본 연구는 multiplex real-time PCR을 이용하여 Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythus, Treponema denticola, Prevotella intermedia 등과 같은 6종의 주요 치주 질환 원인 미생물들을 동시에 검출할 수 있는 분석 방법에 관한 것이다. 4개의 형광 염료를 사용하여 internal control과 함께 3개의 균종씩 나누어 분석하였으며, 분석 대상 균종 간 그리고 다른 종류의 구강 미생물 균종과의 간섭과 교차 반응이 없음을 확인하였다. 본 연구의 multiplex real-time PCR은 타액과 플라그 등의 다양한 샘플에 포함되어 있는 각 미생물들을 정성, 정량적으로 분석할 수 있었으며, 치주염 환자와 건강한 사람들에 대한 비교 분석 결과 분명한 차이를 발견 할 수 있었다.
고해상도 경동맥 자기공명영상(MRI)을 이용하여 경화판 특성을 파악할 수 있다. MRI는 경화판의 활동성 염증이나 경화판내 출혈을 비침습적으로 진단할 수 있는 능력이 있다. 3T MRI는 1.5T MRI에 비해 신호 대 잡음비와 대조도 대 잡음비가 높다. 동맥벽의 면적이나 표준화된 동맥벽 면적을 MRI로 측정하면 약물 치료 후 반응을 평가할 수 있다. 결론적으로 고행상도 MRI는 일과성 허혈이나 뇌졸중을 발생하기 쉬운 경화판의 진단과 치료 후 평가에 유용하다.
위염 및 위암 등의 발생과 관련되어 있는 Helicobacter pylori(H. pylori)는 구강의 치태와 타액에서 주로 발견이 된다. 유년시절 동안 주로 감염되는 것으로 알려져 있지만 감염경로는 불분명하다. 구강이 H. pylori의 두 번째 서식지로서 전염경로 및 위장내 H. pylori의 제균 후 재감염에 중요한 영향을 끼칠 수 있는지는 논쟁이 되고 있다. 따라서 본 저자는 문헌고찰을 통하여 구강 내에 존재하는 H. pylori에 관하여 알아보고자 하였다. 위장에 존재하는 H. pylori는 위인두반사나 구토에 의해 구강 내 발현될 수도 있으나, 구강과 위의 감염은 서로 관련성이 없는 것으로 보고되고 있다. 진단방법으로는 혈청학적검사, 요소호기검사, 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction: PCR)방법, Urease검사, 조직검사 등이 있으나, 타액과 치태에서는 nested PCR 방법이 주로 추천되어 진다. 구강 내 감염율은 다양하게 나타나며, 치과질환과의 연관성은 없는 것으로 사료된다. 그러나 치주질환 환자의 구강 내에서 발현율은 높게 나타나므로, 주의가 요구되며 향균 구강세척제의 사용이 권유된다. 결과적으로 구강 내 H. pylori는 정상세균총으로 사료되며, 향후 구강내 H. pylori에 관한 추가적인 많은 연구가 필요하리라 사료된다.
치아는 주기적으로 치과에 가서 검진을 하지 않으면 평소에 통증이나 불편이 있기 전에는 치아 질병을 알아차리기 어렵다. 치석은 구강 내 음식 또는 이물질과 세균의 결합으로 생성된다. 치석을 이루고 있는 세균으로부터 전분이 분해되는데 이때 발생하는 산이 치아의 법랑질을 녹여 충치가 되기 때문에 치석관리가 중요하다. 입속 세균의 대사 산물인 포피린은 405nm 파장에서 반응하여 붉은 형광을 띠게 되며 특정 파장의 필터를 거치면 영상으로 세균을 확인할 수 있다. 위의 방법으로 프라그 및 치석을 형광으로 검출하고 500nm 이상의 파장을 통과시키는 노란색 계열의 필터를 카메라 앞에 부착하여 촬영한다. 이는 매트랩을 이용하여 이미지 영상처리를 통해 적색 형광 부분을 검출 후 표시한다. 또한, 광계측 회로를 통해 정상 치아와 치석의 치아 전압값 차이를 이용해 아두이노로 연결하여 LCD에 표시한다. 사용자는 이를 통해 보다 정확한 치석의 유무와 위치를 알 수 있다.
본 연구에서는 기존에 임상에서 염색제를 사용한 치면세균막검사와 periodental probe를 사용한 치은지수 평가방법대신 새로운 디지털 형광 장비인 QLF-D를 이용한 검사법의 활용 가능성을 확인하고자 하였다. 염색제를 이용하여 치면세균막지수를 산출하여 연구 대상자를 위험군별로 구분하여 일반적 특성을 확인하였고, 분석 소프트웨어를 이용하여 산출되는 QLF-D score와 전체 및 전치부 치면세균막지수, 치은지수의 상관성을 확인하였다. 정상치은과 치은염에 따른 QLF-D score를 비교하였고, 각 QLF-D score에 따른 치면세균막지수와 치은지수의 평균값을 비교하여 다음과 같은 결론을 내렸다. 연구대상자의 염색제를 이용한 평균 치면세균막지수는 $42.28{\pm}17.90$이었고, 6개의 선택치아의 치은지수는 $1.05{\pm}20.38$로 나타났으며, QLF-D score는 $1.26{\pm}1.50$이었다. 상하악전치부 QLF-D score와 치면세균막염색을 이용하여 평가한 전치부 치면세균막지수의 상관 분석 결과, 유의한 양의 상관관계를 확인하였다(r=0.638, p<0.001). 또한 상하악 전치부 QLF-D score와 periodontal probe를 이용한 치은지수와의 관계를 분석한 결과에서도 두 가지 평가 지표 간에 유의한 양의 상관관계를 보였다(r=0.562, p<0.001). 치면세균막지수와 치은지수에 따른 QLF-D score의 차이를 저위험군과 고위험군으로 분류하여 비교한 결과, 치면세균막지수(p<0.0001)와 치은지수(p=0.007) 모두 저위험군에 비해 고위험군 집단에서 QLF-D score가 통계적으로 유의하게 높았다. QLF-D score에 따른 치면세균막지수 및 치은지수 평균값을 비교한 결과, QLF-D score가 증가할수록 두 가지 지수 모두 통계적으로 유의하게 증가하는 양상을 보였다(p<0.0001). 이와 같은 결과를 통해, QLF-D로 치면세균막을 평가함으로써 치은상태를 모니터링 하는 것이 가능함을 확인하였다. 이를 통해 임상 현장에서 QLF-D를 활용한다면, 비교적 간편하게 구강 이미지를 획득하고 구강 상태를 점수화하여 제시함으로써 술자의 진단 절차가 간편해지고 환자와의 의사소통이 원활해질 수 있을 것으로 사료된다.
The 16S rRNA analyzing method is a bacterial identification method that is useful in identifying bacteria which is difficult to do by other means. The following 7 types of bacteria which are Treponema, A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, Fusobacterium, B. forsythus, P. intermedia, P. micros were evaluated in order to study their distribution among patients with adult periodontitis. The 16S rRNA analyzing method was used to compare bacterial distribution among 3 groups. Subgingival plaque acquired from the affected sites(pocket depth ${\geq}6mm$) of 29 patients with adult periodontitis were grouped as the experimental group while plaque from the non-affected sites(pocket depth ${\leq}3mm$) were grouped as control 2 and finally plaque acquired from students with healthy periodontal tissues were grouped as control 1. The results are as follows ; 1. The distribution of Treponema was 12.5% for control 1, 21.4% for control 2 and 75.4% for the experimental group. For A. actinomycetemcomitans the distribution was 0.5%, 19.0%, 44.4% in respect to the order of groups mentioned above. P.gingivalis showed 10.5%, 43.1%, 94.0% distribution, Fusobacterium 33.0%, 48.3%, 81.0% distribution, B. forsythus 9.5%, 17.2%, 65.9% distribution, P. intermedia 1.0%, 12.1%, 26.3% distribution and finally P. micros 5.0%, 19.0%, 48.7% respectively. In all 7 types of bacteria, the experimental group showed higher bacterial distribution compared to the other two groups with statistically significant difference. 2. In the case of Treponema, A. actinomycetemcomitans, gingivalis,Fusobacterium, B. forsythus, P. intermedia, P. micros showed significant difference between control 1 and 2. These results suggest that the 16S rRNA analyzing method which was applied on Koreans for the first time could be utilized and useful in finding potential pathogens of periodontal disease.
Microarrays can be used to screen thousands of binding events in a parallel and high throughput fashion and are of major importance in disease diagnosis and drug discovery. The use of radioisotope is conventionally regarded as one of the most sensitive detection methods. Atherosclerosis is a common disorder affecting arterial blood vessels. It happens when fat, cholesterol, and other substances made in the arterial blood vessels form a hard substances called plaque. Lipoprotein-associated phospholipase $A_2$ ($Lp-PLA_2$), a phospholipase $A_2$ enzyme, is used as a marker for cardiac disease. The detection of $Lp-PLA_2$ was accomplished by using radioactive [$^3H-acetyl$] PAF as a substrate and a feasibility study on RI biochip application to detection of $Lp-PLA_2$, a risk factors of atherosclerosis was performed. Inhibitive activity of a native plant extract was also determined by using the RI biochip. It was found to be applicable to a high-throughput screening of inhibitors for developing atherosclerosis therapeutic agents.
굴로부터 오염된 바이러스를 농축하고 검출하는 방법이 개발되었다. 바이러스를 인위적으로 굴 추출물에 접종시킨 후 polyethylene glycol(PEG)로 침전시키고 chloroform 또는 Freon으로 추출한 후 다시 PEG로 침전시켜 바이러스를 농축하였다. 각 단계별로 회수되는 폴리오바이러스의 량을 plaque assay를 이용하여 측정한 결과 처음 접종한 바이러스의 16.4-26.0%가 회수됨을 알 수 있었다. 검출을 위해서는 농축된 바이러스를 TRlzol로 추출한 후 바이러스의 RNA를 희석하거나 silica gel membrane을 이용하여 capture한 후 RT-PCR로 확인할 수 있었다. 그러나 상추와 햄버거에서 RT-PCR 방해물질을 효과적으로 제거하는 $QIAshredder^{TM}$ Homogenizer는 굴에 존재하는 방해물질을 제거하지 못하였다. 식품에 오염된 바이러스 농축을 위해 Freon이 일반적으로 사용되나 chloroform으로 대체가 가능하였다. 검출한계에 있어 굴 전체의 추출물을 사용하는 것과 소화기만을 분리하여 사용하는 경우 차이가 없으므로 RT-PCR 방해물질이 굴 전체조직에 고루 분산되어 있다고 판단된다. nested PCR은 이 방법의 효율을 높여주었다. 전체적으로 이 방법을 사용하면 굴로부터 오염된 노로바이러스의 검출이 가능하다고 판단된다.
A method for the rapid detection and quantification of Newcastle disease virus (NDV) produced in an animal cell culture-based production system was developed to enhance the speed of the NDV vaccine manufacturing process. A SYBR Green I-based real-time RT-PCR was designed with a conventional, inexpensive RT-PCR kit targeting the F gene of the NDV LaSota strain. The method developed in this study was validated for specificity, accuracy, precision, linearity, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), and robustness. The validation results satisfied the predetermined acceptance criteria. The validated method was used to quantify virus samples produced in an animal cell culture-based production system. The method was able to quantify the NDV samples from mid- or late-production phases, but not effective on samples from the early-production phase. For comparison with other quantifiable methods, immunoblotting, plaque assay, and tissue culture infectious dose 50 ($TCID_{50}$) assay were also performed with the NDV samples. The results demonstrated that the real-time RT-PCR method is suitable for the rapid quantification of virus particles produced in an animal cell-culture-based production system irrespective of viral infectivity.
관상동맥질환의 임상적인 개념은 지난 10년 동안 패러다임의 변화를 보여왔다. 관상동맥질환은 대부분 진행성 질환이며, 관상동맥질환 환자는 질병 진행의 어느 시점에서도 급성 관상동맥 증후군에 직면할 수 있다. 이러한 임상적 맥락에서 2019년 유럽심장학회 가이드라인에서는 조기 진단과 꾸준한 관리가 필요한 관상동맥질환의 임상적인 중요성을 반영하여 "만성관상동맥증후군"이라는 용어의 사용을 발표하였다. 최근 관상동맥 전산화단층촬영 혈관조영술을 이용한 관상동맥질환의 평가는 많은 발전을 이루었고, 안정형 협심증 또는 만성 관상동맥증후군 환자에서 관상동맥 전산화단층촬영 혈관조영술의 임상적 유용성은 초기 무증상 관상동맥질환의 발견에서부터 죽상경화판의 특성 분석 및 관상동맥질환의 치료 전략 결정에 도움을 주는 역할까지 관상동맥질환의 다양한 단계에 걸쳐 입증되고 있다. 이 종설에서는 안정형 협심증 환자의 이해를 돕는 병태생리를 설명하고 이에 대한 관상동맥 전산화단층촬영의 임상적 적용과 역할에 대해 알아보고자 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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