기내배양을 이용하여 Pteris cretica 'Wilsonii'의 효율적인 대량번식법을 개발하기 위한 목적으로 근경, 엽신 및 엽병조직으로부터 식물체 재분화를 유도하였다. 그 결과, 균질화된 근경의 절편에서만 신초가 재생되었다. 식물체 재분화를 유도하는데 적합한 배지는 1%의 sucrose와 $50\;mg{\cdot}mL^{-1}$의 $NaH_2PO_4$를 첨가한 1/8MS배지였다. 근경 절편으로부터 식물체의 재생을 촉진하기 위하여 생장조절물질이 첨가된 배지에서 2달 동안 절편을 배양한 후, 생장조절물질을 첨가하지 않은 배지로 이식한 결과, $1{\mu}M$의 kinetin과 $5{\mu}M$의 NAA를 혼용첨가한 처리구에서 신초의 재생이 가장 왕성하였다. BA 첨가구에서는 분열조직의 일종인 GGB가 다량 유도되었으나, 형성된 GGB에서 신초 재생율은 낮은 것으로 나타났다. MS배지의 적정 무기물 및 비타민의 농도를 구명하는 실험을 마친 뒤, 형성된 유묘를 이용하여 기외순화 시킨 결과, 1/8MS배지에서 형성된 유묘가 생존율이 가장 높았으며, 생육 또한 왕성하였다.
Panax ginseng Meyer is a perennial medicinal plant, the roots of which has been used in the traditional formulations in Oriental countries. To understand its floral transition, we isolated Flowering Locus T (FT) from ginseng, the bioinformatics analysis of PgFT has revealed a considerable homology to the higher plants, with the essential amino acids for FT function are conserved. The phylogenetic analysis has shown that the PgFT is belonged to the shrub classes of plants and closest kin to Jatropha curcas FT. The expression profiling from juvenile (2-year-old) were abundant in leaves as well as in root and was concentrated in the secondary leaflet and stem bottom in adult (4-year-old) ginseng plant tissues, moreover PgFT transcript displayed photoperiod dependent oscillation. The ectopic expression of PgFT in Arabidopsis thaliana, exhibit precocious flowering and several floral pathway integrators were up-regulated, interestingly their root length was increased in the transgenic seedlings. Therefore, we could conclude that PgFT encodes a florigen that acts as a key regulator in the flowering pathway in ginseng and hypothesize that, it might involve in the underground organ development as well. We believe our finding could provoke future studies on the physiology and development in P. ginseng.
Lee, Byoung-Doo;Cha, Joon-Yung;Kim, Mi Ri;Paek, Nam-Chon;Kim, Woe-Yeon
BMB Reports
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제51권4호
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pp.163-164
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2018
CONSTANS (CO) induces the expression of FLOWERING LOCUS T (FT) in the photoperiodic pathway, and thereby regulates the seasonal timing of flowering. CO expression is induced and CO protein is stabilized by FLAVIN-BINDING KELCH REPEAT F-BOX PROTEIN 1 (FKF1) in the late afternoon, while CO is degraded by CONSTITUTIVE PHOTOMORPHOGENIC 1 (COP1) during the night. These regulatory cascades were thought to act independently. In our study, we investigated the relationship between FKF1 and COP1 in the regulation of CO stability in response to ambient light conditions. A genetic analysis revealed that FKF1 acts as a direct upstream negative regulator of COP1, in which cop1 mutation is epistatic to fkf1 mutation in the photoperiodic regulation of flowering. COP1 activity requires the formation of a hetero-tetramer with SUPPRESSOR OF PHYA-105 (SPA1), [$(COP1)_2(SPA1)_2$]. Light-activated FKF1 has an increased binding capacity for COP1, forming a FKF1-COP1 hetero-dimer, and inhibiting COP1 homo-dimerization at its coiled-coil (CC) domain. Mutations in the CC domain result in poor COP1 dimerization and misregulation of photoperiodic floral induction. We propose that FKF1 represses COP1 activity by inhibiting COP1 dimerization in the late afternoon under long-day conditions, resulting in early flowering.
원예화 가능성이 매우 높은 왕새우난초($C.{\times}bicolor$)의 기내 대량증식법을 확립하기 위해 새우난초(C. discolor)와 금새우난초(C. discolor for. sieboldii)를 4월 중순에 종간 인공 교배하여 같은 해 10월 중순에 F1 잡종 종자를 획득하여 종자의 전처리 및 여러 가지 배양환경에 따른 발아율 및 기타 생육 특성을 조사하였다. 파종 시 종자의 전처리에 따른 F1 종자의 기내 발아율을 조사한 결과, 종자의 흡습처리와 초음파 처리가 종자의 발아율과 원괴체 형성율을 높일 뿐만 아니라 원괴체의 형성기간도 단축되었다. 또한 파종 후 암배양하는 것이 종자의 발아율 및 원괴체의 형성율이 높았다. 발아 배지에 NAA와 BA 등의 호르몬 첨가는 발아율과 원괴체의 형성율을 촉진하였지만 비정상적 인 유묘가 많이 발생하여 건강한 유묘의 생산에는 적합하지 않았다. 유묘는 활성탄을 $0.5g/L^{-1}$를 첨가한 H3P4배지에 계대배양하여 건강한 새우난초 유식물체를 생산하였으며, 화분에서 성공적으로 순화하여 새우난초와 금새우난초의 인공교배를 통하여 원예성이 높은 왕새우난초을 육성할 수 있음을 확인할 수 있었다.
Kim, Jin-Woo;Kim, Jung-Gun;Park, Byoung-Keun;Choi, Ok-Hee;Park, Chang-Seuk;Hwang, In-Gyu
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제13권2호
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pp.292-300
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2003
Pseudomonas fluorescens B16 is a plant glowth-prornoting rhizobacterium, which produces an antibacterial compound that is effective against plant root pathogens, such as Agrobacrerium tumefaciens and Raistonia solanacearum. We mutagenized the strain B16 with Omegon-Km and isolated six antibacterial-activity-deficient mutants. Two cosmid clones that hybridized with the mutant clones also were isolated from a genomic library of tile parent strain. Using deletion and complementation analyses, it was found that the biosynthesis genes resided in a 4.3-kb SalI-NarI fragment. When a plasmid clone carrying the fragment was introduced into P. fluorescens strain 1855.344, which does not exhibit any antibacterial activity, the transconjugants exhibited antibacterial activity, indicating that the plasmid clone carried all the genes essential for production of the antibacterial compound. DNA sequence analysis of the fragment identified four putative open reading frames (ORFs): orf1 through orf4 The deduced amino acid sequences of ORF1, ORF2, and ORF4 were similar to cystathionine gamma lyase, pyruvate formate-lyase activating enzyme, and transcriptional regulator, respectively, yet the amino acid sequence of ORF3 showed no similarities to any known proteins. It was also demonstrated that the antibacterial activity was responsible for biological control of the bacterial wilt caused by R. solanacearum.
Cyclic AMP receptor-like protein (Clp), is known to be a global transcriptional regulator for the expression of virulence factors in Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc). Sequence analysis showed that Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) contains a gene that is strongly homologous to the Xcc clp. In order to determine the role of the Clp homolog in Xoo, a marker exchange mutant of $clp_{xoo4158}$ was generated. Virulence and virulence factors, such as the production of cellulase, xylanase, and extracellular polysaccharides (EPS) and swarming motility were significantly decreased in the $clp_{xoo4158}$ mutant. Moreover, the mutation caused the strain to be more sensitive to hydrogen peroxide and to over-produce siderophores. Complementation of the mutant restored the mutation-related phenotypes. Expression of $clp_{xoo4158}$, assessed by reverse-transcription realtime PCR and clp promoter activity, was significantly reduced in the rpfB, rpfF, rpfC, and rpfG mutants. These results suggest that the clp homolog, $clp_{xoo4158}$, is involved in the control of virulence and resistance against oxidative stress, and that expression of the gene is controlled by RpfC and RpfG through a diffusible signal factor (DSF) signal in Xanthomonas oryzae pv. oryzae KACC10859.
A plantlet regeneration protocol was developed on pot-grown mature plants of Elaeocarpus robustus Roxb. cv. Dwarf from nodal and leaf explants. The best yield of adventitious shoots was achieved from the leaf-derived calli in a modified MS ($MMS_1$, half strength of major salts, full strength of minor salts, and vitamins) medium containing $4.0{\mu}M$ BA + $4.0{\mu}M$ Kn + $0.5{\mu}M$ NAA + 15% coconut water (CW). The shoot multiplication rate was amplified about twofold per culture after the addition of 15% CW to the medium. The rate of shoot multiplication reached maximum at the 5th subculture, and it maintained this rate throughout the 3 subsequent subcultures. The best rooting in vitro was investigated by subculturing the microcuttings in an $MMS_2$ (half strength of both major salts and minor salts and full strength of vitamins) medium containing $1.0{\mu}M$ IBA in the dark for one initial week at $30^{\circ}C$, followed by subculturing them in a plant-growth regulator (PGR)-free medium in the light. The plantlets raised in vitro were successfully established under ex vitro conditions.
R2R3 유형의 단백질인 IbMYB1 전사인자는 고구마의 뿌리에서 안토시아닌 생합성 과정을 조절하는 중요한 단백질이다. 선행연구에서 IbMYB1 유전자의 발현 증가를 통한 안토시아닌의 합성 증가가 담배, 애기장대 및 고구마의 저장뿌리에서 증명된 바 있다. 본 연구에서는 괴경(저장줄기) 특이적 PATATIN 프로모터와 산화스트레스 유도성 SWPA2 프로모터의 조절하에서 안토시아닌을 고함유하는 IbMYB1 유전자 과발현 형질전환 감자를 개발하여 그 특성을 분석하였다. PAT-IbMYB1 형질전환 식물체들은 대조구 식물체 및 SWPA2-IbMYB1 식물체 보다 높은 안토시아닌 함량을 괴경에서 나타내었다. 본 연구의 결과로서, IbMYB1의 과발현은 형질전환 기술을 이용한 특정 조직 특이적 안토시아닌 생산에 매우 좋은 개발 기술이 될 것으로 생각되는 바이다.
Background: Panax ginseng, one of the valuable perennial medicinal plants, stores numerous pharmacological substrates in its storage roots. Given its perennial growth habit, organ regeneration occurs each year, and cambium stem cell activity is necessary for secondary growth and storage root formation. Cytokinin (CK) is a phytohormone involved in the maintenance of meristematic cells for the development of storage organs; however, its physiological role in storage-root secondary growth remains unknown. Methods: Exogenous CK was repeatedly applied to P. ginseng, and morphological and histological changes were observed. RNA-seq analysis was used to elucidate the transcriptional network of CK that regulates P. ginseng growth and development. The HISTIDINE KINASE 3 (PgHK3) and RESPONSE REGULATOR 2 (PgRR2) genes were cloned in P. ginseng and functionally analyzed in Arabidopsis as a two-component system involved in CK signaling. Results: Phenotypic and histological analyses showed that CK increased cambium activity and dormant axillary bud formation in P. ginseng, thus promoting storage-root secondary growth and bud formation. The evolutionarily conserved two-component signaling pathways in P. ginseng were sufficient to restore CK signaling in the Arabidopsis ahk2/3 double mutant and rescue its growth defects. Finally, RNA-seq analysis of CK-treated P. ginseng roots revealed that plant-type cell wall biogenesis-related genes are tightly connected with mitotic cell division, cytokinesis, and auxin signaling to regulate CK-mediated P. ginseng development. Conclusion: Overall, we identified the CK signaling-related two-component systems and their physiological role in P. ginseng. This scientific information has the potential to significantly improve the field-cultivation and biotechnology-based breeding of ginseng.
사과 '후지'의 잎 절편체로부터 신초 기관형성을 통한 효율적인 식물체 재생 시스템을 확립하기 위하여 배지조성 중 식물생장조절제, 기본배지와 당의 종류 및 농도를 달리하여 실험을 실시하였다. 식물생장조절제 NAA가 첨가된 상태에서 기본배지 중 N6와 LS, cytokinin 중 BA와 TDZ를 비교하였을 때, N6 배지에 BA 5.0 mg/L를 사용하는 것이 신초 형성율과 절편체당 재생 신초수에서 효과적이었다. BA보다 신초 형성에 효과적인 것으로 알려진 TDZ는 본 실험에서는 전반적으로 신초 형성율이 낮았다. 탄소 공급원과 식물생장조절제의 조합 처리에서는 sorbitol 40 g/L의 처리가 신초 형성율 67.3%, 절편체당 신초수 4.3개로 가장 좋았고, 식물생장조절제는 BA 5.0 mg/L와 NAA 0.1 mg/L의 혼합처리가 가장 효과적이었다. 암조건에서 3주간 배양한 후 명조건으로 옮겨 총 8주간 배양하여 재생된 신초는 1/4MS에 IBA 0.2 mg/L가 첨가된 배지에서 발근을 유도한 후 활착시켜 온실에서 재배하였을 때 정상적인 표현형을 보여주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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