느타리버섯 균사를 톱밥에 배양할 때 분비되는 여러 가지 extracellular enzyme중 pretense, phenoloxidase, cellulase가 배양조건을 달리하였을 때 변화양상을 요약하면 먼저 톱밥의 종류에 따라서는 참나무톱밥에 비해 포플라톱밥이 specific activity가 높은 경향이었다. 첨가제 종류에 따라서는 밀기울에 비해 미강이 약간 높았으며 혼합비율이 30, 20, 10%순으로 높았다. 수분함량은 3가지 효소 모두 70%에서, 배지의 PH에 따라서 protease는 pH 4와 9, cellulase는 pH6, phonoloxidase는 pH 5와 7, 배양온도는 3가지 효소 모두 $25^{\circ}C$, 목초액 농도에 따른 pretense와 phonoloxidase는 무처리가 처리보다 총활성이 높았으며, cellulase는 0.5%에서 총활성이 가장 높았다.
Pseudomonas aeruginosa F722 produces a biosurfactant (BS) during its degradation of carbon and hydrocarbon compounds. The culture conditions for upgrading the biosurfactant productivity were investigated. The concentration of the biosurfactant produced by P. aeruginosa F722 was 0.78 g/L in C-medium; however, this increased to 1.66 g/L in BS medium, which was experimentally adjusted to optimal conditions. $NaNO_{2}$ was found to be most effective for microbial growth, with an $O.D_{600nm}$ of 1.18 for 0.1 % $NaNO_{2}$. Microbial growths, according to the $O.D_{600nm}$ were 2.53, 2.68, 2.89, and 2.87 for glucose, glycerol, $n-C_{10},\;and\;n-C_{22}$, respectively. Clear zone diameters (cm), indicating biosurfactant activity, were 9.0, 8.8, 5.7, and 8.5 for glucose, glycerol, $n-C_{10},\;and\;n-C_{22}$, respectively. Microbial growth was not consistent with the biosurfactant activity. The best biosurfactant activity was found with a C/N ratio of 20. Under optimal culture condition, the average surface tension decreased from 70 to 30 mN/m after 5 days. With aeration of 1.0 vvm, the biosurfactant produced increased to 1.94 g/L (up to 20%) compared to that of 1.66 g/L with no aeration. With aeration, the velocities of glucose degradation during both the log and stationary growth phases increased from 0.25 and $0.18\;h^{-1}$ to 0.33 and $0.29\;h^{-1}$, respectively, and the time for the culture to arrive at the maximum clear zone diameter became shorter, from 80 down to 60 h with no aeration.
Using Streptomyces sp. YU100 isolated from Korean soil, the fermentative production of phospholipase D was attempted along with its purification and characterization studies. When different carbon and nitrogen sources were supplemented in the culture medium, glucose and yeast extract were found to be the best. By varying the concentration of nutrients and calcium carbonate, the optimal culture medium was determined as 2.0% glucose, 1.5% yeast extract, 0.5% tryptone 0.3% calcium carbonate. During cultivation, the strain secreted most of the phospholipase D in the early stage of growth within 24 h. The phospholipase D produced in the culture broth exhibited hydrolytic activity as well as transphosphatidylation activity on lecithin (phosphatidylcholine). In particular, the culture broth showed 8.7 units/ml of hydrolytic activity when cultivated at $28^{\circ}C$ for 1.5 days. The phospholipase D was purified using 80% ammonium sulfate precipitation and DEAE-Sepharose CL-6B column chromatography, which produced a major band of 57 kDa on a 10% SDS-polyacrylamide gel with purity higher than 80%. The enzyme showed an optimal pH of 7 in hydrolytic reaction, and at pH 4 in a transphosphatidylation reaction. The enzyme activity increased until the reaction temperature was elevated to $60^{\circ}C$. The enzyme was relatively stable at high temperatures and neutral pH, but significantly unstable in the alkaline range. Among the detergents tested as emulsifiers of phospholipids, the highest enzyme activity was observed when 1.5% Triton X-100 was employed. However, no inhibitory effect by metal ions was detected. Under optimized reaction conditions, the purified enzyme not only completely decomposed PC to phosphatidic acid within 1 h, but also exhibited higher than 80% conversion rate of PC to PS by transphosphatidylation within 4 h.
본 연구는 산머루를 이용한 과실주의 발효시 원료 등에서 기인한 강한 산미에 의한 과실주의 품질을 저하시키는 것을 개선시키기 위하여 혼합균주의 접종에 의한 알코올 발효 과정중 다양한 혼합배양 조건으로 감산발효를 시도하였다. 산머루 알코올 발효균주로 사용된 Saccharomyces sp. SMR-3 배양구에 Schizosaccharomyces pombe와 Schizosaccharomyces japonicus를 각각의 감산발효균주로 접종 후 혼합배양 한 결과, 산머루 알코올 발효균주 Saccharomyces sp. SMR-3에 Schizosaccharomyces pombe를 $22^{\circ}C$, 12일간 혼합 배양한 처리구가 알코올 함량 $15.8{\pm}0.2%$로 최대였고, 산도 $0.44{\pm}0.02%$, 총 유기산 함량 $648.96{\pm}7.14mg%$ , malic acid $99.30{\pm}1.24mg%$ 로 가장 낮게 나타나, 알코올 발효균주 단독으로 배양한 처리구 보다 알코올 함량은 2% 이상 높았고, 산도는 51.65%, 총 유기산은 48.02% 및 malic acid는 81.12%의 감소 효과를 나타내어 최적의 감산발효 조건으로 나타났다.
하늘타리 (Trichosanthes kirilowii)로부터 조직배양 기법을 이용하여 약리작용을 나타내는 생리활성물질인 trichosantin을 생산하기 위한 연구로 Agrobacterium rhizogenes ATCC15834 의 감염을 통하여 기내 배양된 유묘의 잎절편으로부터 형질전환 모상근을 유도하였다. 유도된 모상근 clones으로부터 성장속도와 분지화 정도가 빠르며 단백질 합성능이 가장 우수한 TR-03 clones을 선발하였으며, 이를 사용하여 생체량과 배지내 가용성 단백질의 생산을 최대로 높일 수 있는 최적 배양조건을 조사하였다. TR-03 clone을 4% sucrose가 첨가된 MS 배지에 초기 접종농도 2 g (생중량)을 접종하여 100 rpm으로 배양시 생중량과 배지내 가용성 총단백질의 함량이 플라스크당 약 2.4 g (건중량)과 $28.3ug/\ell$으로 최대치를 나타내었다. 한편, 배지내 가용성 단백질에 대한 RIP활성 검정에서 배양 4주 후 21.3 unit로 최대치를 보였다.
패류 인공종자생산에서 모패관리의 중요성이 커져가고 있으며 최적의 모패 관리 조건과 원하는 시기에 종자생산을 할 수 있는 성숙유도 조건을 구명하는 하는 것이 매우 중요하기 때문에 본 연구에서는 왕우럭 조개의 모패관리 최적조건과 성숙 촉진을 위한 가온 효과를 조사하였다. 모패관리는 실내사육에 비하여 실외사육이 비만도와 생존율 측면에서 더 효과적인 것으로 나타났으며 관리 측면에서도 인위적인 먹이생물 공급이 없으며 자연환경 조건에서 사육하기 때문에 관리가 수월하다는 장점이 있는 것으로 나타났다. 그리고 동계가온을 통한 성숙촉진 유도는 비만도와 생식소 관찰 등을 통하여 수온 18℃ 이상에서 2개월 정도 사육하였을 경우 성성숙이 이루어지는 것으로 나타나 성숙관리가 다른 패류에 비해 용이하다는 것을 알 수 있었다.
This study was conducted to investigate the production, elver stocking, rearing facilities and rearing method of eel culture to determine aquaculture management conditions for optimal rearing of eel Anguilla japonica. The production of eel culture was evaluated by the proportion of eels from the main inland fin fish species production in Korea. Elver stocking was assessed by the elver stocking densities of pond and recirculation culture. Rearing facilities were investigated according to the rearing tank size proportion of the pond and recirculation culture. We selected sample farms by region and by size. We visited sample farms and recorded the number of elvers stock for pond area, size of tanks, feed and feed quantity, and the size and number of harvest eels. The production capacity of Jeollanam-do and Jeollabuk-do were 71.9% and 21.3% respectively. This production quantity represented 93.2% of the total Korean eel production quantity. In Jeollanam-do, there are 236 eel farms, 202 pond farms, and 34 recirculation aquaculture facilities. The elvers' first density data by each aquaculture method revealed that elvers' first density varied more in recirculation system farms, as compared to pond aquaculture. In intensive pond farms, the elvers' first density decreased as the size of farm increased. There was a correlation between the size of tank(x) and the facility of a water wheel for dissolved oxygen in pond culture systems(y=0.022x-0.494; $R^2$=0.860). Another strong correlation was found between the weight of eel(x) and eel density(y) in pond culture systems(y=283.5x-0.27; $R^2$=0.992). Finally, there was a strong correlation between the length of eel(x) and the weight of eel(y) in intensive pond culture(y=0.0005x-3.2783; $R^2$=0.9775). The final survival rate did not differ significantly among pond sizes and culture types.
Spermatogonial stem cells(SSCs) only are responsible for the generation of progeny and for the transmission of genetic information to the next generation in male. Other in vitro studies have cultured SSCs for proliferation, differentiation, and genetic modification in mouse and rat. Currently, information regarding in vitro culture of porcine Germline Stem Cell(GSC) such as gonocyte or SSC is limited and is in need of further studies. Therefore, in this study, we report development of a successful culture system for gonocytes of neonatal porcine testes. Testis cells were extracted from $10{\sim}14$-day-old pigs. These cells were harvested using enzymatic digestion, and the harvested cells were purified with combination of percoll, laminin, and gelatin selection techniques. The most effective culture system of porcine gonocytes was established through trial experiments which made a comparison between different feeder cells, medium, serum concentrations, temperatures, and $O_2$ tensions. Taken together, the optimal condition was established using C166 or Mouse Embryonic Fibroblast(MEF) feeder cell, Rat Serum Free Medium(RSFM), 0% serum concentration, $37^{\circ}C$ temperature, and $O_2$ 20% tension. Although we discovered the optimal culture condition for proliferation of porcine gonocytes, the gonocyte colonies ceased to expand after one month. These results suggest inadequate acquirement of ingredients essential for long term culture of porcine GSCs. Consequently, further study should be conducted to establish a successful long-term culture system for porcine GSCs by introducing various growth factors or nutrients.
신선한 생동충하초를 소규모 용기에서 재배, 유통할 수 있는 기술개발에 대한 수요가 급증함에 따라, 소규모 재배상인 미니키트를 선발하고 장기간 보존 및 유통기간을 연장할 수 있는 최적 재배 조건을 구명하였다. 미니키트는 몸체가 투명한 PET, 뚜껑은 PP 재질로 구성되며 350 ml 용량으로 높이 ($H:82mm{\times}W:75mm$) 용량의 밀폐형으로 구성되며 단위 당 투입 감염 번데기 수는 15~20개체 재배가 적합하였다. 미니키트 내 동충하초 생산은 총 53일이 소요되며 키트 내에서 자실체 생장기간은 15일이었으며, 배양은 온도 $22^{\circ}C$ 하에서 생산성이 가장 우수하였다. 미니키트 동충하초의 저장력은 냉장처리 14일까지 신선도를 90%로 유지하였다. 현재까지 농가 및 소비자로부터 동충하초의 소량확보 및 생동충하초의 유통에 관한 요구가 늘어나고 있는 추세이다. 이러한 현실에 맞게 미니키트 동충하초는 생초로 유통하는 것이 주요 특징으로 밀폐용기를 적용함으로써 오염방지 및 위생적 관리가 가능하며 동결건조 공정이 생략됨으로써 공정을 줄이는 장점이 있다. 따라서 미니키트는 일반소비자로부터 생동충하초의 확보가 용이하게 되어, 식품소재로 널리 활용할 수 있을 것으로 예상된다.
본 연구는 담수환경에서 항균활성을 보유한 미생물을 발굴하고, 활성 증진을 위해 배양조건을 최적화하는 것이다. 상주시 중동면 오상저수지에서 시료를 채취하여 38종의 미생물을 순수분리하였다. 16S rRNA 염기서열 분석에 근거하여 Proteobacteria강(22종), Actinobacteria강(7종), Bacteroidetes강(6종), Firmicutes강(3종)으로 구성되어있는 것을 확인하였다. 메티실린내성 황색포도상구군 등 10종의 유해미생물에 대한 항균활성을 보유한 Burkholderia sp. OS17 균주를 선발하였다. 항균활성 증진을 위한 상용배지, 온도, 초기 pH별 생육 및 항균활성 비교실험을 수행하였다. OS17 균주는 YPD 배지, $35^{\circ}C$, pH 6.5로 배양했을 때 가장 활성이 높았다. LB, NB, TSB, R2A 배지와 $20^{\circ}C$, $25^{\circ}C$ 배양했을 때는 생장은 가능하나 항균활성이 전혀 없었다. 이전결과를 바탕으로 YPD 배지, $35^{\circ}C$에서 배양하면서 5 L fermenter를 이용하여 생육, 항균활성, pH 확인을 통해 배양 48시간을 최적 배양시간으로 선정하였다. 항균활성을 보유한 미생물의 배양 최적화는 항균물질 생산에 영향을 미치고, 이는 상업적 응용에 이점으로 작용할 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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