An immunogenic, high molecular weight lipopolysaccharide (LPS)-protein complex isolated from a potassium thioncyanate extract of a Pasteurella multocida (P multocida ; strain P-2383, capsular type A and somatic type 3) was characterized. Chemical analysis of the complex by gas chromatography on a capillary column demonstrated that this complex contained most of the chemical constituents characteristic of LPS extracted by the phenol-water methed from the whole bacterium. However, there was proportionately more carbohydrate than fatty acid in the complex in contrast to LPS in which fatty acid seemed to be in excess. When toxicity of the complex was evaluated in 10-day-old chicken embryos, the complex was less toxic ($LD_{50}=12.72{\mu}g$) than the purified LPS ($LD_{50}=0.44{\mu}g$). The $LD_{50}$, of the LPS moiety extracted from the complex was $5.24{\mu}g$. Composition of the complex was analyzed by SDS-PAGE with silver staining and Western immunoblotting. The complex did not migrate through the polyacrylamide gel unless dissociated with SDS. The complex dissociated with SDS contained at least 32 different protein and polysaccharide components: 18 components reacted with an antiserum against the complex. There was no significant compositional variation between the complexes from different strains, but quantitative differences in individual components were noted. When cross-protectivity of the complex was evaluated in mice, this complex provided substantial protection not only against the homologous bacteriun but also against different P multocida strains of the same serotype. LPS-protein complexes isolated by the same method from other strains also induced protection against an challenge with P-2383.
본 연구에서는 병원성 Pasteurella multocida D:4 외막 단백질 H의 방어적 면역성과 백신으로서의 가능성을 검정하고자, 외막 단백질 H 유전자를 대장균에서 발현, Trx와 융합된 형태의 재조합 외막 단백질 H를 분리하여 면역화와 백신 실험에 항원으로 사용하였다. 면역 실험에서 재조합 외막 단백질 H는 높은 역가의 항체를 유도하였으며, 불활화한 사균 백신과 유사한 수준의 백신 효과를 나타내었다.
Antimicrobial susceptibility, plasmid profiles and distribution of toxA gene were investigated in Pasteurella multocida isolated from pneumonic lung lesions of swine. The bacteria were highly susceptible to norfloxacin, cabenicillin, enrofloxacin and chloramphenicol, but resistant to colistin, sulfamethoxawle/trimethoprime, bacitracin, streptomycin. Sixty percentage of the isolates was resistant more than 2 drugs used in this experiment and 21 strains (23.6%) were resistant more than 5 drugs. This phenomenon meant that they had highly multi-drugs resistance. In the analysis of plasmid profiles, nineteen strains (47.5%) of 40 P multocida isolates harbored plasmids, ranging from 53.3kb to 2.49kb in size and the plasmid profiles could be classified into 5 groups. However, there was no relationship between the size and the profile of plasmid and the resistance pattern of antimicrobial agents. Thirty strains of 39 P multocida isolates (77%) investigated by PCR harbored toxA gene. This result suggested involvement of the ToxA protein expressed from the gene in pneumonic pasteurellosis of swine.
Pasteurella multocida serogroup D strain, which produces P. multocida toxin (PMT), is a widespread and harmful pathogen of respiratory diseases such as pneumonia and progressive atrophic rhinitis (PAR) in swine. Vaccination has been considered the most desirable and effective approach for controlling the diseases caused by toxigenic P. multocida. To investigate the antigenicity and immunogenicity of partial fragments of recombinant PMT, recombinant proteins of the N-terminal (PMT-A), middle (PMT-B), C-terminal (PMT-C), and middle-C-terminal (PMT2.3) regions of PMT were successfully produced in an Escherichia coli expression system. The molecular masses of PMT-A, PMT-B, PMT-C, and PMT2.3 were ca. 53, 55, 35, and 84 kDa, respectively, purified by nickel-nitrilotriacetic acid (Ni-NTA) affinity column chromatography. All the recombinant proteins except for PMT-A showed immune responses to antisera obtained from a swine showing symptoms of PAR. Moreover, high titers of PMT-specific antibodies were raised from mice immunized with each of the recombinant proteins; however, the immunoreactivities of the antibodies to authentic PMT and heat-inactivated whole bacteria were different, respectively. In the protection study, the highest protection against homologous challenge was shown in the case of PMT2.3; relatively poor protections occurred for the other PMT fragments.
Lee, Yun Chan;Oh, Yeonsu;Choi, Sang Ho;Chae, Mi Kyung;Na, Ki Bok;Yook, Sim Yong;Han, Jeong Hee
한국동물위생학회지
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제44권1호
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pp.35-43
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2021
Rabbit infectious hemorrhagic fever has been reported in rabbits worldwide. The disease is also frequently reported on Korean rabbit farms, and the pathological study of 9 rabbits on such disease-occurring farms was attempted to identify the pathogen. Clinical signs were torticollis and ear ulceration. Most rabbit died with bloody nasal discharges. At necropsy, multiple hemorrhages and inflammation were observed in heart, lung, liver and uterus. The main histopathologic features were hemorrhagic suppurative meningoencephalitis, fibrinous bronchointerstitial pneumonia, bacteremia, liver cell necrosis, multifocal hemorrhages in kidney and disseminated intravascular coagulopathy. The viral VP60 gene of RHDV was identified by Reverse Transcriptase PCR. Pasteurella multocida organisms were cultured, identified by biochemical test and serotyped as A by multiplex capsular typing PCR. In conclusion, the fatal hemorrhagic disease was due to combined infection with both RHDV and P. multocida in rabbits. To our knowledge, this is the first case report about co-infection with both RHDV and P. multocida in rabbits in Korea.
돼지의 만성 호흡기 질환인 위축성 비염을 방제할 수 있는 생물공학적 방법을 개발하고자 먼저 자연계에서 돼지 위축성 비염의 원인균에 대한 항균활성이 강한 세균을 분리하여 동정하고 몇 가지 항균특성을 조사하였다. 자연계에서 항균성 물질 생산 균주로 분리한 1080주의 세균 가운데 돼지 위축성 비염의 원인균인 Bordetella bronchiseptica 와 Pasteurella multocida에 대하여 강한 항균활성을 갖는 Y-5 균주를 최종 선정한 후 동정한 결과 Bacillus sp. Y-5로 추정되었다. Y-5 균주를 pH 6.0으로 조절된 육즙배지에서 $30^{\circ}C$, 21시간 배양하였을 때 Bordetella bronchiseptica에 대하여 가장 높은 항균활성을 보였고, Y-5 균주를 $30^{\circ}C$, pH 6.5에서 18시간 배양 하였을 때 Pasteurella multocida에 대하여 가장 강한 항균활성을 보였다.
In recent years much attention has been paid to swine respiratory infection caused by Pasteurella(P) multocida with rapid expansion of pork Industry in Korea. The present study was performed to observe the etiologic situation of P. multocida infection by bacteriological, serological(serotyping) and pathological examinations with the lungs respectively. In addition antibiotic susceptibility test was carried out against the isolated strains of P. multocida. The results obtained are as follows : 1. Eighteen strains(12.8%) wert isolated from the 140 cases of swine lungs examined, and biological and biochemical characteristics of the isolates were the sam as those in the references of other workers, whereas some differences were observed in sugar fermentation and enzyme activity according to the strain of isolates. 2. Capsular serotyping performed on 18 P. multocida revealed that 13 strains(72.2%) were A type and 5 strains(27.8%) were D type, respectively. 3. When serotyping was performed against somatic antigen on 18 strains capsular types of which were identified as described above 9(50%), 3(16.7%) and 4(22.2%) strains belong to 1:A, 3:A and 2:D, respectively, but untypable 2 strains(11.1%) were observed. 4. Antibiotic susceptibility test by employing disc method for 24 kinds of drugs revealed that 15 kinds of antibiotics were sensitive to 18 strains of P. multocida isolated such as ampicillin(l00%), penicillin(100%), cloxacillin(56%), piperacillin(70%), cefotaxime(30%), minocycline(60%), chloramphenicol(95%), erythromycin(39%), kanamycin(17%), gentamicin(70%), amikasin(30%), colistin(78%) and nalidixic acid(5%), respectively, but resistant to 9 kinds of antibiotics such as sulpenicillin, cefazolin, cephalothin, cefametazol, cefoperazone, kitasamycin, oleandomycin. lincomycin and bacitracin. 5. Pathological features of 60 cases of swine lungs indicated that pneumonic .lesions were observed in 38 cases(63.3%) examined by macroscopic finding, in which lesions of 8 cases(13.4%) would correspond to those of mycoplasmal infection, and 30 cases(50%) were similar to viral infection by histopathological finding, whereas 22 cases(36.7%) were considered to be normal by ecropsy or histopathological finding.
Atropic rhinitis (AR) is one of major respiratory diseases in pigs. AR causes a great economic losses and is considered to be a multifactorial disease in which herd management, heredity, and environment. Several vaccines against have been developed commercially and used in pig farms but the efficacy of each vaccine is still questionable. In this study, one of commercial AR vaccines, which contains inactivated Bordetella bronchiseptica, Pasteurella multocida type D and their toxoid was evaluated for vaccine efficacy by challenge test. Twenty piglets were divided into four groups as follows; group I was piglets from vaccinated sows (twice before parturition); group II was piglets from vaccinated sows (same as group I) and were vaccinated at 1 day old; group III and IV were piglets without any vaccination. Groups I, II, and III were challenged by intranasal instillation of $5.3{\times}10^7$ CFU of B bronchiseptica twice and $1{\times}10^9$ CFU of P multocida five times. Group IV was control group without any vaccination and any challenge. We compared serological results, recovery rate of P multocida by polymerase chain reaction, clinical signs and pathological findings between vaccinated groups and unvaccinated groups for efficacy of the vaccine, Serological responses against B bronchiseptica and toxigenic P multocida type D were not showed evident discrepancy between vaccinated groups and unvaccinated groups assuming that the antibody responses against the vaccine is very delayed. However, growth rate, clinical signs and snout lesion grading in vaccinated groups showed more favorable than those in unvaccinated group. Therefore, AR vaccination in this study is considered to be effective in the prevention of AR in pigs.
Fowl cholera is an infectious disease caused by .Pasteurella multocida, affecting domesticated and wild birds. It usually appears as a septicemia of sudden onset with high morbidity and mortality, but chronic conditions that characterized by localized infections often occur. 13wks broiler breeders were submitted to the Kyung-pook national university for diagnosis. Clinical signs included approximately 1% mortality, severe lameness, ruffled feathers and swollen and/or cloudy eyes. At necropsy, the outstanding lesions were seen swollen hock joint, which were suppurative or caseous exudates, inflammation of conjunctiva, severe pneumonia and epicarditis. The causative agent was isolated from the hock joint, liver, sinus and sternum of the chickens, and performed physiological and biochemical test. To identify the serotype of P. multocida, capsular serotyping was conducted by multiplex polymerase chain reaction (PCR). In the antimicrobial susceptibility test, the isolates were resistance to the aminoglycosides. In this study, we confirmed chronic fowl cholera (FC) caused by P. multocida in broiler breeders in Korea.
Cyclophosphamide(CY)가 마우스 및 가토(家兎)의 P. multocida 야외분리균주(野外分離菌株)의 호흡기관내(呼吸器管內) 인공감염(人工感染)에 대한 감수성(感受性)에 미치는 영향(影響)을 연구(硏究)하였다. 체중(體重) Kg당(當) 300mg CY를 주입(注入)한 마우스와 150mg CY를 처리(處理)한 가토(家兎)는 P. multocida의 호흡기관내(呼吸器管內) 인공감염(人工感染)에 대해서 높은 감수성(感受性)을 보였다. 또한 CY 처리(處理)는 일시적(一時的)으로 말초혈액(末梢血液) 중에 있는 총백혈구수(總白血球數)와 단핵백혈구수(單核白血球數)의 감소(減少)를 야기(惹起)했고, 비장(脾臟)의 백수(白髓)와 적수(赤髓)에 있는 임파구(淋巴球)의 소실(消失)을 초래(招來)했다. CY 주사(注射)된 가토(家兎)는 접종(接種)된 균주(菌株)에 대한 항체형성능력(抗體形成能力)의 저하(低下)를 나타냈다. 얻어진 결과(結果)는 가토(家兎)에 있어서 면역기능(免疫機能)의 저하(低下)와 호흡기질병(呼吸器疾病) 발생(發生) 간(間)의 상호관계(相互關係)에 대해 고찰(考察)하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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