In order to develop an enzyme preparation for clarification of fruit juices, a microbial strain having a strong pectolytic activity was selected and a crude enzyme preparation from this strain was examined for the effects in the preparation of grape juice and wine. The results are summarized as follows: 1) A strain of Aspergillus niger was selected as having the highest productivity of pectolytic enzymes among many species of Aspergillus and Rhizopus. 2) A pectolytic enzyme preparation was purified from this selected strain and the effects of pH and temperature on its enzyme activity and stability were investigated. 3) The use of the enzyme preparation brought about the increase in the free run yield and clarity of grape juice. 4) Whereas the use of the enzyme preparation did not exhibit any effect in the brewing of red wine, its use showed a good effect on the rates of filtration and clarity in the case of white wine.
Botryosphaeria dothidea causing apple fruit rot was cultured in pectin-polypectate mineraI salts or apple mediumss, to investigate pectolytic enzyme production and activity. Exo-polygalacturonase(PG) and exo-polymethylgalacturonase (PMG) in apple medium showed maximum of activity to 6.4 and 7.2 units at six days of culture, respectively. Their maximum activity in pectin-polypectate mineral salts medium was 5.9 and 5.3 units at eight days of culture lower than in apple medium respectively. Endo-PG and endo-PMG in pecin-polypectate mineral salts medium were maximum of activity to 4.4 and 16.2 units at six and eight days of culture, respectively, but activities in apple medium were 3.2 and 6.7 units at eight days of culture. Activity of polygalacturonate-trans-eliminase(PGTE) and pectinmethyl-trans-eliminase(PMTE) was higher in pectin-polypectate mineral salts medium than in apple medium. Fungal growth was maximum at six and eight days of culture in pectin-polypectate mineral salts and apple medium, respectively.
Isolates of Penicillium expansum with reduced pathogenicity were arbitrarily selected among benomyl-resistant isolates in order to investigate relationship of their pectolytic enzyme acitivity with pathogenicity. In artificial medium, strongly pathogenic isolate $S_1$ and weakly pathogenic isolate $R_2$ produced considerable amonts of endo-polymethylgalacturonase, endo-polygalacturonase, pectin methyl-trans-eliminase, and polygalacturonate-trans-eliminase. No marked difference in enzyme activities was observed between two isolates. In apple medium, the activities of endo-polymethylgalacturonase and endo-polygalacturonase of isolate $S_1$ were over 6 times higher than those of isolate $R_2$. But pectin methyl-trans-eliminase and polygalacturonate-trans-eliminase did not show a great difference. Activities of endo-polymethylgalacturonase and endopolygalacturonase precipitated at 80-95% saturation of ammonium sulfate were highest, and addition of these enzyme solutions increased pathogenicity of weakly pathogenic isolates $R_{1-4}$.
Pectobacterium, which causes soft rot disease, is divided into 18 species based on the current classification. A total of 225 Pectobacterium strains were isolated from 10 main cultivation regions of potato (Solanum tuberosum), napa cabbage (Brassica rapa subsp. pekinensis), and radish (Raphanus sativus) in South Korea; 202 isolates (90%) were from potato, 18 from napa cabbage, and five from radish. Strains were identified using the Biolog test and phylogenetic analysis. The pathogenicity and swimming motility were tested at four different temperatures. Pectolytic activity and plant cell-wall degrading enzyme (PCWDE) activity were evaluated for six species (P. carotovorum subsp. carotovorum, Pcc; P. odoriferum, Pod; P. brasiliense, Pbr; P. versatile, Pve; P. polaris, Ppo; P. parmentieri, Ppa). Pod, Pcc, Pbr, and Pve were the most prevalent species. Although P. atrosepticum is a widespread pathogen in other countries, it was not found here. This is the first report of Ppo, Ppa, and Pve in South Korea. Pectobacterium species showed stronger activity at 28℃ and 32℃ than at 24℃, and showed weak activity at 37℃. Pectolytic activity decreased with increasing temperature. Activity of pectate lyase was not significantly affected by temperature. Activity of protease, cellulase, and polygalacturonase decreased with increasing temperature. The inability of isolated Pectobacterium to soften host tissues at 37℃ may be a consequence of decreased motility and PCWDE activity. These data suggest that future increases in temperature as a result of climate change may affect the population dynamics of Pectobacterium.
Isoates with changed pathogenicity were selected among iprodione-resistant Alternaria mali to investigate any relationship between their pectolytie enzyme activity and pathogenicity. In artificial medium, strongly pathogenic isolates $S_1$, and $R_3$ showed higher enzyme activity than weakly pathogenic isolate $R_8$.Activity of endo-polymethylgalacturonase and end-o-polygalacturonase was more than 3 times. But activity of pectin methylesterase and pectin Iyase by isolaste $S_1$ was higher than those by $R_3$ and $R_8$ isolates. In apple medium dialyzed against distilled water, activity of enzyme by each isolate was increased but growth of each isolate was reduced. When iprodione was added to the medium, enzyme activity and growth of isolate $S_1$, were reduced but strongly pathogenic isolate .$R_3$ among iprodione-resistant ones showed increased enzyme activity except for exo-polygalacturonase in dialyzed apple medium.
Effects of carbon sources, incubation time, incubation temperature, initial incubation pH, and vitamin B complex on the polygalacturonase activity of Byssochlamys fulva were studied to confirm the optimum conditions for the production of that enzyme. When pectin was used as carbon source, polygalacturonase activity reached to the maximum value of 0.50 units/ml. After 5 days of incubation, polygalacuturonase activity reached to its maximum of 0.48units/ml. Polygalacturonase activities were similar between $25^{\circ}C\;and\;45^{\circ}C$, however, decreased dramatically in the outside of this range. Polygalacturonase activity was not signicicantly influenced by the variation of initial incubation pH. However, at pH5.0, polygalacturonase activity was slightly through the addition of thiamine and riboflavin, and the optimum concentrations were $10^{-2}M$ in case of thiamine and $10^{-3}M$ in riboflavin.
Polygalacturonase of Byssochlamys fulva was purified and characterized. Specific activity increased from 2.21 units/mg protein to 10.47 units/mg protein through $(NH_4)_2SO_4$ treatment, SephadexG-100 gel filtration, and DEAE-Sephadex ion exchange chromatography. Divalent cations, such as $Ca^{++}\;and\;Cu^{++}$, increased polygalacturonase activity greatly. Added as $10^{-3}M$ concentration, $Ca^{++}$ ion enhanced enzyme activity 9.8folds. Optimum temperature was $50^{\circ}C$ and optimum pH was 5.0. Activation energy of reaction was 8.69 Kcal/mole. Michaelis-Menten $constant(K_M)\;and\;V_{max}$ of reaction were $6.27{\times}10^{-3}mole/l\;and\;2.85{$\mu}moles/min$. Polygalacturonase of Byssochlamys fulva preferred polygalacturonic acid to pectin as substrate and was presumed as endo-type on the basis of the relationship between viscosity reduction and substrate degradation. Molecular weight of polygalacturonase was estimated as 55,000.
Pectolytic enzymes were extracted in apple fruits rotted by Botryosphaeria dothidea, and their activities and change of pectic substances were investigated. Exo-polygalacturonase(exo-PG), exo-polymethylgalacturonase(exe-PMG), polygalacturonate-trans-eliminase(PGTE) and pectin-methyl-trans-eliminase(PMTE) were produced by the pathogen. Activities of exo-PG and exe-PMG extracted from rotten apple fruits were high to 21.15 and 24.65 units/mg protein in specific activity at seven days after inoculation, respectively. Activities of PGTE and PMTE showed 5.60 and 7.90 units/mg protein, respectively, but they were lower than those of the exo-type enzymes. Water-soluble and versene-soluble pectins were 11.50 mg/100 mg-AIS and 7.31 mg/100 mg-AIS at 14 days after inoculation, namely, they were increased by 4.23 and 2.16 mg/100 mg-AIS over those of sound apples, respectively. Total soluble pectic substances of rotten apple were 72.4% of total pectic substances and it was higher by 24.8% than sound apple. Insoluble pectic substance was notably decreased from 15.32 to 7.16 mg/100 mg-AIS according to progress of decay while total pectic substances were not changed remarkably.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.38
no.5
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pp.535-540
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2009
The effect of cellulolytic (Viscozyme) and pectolytic (Pectinex) enzyme treatments on extraction of total polyphenol and antioxidant activity of extract from apple peel have been examined. Extraction was carried out with a dosage of 0.1, 0.25, 0.5, 1 and 2% (v/v) of Viscozyme, Pectinex and Viscozyme+Pectinex at $30{\sim}50^{\circ}C$ for $12{\sim}24$ hours. Total polyphenol contents (mg/mL) of extracts obtained with 2% of Viscozyme, Pectinex or Viscozyme+Pectinex treatment for 12 hours were $0.30{\pm}0.02$, $0.16{\pm}0.01$, and $0.33{\pm}0.02$ at $30^{\circ}C$, $0.34{\pm}0.01$, $0.19{\pm}0.01$, and $0.35{\pm}0.02$ at $40^{\circ}C$ and $0.34{\pm}0.01$, $0.22{\pm}0.01$, and $0.38{\pm}0.02$ at $50^{\circ}C$ respectively. The result shows that Viscozyme was more effective than Pectinex at all experimental temperatures, and Viscozyme+Pectinex resulted in the highest phenolic content at $50^{\circ}C$. Antioxidant activities determined by DPPH, ABTS and FRAP assays were increased with concentrations of extracts produced by 2% of Viscozyme+Pectinex treatment, which ranged from 0.10 to 0.40 vit. C eq mM for $5{\sim}25\;mg$ of dried matters, from 0.09 to 0.28 vit. C eq mM for $1{\sim}5\;mg$ of dried matters, and from 0.06 to 1.85 $FeSO_4$ eq mM for $1{\sim}5\;mg$ of dried matters, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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