A cDNA clone encoding the ribosomal protein S20 has been isolated from the Schizosaccharomyces pombe cDNA library by colony hybridization. The insert contained in the original plasmid pYJ10 was transferred intro shuttle vector pRS316 generate plasmid pYJll. The dDNA insert of plasmid pYJll, contains 484 nucleotides and encodes a protein of 118 amino acids with a calculated mass of 13,544 daltons. The deduced amino acid sequence of S. pombe ribosomal protein S20 is very homologous with fruit fly, rat, and budding yeast counterparts. It is also homologous with Xenopus S22 ribosomal protein. S. pombe ribosomal protein S20 appears to be relatively hydruphobic except the C-terminal region. The 728 bp upstream region of the S20 gene was amplified from chromosomal DNA and transferred into the BamHI/EcoRI site of the promoterles $\beta$-galactosidase gene of the vector YEp357R, which resulted in fusion plasmid pYS20. The synthesis of $\beta$-galactosidase from the fusion plasmid appeared to be the highest in the mid-exponential phase. The S. pombe cells with the fusion plasmid grown at 35$\^{C}$ gave lower $\beta$-galactosidase activity than the cells grown at 30$\^{C}$. Computer analysis showed the consensus sequence CAGTCACA in the upstream regions of various ribosomal protein genes in S. pombe, which would be involved in the coordinated expression of small ribosomal proteins.
A dctA gene encoding a protein with identity to a C4-dicarboxylate/H+ was cloned from a beneficial biocontrol bacterium, P. chororaphis O6. Expression of the dctA was induced in minimal medium by several organic acids and was repressed by glucose. Highest expression was observed in early-log cells grown on fumarate and succinate with decline as cells approached late-log phase. The dctA transcript accumulated weakly when cells were grown on malate but strong expression was observed with benzoate. Expression of the dctA transcript was repressed in early-log cells upon addition of glucose to fumarate, but was detected as the cell culture aged. A dctA-deficient mutant of O6, constructed by marker exchange mutagenesis, did not grow on minimal medium containing succinate, benzoate, or fumarate, and growth on malate was delayed. The dctA mutant and wild type grew equally on glucose. The dctA mutant on cucumber roots in sterilized potting soil was colonized at levels comparable to those of the wild type, but induction level of disease resistance by the mutant against target leaf spot disease was decreased. These results may indicate that the dctA is essential for utilization of certain organic acids and its expression is controlled by the availability of sugars. In addition, the dctA is not essenitial for cucumber root colonization, but important for induction of disease resistance.
Vibrio vulnificus needs various responsive mechanisms to survive and transmit successfully in alternative niches of human and marine environments, and to ensure the acquisition of steady energy supply to facilitate such unique life style. The bacterium had genetic constitution very different from that of Escherichia coli regarding metabolism of glycogen, a major energy reserve. V. vulnificus accumulated more glycogen than other bacteria and at various levels according to culture medium and carbon source supplied in excess. Glycogen was accumulated to the highest level in Luria-Bertani (3.08 mg/mg protein) and heart infusion (4.30 mg/mg protein) complex media supplemented with 1% (w/v) maltodextrin at 3 h into the stationary phase. Regarding effect of carbon source, more glycogen was accumulated when maltodextrin (2.34 mg/mg protein) was added than when glucose or maltose (0.78.1-14 mg/mg protein) was added as an excessive carbon source to M9 minimal medium, suggesting that maltodextrin metabolism might affect glycogen metabolism very closely. These results were supported by the analysis using the malP (encoding a maltodextrin phosphorylase) and malQ (encoding a 4-${\alpha}$-glucanotransferase) mutants, which accumulated much less glycogen than wild type when either glucose or maltodextrin was supplied as an excessive carbon source, but at different levels (3.1-80.3% of wild type glycogen). Therefore, multiple pathways for glycogen metabolism were likely to function in V. vulnificus and that responding to maltodextrin might be more efficient in synthesizing glycogen. All of the glycogen samples from 3 V. vulnificus strains under various conditions showed a narrow side chain length distribution with short chains (G4-G6) as major ones. Not only the comparatively large accumulation volume but also the structure of glycogen in V. vulnificus, compared to other bacteria, may explain durability of the bacterium in external environment.
Growth hormone (GH) is known as one of the main osmoregulators in euryhaline teleosts during seawater (SW) adaptation. Many of the physiological actions of GH are mediated through insulin-like growth factor-I (IGF-I), and the GH/IGF-I axis is associated with osmoregulation of fish during SW acclimation. However, little information is available on the response of fish IGF-II to hyperosmotic stress. Here we present the first cloned IGF-I and IGF-II cDNAs of marine medaka, Oryzias dancena, and an analysis of the molecular characteristics of the genes. The marine medaka IGF-I cDNA is 1,340 bp long with a 257-bp 5' untranslated region (UTR), a 528 bp 3' UTR, and a 555-bp open reading frame (ORF) encoding a propeptide of 184 amino acid (aa) residues. The full-length marine medaka IGF-II cDNA consists of a 639 bp ORF encoding 212 aa, a 109 bp 5' UTR, and a 416 bp 3' UTR. Homology comparison of the deduced aa sequences with other IGF-Is and IGF-IIs showed that these genes in marine medaka shared high structural homology with orthologs from other teleost as well as mammalian species, suggesting high conservation of IGFs throughout vertebrates. The IGF-I mRNA level increased following transfer of marine medaka from freshwater (FW) to SW, and the expression level was higher than that of the control group, which was maintained in FW. This significantly elevated IGF-I level was maintained throughout the experiment (14 days), suggesting that in marine medaka, IGF-I is deeply involved in the adaptation to abrupt salinity change. In contrast to IGF-I, the increased level of marine medaka IGF-II mRNA was only maintained for a short period, and quickly returned a level similar to that of the control group, suggesting that marine medaka IGF-II might be a gene that responds to acute stress or one that produces a supplemental protein to assist with the osmoregulatory function of IGF-I during an early phase of salinity change.
The spr D gene encoding Strptomyces griseus protease D(SGPD); a chymotrypsin-like proteae, was cloned from Strptomyces griseus IFO13350 and sequence. Most of the amino-acid sequence deduced from the nucleotide sequence is idential to that Strptomyces griseus IMRU3499 except that one amino acid has been deleted and Trp 369 has been substituted into Cys369 in the SGPD from S. griseus IFO13350 without affecting the protease activity. The spr D gene was overexpressed in Streptomyce liv-idans TK24 as a heterologous host. Various media with different compositions were also used to max-imize the productivity of SGPD inthe heterologous host. The SGPD productivity was best when the transformant S. lividans TK24 was cultivated in R2YE medium. The relative chymotrypsin activity of the culture broth measured with an artificial chromogenic substrate, N-scuccinyl-ala-ala-pro-phe-p-nitroanilide, was 16 units/ml. A high level of SGPD was also produced in YEME and SAAM medial but it was relatively lower that in R2YE medium and negligible amounts of SGPD were produced in GYE, GAE and Benedict media. The growth of S. lividans reacted the maximum level of cell mass at days 3 and 4 of the culture, but SGPD production started in the stationary phase of cell growth and kept increase in till the 10$^{th}$ day of culture in R2YE and YEME medium, but in GYE media the productivity reached maximum level at 8days of cultivation. The introduction of the spr D gene into S. lividans TK24 triggered biosyntheis of the pigmented antibiotic , actinorhodin, which implies some protease may paly a very improtant role in secondary-metabolite formation in sStreptomyces.
Kim, Wan-Soo;Park, Soo-Dong;Lee, Seok-Myung;Kim, Youn-Hee;Kim, Pil;Lee, Heung-Shick
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제17권8호
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pp.1353-1360
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2007
Three csp-like genes were identified in the Corynebacterium glutamicum genome and designated cspA, cspB, and cspA2. The genes cspA and cspA2 encode proteins, comprising of 67 amino acid residues, respectively. They share 83% identity with each other. Identity of those proteins with Escherichia coli Csp proteins was near 50%. The cspB gene encodes a protein composed of 127 amino acids, which has 40% and 35% sequence identity with CspA and CspA2, respectively, especially at its N-terminal region. Analysis of the gene expression profiles was done using transcriptional cat fusion, which identified not only active expression of the three genes at the physiological growth temperature of $30^{\circ}C$ but also growth phase-dependent expression with the highest activity at late log phase. The promoters of cspA and cspA2 were more active than that of cspB. The expression of the two genes increased by 30% after a temperature downshift to $15^{\circ}C$, and such stimulation was more evident in the late growth phase. In addition, the cspA gene appeared to show DNA-binding activity in vivo, and the activity increased at lower temperatures. Interestingly, the presence of cspA in multicopy hindered the growth of the host C. glutamicum cells at $20^{\circ}C$, but not at $30^{\circ}C$. Altogether, these data suggest that cspA, cspB, and cspA2 perform functions related to cold shock as well as normal cellular physiology. Moreover, CspA and its ortholog CspA2 may perform additional functions as a transcriptional regulator.
본 논문에서는 OFDM 시스템의 성능을 개선하기 위한 주파수 다이버시터 기법을 제안하였다. 제안한 기법은 송신기에서 간단한 심볼 부호화 과정을 통해 상관도가 가장 낮은 두 부채널로 특정한 위상차를 갖는 심볼을 전송함으로써, 수신기에서 간단한 신호처리 과정을 통해 주파수 다이버시티 이득을 얻을 수 있는 기법으로 대역효율 감소 없이 기존 OFGM 시스템의 성능을 개선하였다. 또한, 제안한 기법의 성능 저하 원인인 위상차 추정 오류를 최소화하기 위한 최적 위상값을 제시하였으며, 비트 오류를 최소화하기 위한 비트/심볼 변환기법을 제안하였다. 그 결과 추가적인 부호화 및 복호화에 의해 시스템의 복잡도가 조금 증가하지만 기존 시스템의 성능 개선 측면에서 우수하다고 판단되며, 제안한 기법을 적용한 27x/1Rx STBC-OFDM(Space Time Block Coded - OFDM) 시스템의 성능이 기존 27x/1Rx STBC-OFDM 시스템 보다 성능이 우수함을 시뮬레이션을 통해 확인하였다.
The transformant Bacillus subtilis ED213 carrying the pSO100 which cloned the cdd gene encoding cytidine deaminase (cytidine /2'-deoxycytidine aminohydrolase, EC 3.5.4.5, CDase) originated from wild type B. subtilis was cultivated in Spizizen minimal medium (SMM). To overcome poor expression of the cdd gene in SMM medium, the medium compositions and growth conditions were optimized. The optimized medium compositions and growth conditions were cytidine concentration of 80 mg/l, glycerol of 25 g/l, and $(NH_4)_2SO_4$ of 10 g/l, along with $37^{\circ}C$ and pH 7.0. The intracellular CDase production was increased 3 times from 1,000 unit/ml to 3,200 unit/ml, and extracellular CDase also increased from nearly undetectable amounts to 1,500 unit/ml. The cytidine concentration was signified as the most critical compositional factor for overproduction of CDase by increasing the cell density mainly in culture broth. The plasmids were more stable in cells that were grown in original SMM medium with stability of 90% compared to those grown in optimized SMM medium with stability of 80% after 48 hours cultivation. The most active amplification of plasmid was occurred in the logarithmic phase, which showed a value around four times higher than the initial copy number. In the exponential phase, the CDase production was closely related to the plasmid copy number along with the cell density. However, it was not accorded with cell density at the stationary phase.
본 연구는 얼굴자극의 검사단계 표정변화와 검사 지연시간, 그리고 배경변화가 얼굴재인에 미치는 효과를 검증하기 위해 수행되었다. 실험 1에서는 학습단계에서 부정 표정 얼굴을 학습하고 검사단계에서 동일한 얼굴의 부정 표정과 중성 표정얼굴에 대한 재인 검사가 실시되었다. 실험 2에서는 학습단계에서 부정 표정 얼굴을 학습하고 검사단계에서 부정 표정과 긍정 표정얼굴에 대한 재인 검사가 실시되었다. 실험 3에서는 학습단계에서 중성 표정 얼굴을 학습하고, 검사단계에서 부정 표정과 중성 표정 얼굴에 대한 재인 검사가 실시되었다. 세 실험 모두 참가자들은 즉시 검사와 지연 검사 조건에 할당되었고, 재인검사에서 목표 얼굴자극들은 배경이 일치 조건으로 또한 불일치 조건으로 제시되었다. 실험 1과 실험2 모두에서 부적 표정에 대한 재인율이 높았다. 실험 3에서 중성 표정에 대한 재인율이 높았다. 즉, 세 개실험 모두에서 표정 일치 효과가 나타났다. 학습단계에서 제시된 얼굴 표정의 정서와는 상관없이 검사단계에서 표정이 학습단계와 일치할 때 얼굴 재인율은 증가하였다. 또한 표정 변화에 따른 효과는 배경 변화에 따라 상이하게 나타났다. 본 연구 결과로 얼굴은 표정이 달라지면 기억하기 힘들며, 배경의 변화와 시간 지연에 따라 영향을 받는 다는 점을 확인하였다.
본 논문에서는 직교성의 특성을 가진 Walsh code 영상과 무작위 위상 영상을 이용하여 계층적인 영상의 암호화 및 복호화로 영상 정보의 수준에 따른 효율적인 정보보호와, 암호화의 수준을 향상시키는 방법을 제안하였다. 제안한 암호화 과정은 각각의 원 영상과 무작위 위상 영상을 곱한 영상을 푸리에 변환 후, Walsh code 영상과 이진 무작위 위상영상을 곱한 영상에 확산시켜 암호화한다. 복호화 키는 암호화 과정에 사용된 Walsh code 영상을 정보의 수준에 따라 더함으로써 계층적인 복호화 키를 생성한다. 그러므로 하나의 복호화 키로도 정보 보호의 수준에 따라 각 암호화 영상을 복호화할 수 있다. 또한 이진 무작위 위상과 무작위 위상 영상은 암호화 영상을 백색 잡음의 패턴과 유사하여 암호화 수준이 높은 장점을 가진다. 컴퓨터 실험과 고찰을 통하여 암호화의 적합함을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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