 후 흡착, 그리고 (3)alginarte, polyacry-lamide를 각종 가교제를 이용 entrapment등의 방법으로 고정화 하였다. Glutaraldehyde를 가교제로써 chitosan을 활성화시킨후 $\beta$-glucosidase를 고정화 시켰을때 효소활성 회수율이 31.5%로 가장 높았고, 또한 column형 반응기에서의 15일 경과 후 효소활성 유지도도 69%로서 가장 우수하였다. 또한 succinylation시킨 효소를 Amberite IRA93 담체에 흡착시켰을 때 효소활성 회수율은 24.7%였고 효소 활성유지도는 62%였다. 반면에 entra-pment 방법에 의한 $\beta$-glucosidase의 고정화는 효소의 계속적인 용출로 $\beta$-glucosidase의 고정화에는 적합하지 않았다. Chitosan담체에서의 고정화 최적조건을 조사한 결과 가교제인 glutaraldehyde의 최적농도는 0.4%였고, glutaraldehyde의 최적 반응 pH는 4.8이었다. 또한 column형 반응기를 이용하여 cellobiose로부터 glucose로의 전환율을 조사하여 고정화 효소의 효용성을 검토하였다.

• 한국동물학회지
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• 제33권2호
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• pp.191-199
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• 1990

토끼의 골격근에서 근소포체를 순수 분리하여 SDS-polyacrylamide gel전기영동법과 125 I-concanavalin A표지법으로 단백질과 당단백질의 조성을 조사하였다. 전기영동사에 나타난 대표적인 단백질은 $Ca^2$+-AThase, 80 Kd protein,calsequestrin,high affinity calcium binding protein, intrinsic glycoprotein이었으며, 160 Kd protein, 94 Kd protein,38 Kd protein, 34 Kd protein,24 Kd proteins도 존재하였다.특히, 막성계에 있는 heak protein으로 알려져 있는 80 Kd protein은 본 연구를 통해 주로 근소포체의 terminal cisternae에 들어 있음이 확인되었다. 한편 125 I-concanavalin A표지에 의해 전기영동성에 나타난 대표적인 당단백질은 160 Kd glycoprotein, 94 Kd glycoprotein, calsequestrin, intrinsic glycoprotein의 4종이었다. 이 가운데 94 Kd glycoprotein은 94 Kd glucose-regulated protein으로 추정되며, 본 연구를 통해 근소포체에서도 특히 T-tubule에 다량으로 존재함이 밝혀졌다.

• 한국식품과학회지
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• 제21권5호
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• pp.726-734
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• 1989

우유 지방구막의 고밀도 표피에 결합된 지질의 조성을 분석하기 위하여 지방구막의 고밀도 표피부분을 여러 농도의 비이온성 세제 Triton X-100으로 처리하였고 세제에 용해되지 않는 물질, 즉 지방과 결합된 성분을 분석하였다. 유지방구막의 단백질, 인지질, 콜레스테롤과 ganglioside의 양은 Triton X-100의 농도가 증가함에 따라 감소하였다. 불용성 표피물질로서 butyrophilin(band 12), xanthine oxidase (band 3)와 band 16이 SDS-polyacrylamide gel을 이용한 전기영동에서 나타났다. Phosphatidyl ethanolamine, phosphatidyl choline, phosphatidyl serine, phosphatidyl inositol 및 spingomyeline 함량은 처리되지 않은 원래의 막의 것과 큰 차이가 있어 표피물질의 주요 인지질로 규명되었다. 전체 지질에서 지방산은 myristate, palmitate, stearate(주요 포화지방산), oleate, linoleate(주요 불포화지방산)이었다. 단백질에 결합된 콜레스테롤은 다른 성분에서보다 단백질에 더 견고하게 부착되어 있었다. Ganglioside의 함량은 Triton X-100의 농도가 증가함에 따라 비례 감소하였다.

• 농업과학연구
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• 제45권4호
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• pp.635-643
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• 2018

Bovine milk is widely consumed by humans and is a primary ingredient of dairy foods. Proteomic approaches have the potential to elucidate complex milk proteins and have been used to study milk of various species. Here, we performed a proteomic analysis using 2-dimensional electrophoresis (2-DE) and matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometer (MALDI-TOF MS) to identify whey proteins in bovine milk obtained soon after parturition (bovine early milk). The major casein proteins were removed, and the whey proteins were analyzed with 2-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2-D PAGE). The whey proteins (2 mg) were separated by pI and molecular weight across pH ranges of 3.0 - 10.0 and 4.0 - 7.0. The 2-DE gels held about 300 to 700 detectable protein spots. We randomly picked 12 and nine spots that were consistently expressed in the pH 3.0 - 10.0 and pH 4.0 - 7.0 ranges, respectively. Following MALDI-TOF MS analysis, the 21 randomly selected proteins included proteins known to be present in bovine milk, such as albumin, lactoferrin, serum albumin precursor, T cell receptor, polymeric immunoglobulin receptor, pancreatic trypsin inhibitor, aldehyde oxidase and microglobulin. These proteins have major functions in immune responses, metabolism and protein binding. In summary, we herein identified both known and novel whey proteins present in bovine early milk, and our sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis revealed their expression pattern.

• 한국생명과학회:학술대회논문집
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• 한국생명과학회 2002년도 제38회 학술심포지움
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• pp.20-47
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• 2002

Two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) maps for human stomach tissue proteins have been prepared by displaying the protein components of the tissue by 2-DE and identifying them using mass spectrometry. This will enable us to present an overview of the proteins expressed In human stomach tissues and lays the basis for subsequent comparative proteome analysis studies with gastric diseases such as gastric cancer. In this study, 2-DE maps of soluble fraction proteins were prepared on two gel images with partially overlapping pH ranges of 4-7 and 6-9. On the gels covering pH 4-7 and pH 6-9, about 900 and 600 protein spots were detected on silver staining, respectively. For protein identification, proteins spots on micropreparative gels stained by colloidal Coomassie Brilliant Blue G-250 were excised, digested in-gel with trypsln, and analyzed by peptide mass fingerprinting with delayed extraction-matrix assisted laser dosorption/ionization-mass spectrometry (DE-MALDI-MS). In all, 243 protein spots (168 spots in acidic map and 75 spots in basic map) corresponding to 136 different proteins were identified. Besides these principal maps, maps of lower resolution, i.e. overview maps (displayed on pH 3-10 gels) for total homogenate and soluble fraction, are also presented with some identifications mapped on them. Based on the 2-DE maps presented in this study, a 2-DE database for human stomach tissue proteome has been constructed and available at http://proteome.gsnu.ac.kr/DB/2DPAGE/Stomach/. The 2-DE maps and the database resulting from this study will serve important resources for subsequent proteomic studies for analyzing the normal protein variability in healthy tissues and specific protein variations in diseased tissues.