• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권4호
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• pp.305-311
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• 2002

Aspergillus ficuum 유래 acetyl xylan esterase(AXEase) 유전자(AXE)를 Pichia pastoris에서 과발현ㆍ분비 생산하기 위해 AOXI promoter와 mating factor $\alpha$-1 분비신호서열 하류에 AXE를 연결한 염색체 삽입 발현계(pPICZ$\alpha$C-AXE, 4.6 kb)를 구축하였다. 이것을 SacI으로 절단한 뒤 P. pastoris의 염색체 DNA 5'AOX1 부위에 삽입시켰다. 형질전환된 P. pastoris 균주를 메탄을 배지에서 플라스크 회분배양한 결과, 배양 36시간 때의 건조균체농도는 6 g-DCW/1, AXEase 총 발현량은 77 unit/ml이었다. 최적화된 methanol과 histidine 공급방법을 채용한 유가배양시 균체농도는 97 g-DCW/1, AXEase 총발현량은 930 unit/m1로 크게 증가하였다. 효소활성의 90% 이상은 배양 상등액에 존재하였으며, 상등액 단백질의 80%이상이 AXEase 단백질(33.5 kDa)였다. 이러한 결과는 9.8 g/l의 AXEase 단백질을 배양 상등액으로 대량 분비ㆍ생산할 수 있음을 의미한다.

• 동아시아식생활학회지
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• 제11권5호
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• pp.393-399
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• 2001

본 연구는 김치를 제조한 후 2$0^{\circ}C$에서 발효, 숙성시키면서 발효기간별로 효모를 순수 분리하여 동정하였으며, 동정된 10종의 균주에 대해서 4종의 소금과 3가지 소금 농도(0, 3.0 및 5.0%)에서 효모의 생육도를 조사하였다. 동정된 균주는 Saccharomyces cerevisia, Sporobolomyces albo-rubescens, Issatchenkia orientalis Cryptococcus luteolous, Ustilago maydis, Candida humilis, Pichia onychis, Cadida nitratophila, and Pichia jadinii. 이었으며, 김치 숙성 10일 이후에는 산막효모로 알려진 Pichia, Candida 등이 주를 이루었다. 소금 농도에 따른 효모의 생육도에서는 염농도가 증가할수록 생육이 저하되었으나, 발효 초기에 분리된 Issatchenkia orientals는 내염성 효모로 5% 염농도에서도 생육이 크게 저해되지 않았다. 효모 균종에서는 Cryptococcus sp. 와 Candida sp.가 소금 농도의 증가에 따라 생육이 크게 저해되었다. 4종류의 소금 모두 발효 초기에 분리된 균주의 경우 유도기가 짧았고, 균의 증식이 빠르게 진행된 반면, 김치 숙성 10일 이후에 분리된 균주는 염농도가 증가되면서 유도기가 연장되었으며, 또한 소금 종류 중 죽염이 효모의 생육을 가장 크게 저해하였고, 그 다음으로 재제염이었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제29권9호
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• pp.1363-1370
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• 2016

Rennet, a complex of enzymes found in the stomachs of ruminants, is an important component for cheese production. In our study, we described that yak chymosin gene recombinant Pichia pastoris strain could serve as a novel source for rennet production. Yaks total RNA was extracted from the abomasum of an unweaned yak. The yak preprochymosin, prochymosin, and chymosin genes from total RNA were isolated using gene specific primers based on cattle chymosin gene sequence respectively and analyzed their expression pattern byreal time-polymerase chain reaction. The result showed that the chymosin gene expression level of the sucking yaks was 11.45 times higher than one of adult yaks and yak chymosin belongs to Bovidae family in phylogenetic analysis. To express each, the preprochymosin, prochymosin, and chymosin genes were ligated into the expression vector $pPICZ{\alpha}A$, respectively, and were expressed in Pichia pastoris X33. The results showed that all the recombinant clones of P. pastoris containing the preprochymosin, prochymosin or chymosin genes could produce the active form of recombinant chymosin into the culture supernatant. Heterologous expressed prochymosin (14.55 Soxhlet unit/mL) had the highest enzyme activity of the three expressed chymosin enzymes. Therefore, we suggest that the yak chymosin gene recombinant Pichia pastoris strain could provide an alternative source of rennet production.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권12호
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• pp.1938-1944
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• 2008

The procpb gene encoding human procarboxypeptidase B (proCPB, GeneBank access code AJ224866) was cloned and its Pichia expression plasmid, $pPIC9{\alpha}$/hproCPB (9.2 kb), was constructed, in which procpb was under the control of the AOXl promoter and connected to the downstream of the mating factor ${\alpha}$-1 ($MF{\alpha}1$) signal sequence. The plasmid was linearized by digestion with Sacl, and integrated into the genome of P. pastoris strain GS115. By culturing of Pichia transformant on methanol medium, the human proCPB was successfully expressed and secreted into the culture supernatant. Moreover, Western blot analysis of the extracellular proteins showed proCPB bands clearly at a molecular mass of 45 kDa, confirming the expression of proCPB with its right size. The CPB activity reached about 3.5 U/ml and 12.7 U/ml in the flask and fermentor batch cultures of Pichia transformant, respectively. No CPB enzyme activity was found in the intracellular fraction. When the fed-batch cultivation was performed with methanol and glycerol mixture as a feeding medium, the extracellular CPB activity was increased to 42.0 U/ml, which corresponds to a 3.3-fold higher level of CPB activity than that of batch culture. The $K_m$ and $k_{cat}$ values of recombinant human CPB enzyme for hippuryl-$_L$-Arg as a substrate were estimated to be 0.16 mM and $11.93\;sec^{-1}$, respectively.

• 한국임상수의학회지
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• 제28권2호
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• pp.254-257
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• 2011

2년령 bearded dragon이 활력 감소 및 식욕 부진으로 충북대학교 동물의료센터에 내원하였다. 분변 검사 결과 다수의 세균과 함께 효모의 증식이 관찰되어 장염으로 진단되었다. 진균 배양 및 분자생물학적 진균 동정 결과 증식된 효모는 Pichia (P.) burtonii로 확인되었다. 치료는 ketoconazole과 trimethoprim/sulfamethoxazole을 3일간 경구 투여하였다. 치료 3일 후 분변 내 효모는 사라졌으며, 이후 환자는 회복되었다. 본 증례와 사람에서의 보고를 종합하면 P. burtonii 는 장염이 있는 bearded dragon의 기회성 병원체로 추정된다. 또한 본 증례는 bearded dragon에서의 P. burtonill의 과증식에 대한 최초의 보고이다.

• 한국균학회지
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• 제40권4호
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• pp.254-257
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• 2012

경기도 지방의 된장 시료로부터 악취감소 효과 미생물 중에서 효모가 분리되었으며 rDNA염기서열분석에 의하여 Pichia farinosa로 동정 되었다. 공시균주 P. farinosa NASS-2로 대량배양조건 확립 및 미생물처리제를 제조하였다. 분리한 효모로 제조한 악취저감효과 처리제의 실내 시험결과 돈분에 미생물제를 처리하고 15일 경과 후 악취가스 감소율을 조사한 결과, 암모니아가스($NH_3$ gas)는 처리 전 19.49 ppm에서 처리 후는 1.38 ppm으로, 황화수소가스($H_2S$ gas)는 처리 전 5.89 ppb에서 처리 후는 0.32 ppb으로 감소하는 효과를 나타내었다. 일반적으로 박테리아가 악취저감효과 미생물로 사용되고 있으나 본 연구에서 사용한 된장에서 분리한 효모 특히 산막효모인 P. farinosa NASS-2의 악취효과(암모니아가스, 황화수소 가스)는 처음 보고이다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제50권4호
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• pp.508-511
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• 2022

식물성 육류에서 미각적인 자극을 얻기 위해 사용하는 heme 함유 단백질의 지속적인 생산을 위해 강낭콩 유래 leghemoglobin a (PhLba) 유전자를 pPICZαA에 클로닝하고 Pichia pastoris에서 발현하였다. 재조합 PhLba 단백질은 가용화 형태로 배양 배지속으로 분비되었다. 정제된 PhLba의 분자량은 SDS-PAGE 상에서 16.5 kDa으로 나타났다. 재조합 PhLba holoprotein의 수율은 배양 배지에 hemin을 첨가함으로써 향상되었다. 이것은 PhLba의 apo 형태가 보조인자와 함께 효과적으로 포화된다는 것을 나타낸다.

• Food Science and Biotechnology
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• 제14권4호
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• pp.487-492
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• 2005

Simple competition plate bioassays of Pichia anomala SKM-T and Galactomyces geotrichum SJM-59 were conducted to evaluate their potential as biological control agents that inhibit growth of Botrytis cinerea during post-harvest storage of strawberries (Fragaria ${\times}$ ananassa Duche, Red-Pearl). Occurrence rates of fungi on the surface of yeast-treated strawberries were evaluated during storage at $4^{\circ}C$. P. anomala SKM-T and G. geotrichum SJM-59 showed antifungal activities on agar plate, and P. anomala SKM-T maintained its desirable antifungal activity on surface of strawberries and its physicochemical properties during storage. Sensory evaluation was based on kinesthetics and consumer acceptability. Due to its potential antifungal activity, P. anomala SKM-T could function as biological control agent against spoilage fungi during post-harvest storage of strawberries.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제27권4호
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• pp.574-579
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• 2014

A lysozyme gene from breast of Tibetan sheep was successfully expressed by secretion using a-factor signal sequence in the methylotrophic yeast, Pichia pastoris GS115. An expression yield and specific activity greater than 500 mg/L and 4,000 U/mg was obtained. Results at optimal pH and temperature showed recombinant lysozyme has higher lytic activity at pH 6.5 and $45^{\circ}C$. This study demonstrates the successful expression of recombinant lysozyme using the eukaryotic host organism P. pastoris paving the way for protein engineering. Additionally, this study shows the feasibility of subsequent industrial manufacture of the enzyme with this expression system together with a high purity scheme for easy high-yield purification.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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• pp.370-373
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• 2001

Ultroviolet과 NTG 처리를 통한 mutagenesis를 통해 TAPS 생산균주인 Pichia ciferrii ATCC 14091로부터 많은 mutant들을 얻었으나 Sudan Black B 염색법과 콜로니 형태 관찰을 통하며 TAPS 생산이 우수한 변이균주를 선별하였다. 또한 sodium acetate 첨가를 통하여 TAPS 생산을 향상시켰다. 이는 TAPS가 포화중성 지방산인 palmitate와 serine의 축합반응으로 생성되며, sodium acetate로 부터 생성된 acetyl-CoA에 의해 아세틸화되어 세포 밖으로 분비되기 때문이다.