• 대한수의학회지
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• 제29권3호
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• pp.303-313
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• 1989

To investigate the epidemiological trait of intestinal diseases of animals caused by thermophilic Campyllobacter spp., isolation of etiological agent was carried out and the profiles of plasmids and the transfer of resistance plasmid in the isolated Campylobacter spp. were examined. The results were as follows. 1. A total of 110 isolates of C jejuni and C coli were subjected to the test for the presence of plasmid DNA. Of the isolates examined, 60% of the isolates were noted to harbor plasmid DNA. Plasmid occurrencer ate from pigs, chickens and cattle were 76.2%, 61.7% and 37.7%, respectively. The plasmids of a large molecular weight, ranging from 36 Md to 86Md, were identified with the strains of tetracycline resistant. 2. Transfer frequency of tetracycline resistant plasmids was higher in the case of the filter mating method than in the broth mating method by the factor of 10~1,000. 3. Tetracycline resistant plasmids of C jejuni were transferrable to C jejuni and C coli by conjugation. In a low frequency, the transfer of tetracycline plasmid was also possible to Vibrio parahemolyticus. However, it was impossible to transfer to Streptococcus fecalis, E coli and Vibrio cholerae. 4. Tetracycline resistant plasmids of C jejuni were impossible to transfer to Campylobacter spp. and related bacteria by transformation.

• 미생물학회지
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• 제23권2호
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• pp.138-146
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• 1985

포도당 이성화효소를 coding는 Bacillus licheniformis ATCC31667의 유전자를 Escherichia coli LE 392-6에 클로닝하였다. Bacillus lieheniformis 염색체 DNA를 분리하고 제한효소인 Pst I.HindIII, Sal 1, EcoR 1, BamH1으로 절단한 후 운반제 plasmid인 pBR332에 연결하고 포도당 이성화효소 negative인 E. coli LE 3926-6에 형질전환하였다. 이중 E채꺄 제한효소를 사용한 것만이 glucose isomerase positive로 전환되어 xylose를 유일 탄소원으로 하여 성장하였다. 이 제조합 plasmid를 제한효소로 처리하여 본 결과 4.1Kb의 Bacillus licheniformisdb전자가 옮겨 졌음을 확인했고 여기에 제한효소 HindII와 Puv II의 절단위치가 확인되어 제한요소 지도를 작정하였다. 이 재조합 plasmid pBGI6는 연속계대 10일 후에도 매우안정하게 유지되었다. 한편 포도당 이정화 효소의 안정을 측정하여 본 바 야생숙주에 비해 약 20배의 증가를 나타냈다.

• 미생물학회지
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• 제25권1호
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• pp.57-66
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• 1987

E. coli의 한 변종안 LeB 850 strain을 MNNG되 저해하여 MMS에 대해 증가된 빈감성을 갖는 변종들 분리하다. 이 들에 대해 효소 황동도, 간단한 알켈화제 시약에 대한 띤감성을 조사하고, bacteriophage을 이용한 숙주세포 재활성도 능력 평가 알칼화제 실시하여 이 들을 확정지었다. E. coli의 변종인 5-62뉴 3-methyladenine DNA glycosylase II의 효소 활능도가 전혀 없었으며, 알킬화제 시약인 M:ING와 1\1MS에 대한 매우 증가된 민감성을 보였다. 또한 이 변종 5-62는 MMS가 처리된 phage charon 35-을 숙주내에 셔 새황성화 시키는 능력이 현저히 부족하였다. 변종 5-62에서 MMS에 대해 증가 된 저항성을 주는 MMS+ gene을 cloning 하였다. 재조합 plasmid인 pMRG 1은 변종 5-62에서 MMS에 대한 민감도달 감소시켰으나 MMS에 대한 민감도는 변화 시키시 몫했다. 이 plasmid를 포착한 변종 5-62는 0.5$\mu$g/ml의 MNNG를 $37^{\circ}C$에서 2 시간 처리 하였을때 MMS의 저항성을 보다 촉진시켰다. 재조합 plasmid인 pMRG 1이 alk A 변이와 ada 변이를 회복시키지 못했으나, MMS가 처리된 파지를 재활성화 시키는 능력은 이 plasmid가 없는 변종보다 증가시컸다.

• 생명과학회지
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• 제27권8호
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• pp.857-863
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• 2017

FosB (FBJ murine osteosarcoma viral oncogene homolog B) 유전자는 사람의 19번 염색체에 위치하고 있으며 약 43 KD의 단백질을 코딩하며, 발생 및 분화과정, 개체 유지, 발병 진행 등을 조절한다고 알려져 왔다. 본 연구에서는 바이오 마커 등의 가능성이 있다고 보고된 FosB 유전자의 프로모터를 클로닝하여 활성도를 분석하고자 하였다. FosB genomic DNA 서열을 확인한 결과, TSS upstream 방향의 약 1 Kb 안쪽 부위에 FosB 유전자 발현을 위한 중요한 요소들이 있을 것으로 추정하였고, 따라서 FosB genomic DNA의 upstream -1,555 부위부터 exon 1의 +73까지 부위에 대한 PCR 증폭을 수행하였다. 또한 클로닝 성공을 높이기 위하여 일차로 $TA-1^{st}FosBp$ plasmid를 얻은 후, 다시 $TA-1^{st}FosBp$ plasmid를 template로 Kpn1과 Nhe1 제한 효소 절단부위를 프라이머에 삽입한 후 제작하여 2차 PCR을 수행하였으며, $TA-2^{nd}FosBp$ 플라스미드를 제작한 후 제한 효소로 절단하여 pGL3-luc vector로 subcloning하였다. 제작된 pGL3-FosBp-luc를 이용하여 항암제에 대한 활성도를 분석하고자 A549 사람 폐암세포주에 pGL3-FosBp-luc 플라스미드를 transfection 한 후 luciferase 활성도 분석을 수행하였다. Luciferase 활성도 증가는 doxorubicin, taxol 등을 처리한 후 단백질 발현 양상과 비교 하였을 때도 일치되는 결과를 얻을 수 있었다. 그러므로 FosB프로모터 클로닝은 향후 유전자 발현 연구, 마커분석 등에 유용할 것으로 사료된다.

• 미생물학회지
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• 제27권1호
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• pp.10-15
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• 1989

Mammalian cell 연구에 쓰기 위해 개발된 SV 40 transcriptional promoter를 함유하는 pKOneo plasmid를 발암 유전인자 연구에 쓰이는 NIH3T3 쥐 세포에 stable transfection 시켜 7개의 sub clones 얻었으며, 이 subclones이 갖는 세포 형질전환에 관한 여러가지 성질을 조사하였다. 실험결과에 따르면 stable transfection 후 세포 염색체에 삽입된 pKOneo plasmid 자체만으로도 NIH3T3 세포의 형질전환을 크게 일으키는 것으로 사료되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권3호
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• pp.271-279
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• 1992

내알카리성 및 내열성 xylanase를 생산하는 토양분리균인 Bacillus stearothermophilus의 chromosomal DNA와 pBR322 plasmid DNA의 HindIII 절단 DNA 단편을 ligation 시켜 E.coli HB101들 형질전환, 약 5천개의 형질전환체를 얻었으며 이들 중에서 세개의 xylanase 양성 형질전환체를 분리하였다. 상기 세 xylanase 양성 형질전환체들로부터 분리한 제조합 plasmid(pMG11, pMG12 및 pMG13)는 다 같이 xylanase 활성과 관계되는 B.stearothermophilus 유래의 동일 4kb 외래 DNA를 가지고 있었으나, pMG13은 외래 DNA의 삽입 방향만이 다름을 확인하였다.

• KSBB Journal
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• 제16권1호
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• pp.36-40
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• 2001

In order to study the molecular mechanism of $\gamma$-aminobutyric acid (GABA) production in plants, we cloned and sequenced a partial glutamate decarboxylase (GAD) cDNA from the Arabidopsis thaliana cDNA library, using primers targeted at highly conserved sequences of the petunia GAD gene. The cDNA fragment was inserted into TA cloning vector with T7 promoter and the recombinant plasmid obtained was used to transform E. coli. The plasmid DNA purified from the transformed E. coli was digested with EcoRI and the presence of the insert was confirmed. Nucleotide sequence analysis showed that the fragment is a partial Arabidopsis thaliana GAD gene and that the sequence showed 98% and 78% identity to the region of the putative Arabidopsis thaliana GAD sequences deposited in GenBank, Accession nos: U46665 and U10034, respectively. The amino acid sequence deduced from the partial Arabidopsis thaliana GAD gene showed 99% and 91% identities to the GAD sequences deduced from the genes of the U46665 and U10034, respectively. The partial cDNA sequence determined may facilitate the study of the molecular mechanism of GABA metabolism in plants.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권6호
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• pp.647-652
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• 1990

Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD1의 내 독소생산과 내독소단백질 유전자의 클로닝에 관한 연구를 하였다. 상기 균주는 아포생성기간 중에 이중피라미드형의 내독소를 생산하였고, 크리는 약 $2.9\times 1.0 \mu m$이었다. 상기 균주는 약 10개의 플라수미드 DNA를 가지고 있었으며, 플라스미드의 분자량의 범위는 2.1에서 80kilobases였다. 플라스미드 73kb, BamHI 절단 29Kb DNA 단편과 PstI 절단 7.9Kb DNA는 Probe DNA와 혼성화되었다. PstI 7.9Kb DNA를 추출하여 운반체인 pBR322 운반체의 PstI 절단부위에 삽입하여 클로닝한 후에 E.coli HB101 균주에 형질전환하였으며, 이 클로운을 pKL-20-1로 명명했고 이 형질전환체는 Bombyxmori 유충을 치사시키는 독소물질을 생산하였다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제30권1호
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• pp.68-74
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• 2014

Chrysanthemum stunt viroid (CSVd), a noncoding infectious RNA molecule, causes seriously economic losses of chrysanthemum for 3 or 4 years after its first infection. Monomeric cDNA clones of CSVd isolate SK1 (CSVd-SK1) were constructed in the plasmids pGEM-T easy vector and pUC19 vector. Linear positive-sense transcripts synthesized in vitro from the full-length monomeric cDNA clones of CSVd-SK1 could infect systemically tomato seedlings and chrysanthemum plants, suggesting that the linear CSVd RNA transcribed from the cDNA clones could be replicated as efficiently as circular CSVd in host species. However, direct inoculation of plasmid cDNA clones containing full-length monomeric cDNA of CSVd-SK1 failed to infect tomato and chrysanthemum and linear negative-sense transcripts from the plasmid DNAs were not infectious in the two plant species. The cDNA sequences of progeny viroid in systemically infected tomato and chrysanthemum showed a few substitutions at a specific nucleotide position, but there were no deletions and insertions in the sequences of the CSVd progeny from tomato and chrysanthemum plants.

• 미생물학회지
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• 제31권2호
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• pp.136-140
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• 1993

A awamori 의 glucoamylase 유전자와 A. nidolans 의 trpC maker 유전자를 가진 A. nidulans 의 expression vector 를 만들었다. 이재조합 plasmid 를 트립토판 영양요구주의인 A. nidulans B17 에 형질전환시켰다. Southern blotting 으로 vector DNA 가 A. nidulans 의 chromosomal DNA 에 integration 된 것을 확인하였다. Northern blotting 의 결과, glucoamylase 유전자는 induction 조건에서 mRNA 를 합성하였다. glucoamylase 의 역가가 형질전환체에서 증가하였으며, nondenaturing polyacrylamide gel 에서 glucoamylase 의 활성이 나타났다.