The composition of dissolved gases and nutrients in a liquid medium were determined for establishment of the optimum conditions for in vitro culture of Helicobacter pylori. A microaerobic condition facored by the organism was prepared by adjusting the partial pressure of the gas, agitation speed, and viscosity of the medium. The gaseous concentrations were controlled by utilizing CampyPak Plus that reduced oxygen while augmenting carbon dioxide. Agitation of the broth facilitated the oxygen transfer to the cells, yet inhibited the growth at high rates. An increase of viscosity in the medium repressed the culture although this variable was relatively insignificant. The chemical constituents of the liquid broth were examined to establish an economic model for H. pylori cultivation. The microbe required a neutral pH for optimum growth, and yet was also able to proliferate in an acidic condition, presumably by releasing the acidity-modulating enzyme, urease. Cyclodextrin and casamino acid were investigated as growth enhancers in place of serum, while yeast extract unexpectedly inhibited the cells. A low concentration of glucose, the unique carbon source for the organism, increased the cell density, yet high concentrations resulted in an adverse effect. Under optimally dissolved gas conditions, the cell concentration in brucella broth supplemented with serum substitutes and glucose reached $1.6{\times}10^8$ viable cells/ml which was approximately 50% higher than that obtained in the liquid medium added with only cyclodextrin or serum.
Bocillus subtilis를 유전공학의 숙주 세포로서 이용하기 위해서는 우선 적당한 vector의 개발이 요구된다. Oxytetracycline의 항생물질을 생산하는 방사선균인 Streptomyces rimosuf IFO 0014로 부터 oxytetracycline-resistant plasmid DNA를 pH 9.0의 phenol-buffer system으로 추출하여 B.subtilis KPM 60[St $r^{R}$-mutant of RM 125 (leu A8, arg 15, hsr $M^{-}$, hsm $M^{-}$)] 1균주에 형질전환시키면서 이 plasmid DNA가 표현되게 하였다. 이때 형질전환의 조건으로서 KPM60을 growth medium에서 3시간, competence medium에서는 30분내지 60분간 그리고 DNA와는 20분동안 접촉시킴으로서 가장 높은 빈도로 형질전환이 일어났다. (대개 $10^{-4}$ 빈도 이상) 또 recipient cell의 competence화에는 oH7.5에서 그리고 형질전환에는 2$0^{\circ}C$에서 최적상태를 보였다.
Mycological characteristics of Phytophthora nicotianae var. nicotianae SPC10 (A1 type) causing Phytophthora rot of strawberry and the resistances of 11 strawberry cultivars against the pathogen were examined. Optimum temperature for the mycelial growth of the pathogen was obtained in the range of 30~35$^{\circ}C$, and the growth was completely stopped under 13$^{\circ}C$ or over 42$^{\circ}C$. Aerial mycelia were abundant on oatmeal agar (OMA), V-8 juice agar (V8A) and lima bean agar (LBA) medium, although there were slight differences, however, on cornmeal agar (CMA) medium, it was a shape of stellate without aerial mycelia. The colony shape on potato dextrose agar (PDA) medium was rough and irregular whereas the mycelial growth was slow, and some aerial mycelia were only produced in the middle of PDA medium. Optimum temperature for sporangial formation was 3$0^{\circ}C$, and zoospores were mostly released at $25^{\circ}C$ from the sporangia. Sporangia were more produced in C/Z solution with pH 5. 0~6.$0^{\circ}C$ than sterilized distilled water (DSW) and distilled water (DW), and zoospores were also released much more than other solutions. Eleven strawberry cultivars such as Reiko, Hokowase, Eyeberry, Akaneko, Sistakara, Toyonoka, Nyoho, Sulhong, Suhong, Myhong and Wonkyo #3104 revealed the disease incidence up to 88.9~100% by the leaf inoculation with mycelial disk. However, Nyoho and Suhong showed higher level of resistance against the pathogen by root inoculation.
느타리버섯 균사를 톱밥에 배양할 때 분비되는 여러 가지 extracellular enzyme중 pretense, phenoloxidase, cellulase가 배양조건을 달리하였을 때 변화양상을 요약하면 먼저 톱밥의 종류에 따라서는 참나무톱밥에 비해 포플라톱밥이 specific activity가 높은 경향이었다. 첨가제 종류에 따라서는 밀기울에 비해 미강이 약간 높았으며 혼합비율이 30, 20, 10%순으로 높았다. 수분함량은 3가지 효소 모두 70%에서, 배지의 PH에 따라서 protease는 pH 4와 9, cellulase는 pH6, phonoloxidase는 pH 5와 7, 배양온도는 3가지 효소 모두 $25^{\circ}C$, 목초액 농도에 따른 pretense와 phonoloxidase는 무처리가 처리보다 총활성이 높았으며, cellulase는 0.5%에서 총활성이 가장 높았다.
세일링요트의 추진시 횡류를 방지하기 위하여 선체 하부에 킬을 부착하게 되는데 이는 세일의 양력에 의한 횡흐름을 멈추게 하는 역할과 힐 모멘트를 없애고 복원력을 생기게 한다. 이는 안전성에 영향을 미치기 때문에 적절한 킬의 선택은 중요하다고 할 수 있다. 또한 킬 하부에 부가물의 부착은 발라스트 중량중심을 낮춤으로서 선체 복원력에 중요한 영향을 미치므로 킬에 대한 최적형상 도출은 매우 중요하다. 이에, 본 연구에서는 저항성능 향상을 위한 동일 침수표면적의 핀킬 하부 부가물에 따른 저항특성을 비교 실험하였다. 실험방법으로는 회류 수조를 이용하여 3가지 핀킬 하부 부가물 모형킬을 모형선에 부착하여 형상별 저항특성을 비교 분석하였다. 분석 결과에 따른 저항감소 최적 형상을 도출 하였다.
In the present study, the optimization of poly(${\gamma}$-glutamic acid) (${\gamma}$-PGA) production by Bacillus sp. FBL-2 was studied using a statistical approach. One-factor-at-a-time method was used to investigate the effect of carbon sources and nitrogen sources on ${\gamma}$-PGA production and was utilized to select the most significant nutrients affecting the yield of ${\gamma}$-PGA. After identifying effective nutrients, response surface methodology with central composite design (CCD) was used to obtain a mathematical model to identify the optimum concentrations of the key nutrients (sucrose, $\text\tiny{L}$-glutamic acid, yeast extract, and citric acid) for improvement of ${\gamma}$-PGA production. The optimum amount of significant medium components appeared to be sucrose 51.73 g/l, $\text\tiny{L}$-glutamic acid 105.30 g/l, yeast extract 13.25 g/l, and citric acid 10.04 g/l. The optimized medium was validated experimentally, and ${\gamma}$-PGA production increased significantly from 3.59 g/l (0.33 g/l/h) to 44.04 g/l (3.67 g/l/h) when strain FBL-2 was cultivated under the optimal medium developed by the statistical approach, as compared to non-optimized medium.
소규모 병재배 농가는 대규모 농가에 비하여 생산비가 많이 소요되므로 가격경쟁력이 낮다. 소규모 농가에서 인력의 존도가 높은 점을 활용하여 주 생산품목과 유사한 조건에서 동시에 재배가 가능한 다품목의 생산체계를 확립하기 위하여 본 시험을 수행하였다. 그 결과 큰느타리와 버들송이의 재배조건이 유사함을 토대로 공통의 배지를 선발하였다. 병재배용 자동입병기를 사용하여 배지를 충진하였을 때, 배지재료의 종류 및 혼합비율에 따라서 병내의 고상비율은 20~25% 범위로 차이가 있고, 배지의 수분함량 65%에서 액상비율은 38~45, 기상비율은 31~41까지 차이가 많았다. 배지의 최적 수분함량은 버섯 종류와 배지의 조성에 따라서 다른 경향이었다. 큰느타리의 경우 미송톱밥+미강 또는 미송톱밥+건비지 배지는 수분함량 70%, 미송톱밥+밀기울 배지는 65%, 미송톱밥+밀기울+건비지 배지는 67%에서 수량이 많았다. 버들송이는 공시배지 모두 수분함량 70%에서 수량이 많았다. 공시배지중 큰느타리는 미송톱밥+밀기울+건비지 75:20:5(v/v,%), 수분 67%; 버들송이는 미송톱밥+밀기울 75:25(v/v,%), 수분 70% 배지에서 자실체 수량이 많았다. 그리고 미송톱밥+미강+건비지 75:20:5(v/v,%), 수분함량 70% 배지에서 큰느타리와 버들송이는 배양기간, 버섯 발생 및 생육 환경이 비슷하여 공통의 재배용 배지로 사용하기에 알맞았다. 따라서 큰느타리가 주 품목인 소규모 농가에서 큰느타리용 배지의 일부에 버들송이 종균도 접종하여 동일한 재배환경에 안정적인 동시 생산이 가능할 것으로 판단된다.
실험실 내에서의 해양 선충류 최적 배양 조건을 찾기 위해 한천배지로 다양한 배지를 제작하여 선충류를 대상으로 한 연구를 수행하였다. 선충류 채집은 태안 만리포 조간대 중 하부의 사질 퇴적물 표층에서부터 약 5 cm의 퇴적물에서 이루어졌다. 배양에 이용한 한천 배지는 Killian 배지의 조성을 다소 변형하고, 한천 농도에 차이를 두었으며, 이 한천배지들을 직경 60 mm 페트리디쉬에 배지 높이가 2.0 mm가 되도록 분주하였다. 선충류의 먹이 생물로서 순수 배양한 미생물 5종을 혼합하여 각각의 배지에 첨가하였다. 각 배지에 Enoplolaimus sp. 5개체를 접종하여 $20^{\circ}C$, 암배양으로 설정된 배양기 내에서 배양하였다. Enoplolaimus sp.에 대하여 여러 조건의 실험을 반복 수행한 결과, Killian 배지에 소고기 육즙만을 첨가한 배지의 한천농도 1.0%에서 평균 생존시간이 246.8시간으로 가장 높은 생존율을 나타냈다. 가장 낮은 생존시간은 Killian 배지에 bacto peptone과 소고기 육즙(beef extract)을 첨가한 한천농도 0.4%의 먹이 공급을 한 배지에서 평균 27.6시간으로 가장 낮은 생존시간을 나타냈다. Bathylaimus sp.는 Killian 배지 한천농도 1.0%의 먹이 공급을 하지 않은 배지에서 가장 높은 생존시간을 나타내었고, 산란량과 부화율 실험에서는 평균 7개의 알을 산란하였으며 평균 99.5시간 후에 94.7%의 부화율을 보이는 결과를 나타냈다
토양시료로부터 치아우식원인균인 S. mutans에 대하여 항균력을 나타내는 방선균주를 순수분리하여 분리균주를 공시균주로 하여 항생물질 생성에 미치는 환경인자를 규명하였다. 본 공시균주의 항생물질 생성 최적배지조성은 Bacto-soytone 1%, glucose 1%, NaCl 0.5%, $CaCO_3$ 0.1% 였으며 배지의 초기 pH는 7.0이었다. 또한 항생물질은 $28^{\circ}C$에서 진탕배양시 생성의 최적조건이었으며 본 공시균주는 24시간 유도기를 거쳐 배양 72시간째 항생물질의 생성과 더불어 균의 최대증식도를 나타내었다.
Celluloytic microorgnasims were isolated form the various sources and four of them were identified as Trichoderma roningi, Aspergillus niger, Penicillium chrysogenum, and Streptomyces sp. The induction of extracellular5 cellulase of these species in the liquid culture media containing carboxymethylcellulose (CMC) or Avicel as inducer showed that CMC was a better effective inducer for the production of CMCase(Cx cellulase component) as well as Avicelase(C$_{1}$ cellulase component) than Avicel. It is believed that certain hydrolysis products of cellulose(CMC) could serve as an inducer for an enzyme synthesis. In T. roningi, Asp. niger, and Strptomyces sp., the optimum temperature of CNCase on CMC-culture medium was 50.deg. but temperature around 40.deg.C was found to be optimum for the activities of CMCase prepared from P.ehrysogenum. The optimum temperature for Avicelase activitiles on Avicel-culture media of T. roningi and P. chrysogenum was $40{\circ}C$ whereas temperature $50{\circ}C$ was found to be optimum for Avicelase from A.niger and Streptomyces sp. The optimal activities of these CNCase and Avicelase prepared from. T. ronigi, Pen.chrysogenum and Streptomyces sp. were found similarly to be at pH's around 5.4 and 6.0 while pH 4.8 was optimum for the activities of CMCase and Avicelase from A.niger, indicating that A.niger in acidic media would yield an enzyme of high activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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