돼지 장염 바이러스를 동시에 감별 진단할 수 있는 새로운 진단법인 oligonicleotide microarray 기법을 돼지 설사 분변을 대상으로 바이러스 감염을 진단하고 기존의 진단법으로 널리 사용되고 있는 RT-PCR과 진단기법의 민감도와 특이도를 비교하고자 하였다. 32개 양돈장, 102 예의 포유 및 이유자돈의 설사분변에서 microarray를 이용한 검사결과 Transmissible gastroenteritis virus (TGEV) 9.8%, porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) 28%, (porcine enteric calicivirus (PECV) 18.6%, porcine rotavirus (PRV) group A 6.9%, PRY group C 1% 의 검출률을 확인하였다. 또한 RT-PCR 기법과의 비교에서도 100%의 민감도와 72.2%의 특이도를 보였으며 agreement는 85.3%, kappa value 0.71로 우수한 진단기법임을 확인하였다. 이를 통해 microarray 진단법은 RT-PCR 후의 전기영동 과정과 민감도를 높이기 위해 수행되는 nested PCR 수행의 번거러움을 없애면서 정확한 감별진단을 수행할 수 있는 진단 기법임을 확인하였다.
돼지의 주요 장염 유발 바이러스인 돼지 전염성 위장염 바이러스 (transmissible gastroenteritis virus; TGEV), 돼지 유행성 설사증 바이러스 (porcine epidemic diarrhea virus; PEDV), 돼지 칼리시 바이러스 (porcine enteric calicivirus; PECV), 돼지 로타바이러스 A 형과 C 형 (porcine rotavirus; PRY, group A and C)을 동시에 감별 진단 할 수 있는 신속하고 정확한 oligonucleotide microarray 진단법을 개발하였다. 이 진단법은 유리슬라이드에 각각의 바이러스에 특이적인 부위에서 제작된 oligonucleotide probe를 찍은 DNA chip을 제작하여 여기에 각각의 바이러스를 역전사하고 cy5-dCTP를 포함한 multiplex PCR을 수행한 다음 hybridization 하였다. 이후 hybridization 결과는 fluorescence scanner를 이용하여 확인하였다. 이 새로운 microarray system은 RT-PCR과 같은 기존의 진단방법보다 소량의 바이러스를 민감하게 검사할 수 있을 뿐 아니라 hybridization을 통해 검사결과의 정확성을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구에서 개발한 microarray system은 돼지의 설사 유발 바이러스를 진단하는데 매우 유용한 진단 방법임을 확인하였다.
Kim, Tae-ju;Cho, Ho-seong;Kim, Yong-hwan;A.W.M. Effendy;Park, Nam-yong
한국수의병리학회:학술대회논문집
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한국수의병리학회 2003년도 추계학술대회초록집
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pp.32-32
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2003
Intestinal infections are common in growing pigs and can be caused by multiple pathogens, environmental and management factors [1]. Among the most important viruses in swine enteritis are porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), transmissible gastroenteritis virus (TGEV), porcine enteric calicivirus (PECV), porcine group A rotavirus (PRV gp A) and bacteria are Escherichia coli and Salmonella spp. and protozoa is Isospora suis [1]. The DNA chip system can serve as a powerful tool that can be utilized for simultaneous detection of specific pathogenic bacteria strains and viruses [2,3]. The combination of PCR and DNA chip technology will provide a novel method for the detection of porcine enteric pathogens thus revolutionize the diagnosis and management of the disease. The aim of this study is to develop DNA chip system for the rapid and reliable detection of five major porcine enteric pathogens based on oligonucleotide DNA chip hybridization. (omitted)
Porcine epidemic diarrhea (PED) is characterized by acute enteritis, watery diarrhea, weight loss, dehydration, and death with high mortality in neonatal piglets. In this study, 3 virus isolates collected in Vietnam between 2016 and 2017 were successfully propagated in Vero cells at high virus titers. Sequence analysis of the full-length spike (S) gene revealed that all 3 isolates belong to genogroup 2a, which is closely related to other prevalent Asian strains. Amino acid sequence comparisons revealed 98.19% to 99.13% homology with the Vietnam isolates circulating during 2013-2015, suggesting that field PED viruses (PEDVs) evolve continuously. Experiments in animals demonstrated that antisera from guinea pigs immunized with the vaccine strain resulted in higher levels (5 log2) of neutralizing antibody against the homologous strain, and showed a relatively lower level of neutralizing antibody against the field isolates. This finding would be helpful in choosing a PEDV strain for vaccine development.
Van Tan Do;Quang Lam Truong;Hoai Thu Dao;Thi Lan Nguyen;Minna Shin;Kyeong Ryeol Shin;Tae-Wook Hahn
대한수의학회지
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제63권2호
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pp.18.1-18.8
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2023
Porcine epidemic diarrhea (PED) is characterized by acute enteritis, watery diarrhea, weight loss, dehydration, and death, with high mortality in neonatal piglets. In this study, 3 virus isolates collected in Vietnam between 2016 and 2017 were propagated successfully in Vero cells at high virus titers. Sequence analysis of the full-length spike (S) gene showed that all 3 isolates belong to genogroup 2b, which is closely related to other prevalent Asian strains. A comparison of the amino acid sequence revealed a 98.19% to 99.13% homology with the Vietnam isolates circulating during 2013-2015, suggesting that field PED viruses (PEDVs) are evolving continuously. Experiments in animals showed that the antisera from guinea pigs immunized with the vaccine strain resulted in higher levels (5 log2) of neutralizing antibodies against the homologous strain and a relatively moderate level of neutralizing antibodies against the field isolates. This finding would be helpful in selecting a PEDV strain for vaccine development.
미립담체에 고정된 Vero 세포를 이용한 돼지유행성설사병 바이러스 백신의 생산성을 향상시키기 위하여 Phillipsite-Gismondine synthetic zeolite가 투석막에 충진된 Carberry type 생물반응기를 사용하여 암모늄 이온을 선택적으로 흡착하였다. Impeller shaft 및 흡착제 사이에 응집된 미립담체 때문에 세포 성장이 감소하는 것으로 보이나, 포도당 소모량과 젖산 생성량의 비교를 통해 판단 할 때 zeolite는 세포에 독성을 나타내지 않았다. 배양배지로부터 암모늄 이온을 제거함으로써 세포성장 및 바이러스 생산 두 단계 모두가 크게 개선되었다. 바이러스 생산에 있어서는 암모늄 이온 제거에 의해 대조군과 비교하여 바이러스 역가가 2배 이상 향상되었다. 연구결과 zeolite는 암모늄 이온을 효과적으로 흡착제거하여 바이러스 백신의 생산성을 높일 수 있는 이상적인 흡착제임을 확인하였다.
Porcine transmissible gastroenteritis (TGE) has been a significant cause of economic losses in pig farming industry since 1950s. Although transmissible gastroenteritis virus (TGEV) has declined in recent years, it should not be excluded because of its characteristics; the frequency of gene mutation, the mortality in piglets, and the possibility for sudden incidence. Therefore, the herd-level monitoring of the virus is important to prevent further circulation of TGE. The aim of this study is to develop a large-scale sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with high specificity to rapidly detect TGEV in feces by using monoclonal antibodies (Mabs). The TGEV specific Mabs were produced in hybridoma cells. Among the Mabs belonged to the IgG class developed by this study, the final selected 8H6, 1B7, 4G3, and 1F8 were identified to have the neutralization ability against TGEV. The sandwich ELISA was established using 8H6 as a reporter antibody and 1B7 and the reported 5C8 as a capture antibody. The developed sandwich ELISA was able to distinguish TGEV from other pathogenic diarrheal agents (porcine rotavirus, porcine reovirus, porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), E. coli, and C. perfringens) in tissue culture as well as fecal samples. And the detection rate of TGEV in feces was 80% compared with RT-PCR. The results suggested that the developed sandwich ELISA may be useful in the herd-level monitoring for effective preventive measures due to the early diagnosis of TGEV using a large amount of samples.
This is a study on the improvement of the chemical treatment method of the livestock carcass treatment newly introduced in the livestock infectious disease prevention method in order to improve the problems of the existing burial-centered carcass treatment method when a livestock infectious disease occurs. It was conducted to establish detailed treatment standards for the chemical treatment method of pig carcasses based on the results of proof of the absence of infectious diseases in pigs. After inoculating pig carcasses with 10 pathogens (6 viruses [FMDV, ASFV, CSFV, PCV2, PRRSV, PEDV] and 4 bacteria [Lawsonia intracellularis, Clostridium perfringens type C, E. coli, Salmonella Typhimurium]) It was treated at 90℃ for 5 hours in a potassium hydroxide (KOH) liquid solution corresponding to 15% of the body weight. This method liquefies all cadaveric components and inactivates all inoculated pathogens. Based on these results, it was possible to prove that chemical treatment of pig carcasses is effective in killing pathogens and is a safe method without the risk of disease transmission. Although there are problems to be solved in the processing and operation of the chemical treatment products of livestock carcasses, the chemical treatment method of livestock carcasses can be suggested as an alternative to the current domestic burial-centered livestock carcass treatment method, preventing environmental pollution, and contributing to public health.
피자두와 후무사로 만든 자두와인 내 총 페놀화합물과 플라보노이드 함량을 비교분석한 결과, 총 페놀화합물은 피자두 와인 ($478.4{\pm}5.6\;mg/L$)이 후무사 와인 ($200.6{\pm}7.5\;mg/L$)보다 2배, 플라보노이드 함량은 피자두 와인 ($202.4{\pm}7.5\;mg/L$)이 후무사 와인 ($64.4{\pm}6.8\;mg/L$)보다 3배 이상 많았다. 자두와인 자체의 항산화 효과를 DPPH 전자공여능으로 비교분석하였을 때 정제된 페놀화합물보다 그 활성이 크게 낮았으나, ethyl acetate로 추출한 중성 페놀화합물과 산성 페놀화합물의 항산화 활성은 mg/mL의 농도에서 정제된 페놀화합물과 비슷하게 나타났다. 특히, 중성페놀화합물의 경우, $100{\mu}g/mL$의 농도에서 64.5%의 전자공여능을 나타내었는데 이는 동일 농도의 정제된 페놀화합물(chlorogenic acid 15.5%, quercetin 24.6%)의 활성보다 3배 이상 높은 값이었다. vero cell에 돼지설사바이러스(PEDV)를 감염시켜 페놀화합물의 항바이러스 활성을 분석한 결과 중성 페놀화합물이 저농도 ($10\;{\mu}g/mL$이하)에서 상용 항바이러스제인 ribavirin보다 세포독성효과 (CPE)를 더 억제시키는 것으로 나타났다. 두 종류의 페놀화합물간에는 중성 페놀화합물이 산성 페놀화합물에 비해 최대 1.5배 정도 더 높은 항바이러스 활성을 보여주었다. 그러나, 고농도 ($100\;{\mu}g/mL$)에서는 ribavirin이 페놀화합물보다 높은 활성을 나타내었다. 정상세포에 대한 세포독성은 모든 실험군에서 나타나지 않아 페놀화합물의 항바이러스 활성이 바이러스 특이적인 효과임을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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