Bacterial biofilms have been demonstrated to be closely related to clinical infections and contribute to drug resistance. Berberine, which is the main component of Coptis chinensis, has been reported to have efficient antibacterial activity. This study aimed to investigate the potential effect of a combination of berberine with ciprofloxacin (CIP) to inhibit Salmonella biofilm formation and its effect on expressions of related genes (rpoE, luxS, and ompR). The fractional inhibitory concentration (FIC) index of the combination of berberine with CIP is 0.75 showing a synergistic antibacterial effect. The biofilm's adhesion rate and growth curve showed that the multi-resistant Salmonella strain had the potential to form a biofilm relative to that of strain CVCC528, and the antibiofilm effects were in a dose-dependent manner. Biofilm microstructures were rarely observed at $1/2{\times}MIC/FIC$ concentrations (MIC, minimal inhibition concentration), and the combination had a stronger antibiofilm effect than each of the antimicrobial agents used alone at $1/4{\times}FIC$ concentration. LuxS, rpoE, and ompR mRNA expressions were significantly repressed (p< 0.01) at $1/2{\times}MIC/FIC$ concentrations, and the berberine and CIP combination repressed mRNA expressions more strongly at the $1/4{\times}FIC$ concentration. The results indicate that the combination of berberine and CIP has a synergistic effect and is effective in inhibiting Salmonella biofilm formation via repression of luxS, rpoE, and ompR mRNA expressions.
Vibrio anguillarum is a gram-negative bacterium that causes vibriosis in approximately 80 different fish species. V. anguillarum produces several exotoxins are correlated with the pathogenesis of vibriosis. This study is focused on the composition of the outer membrane vesicle. Most of gram-negative bacteria produce outer membrane vesicle (OMV) during cell growth. OMV was formed from the outer membrane surface of cell and than released to extracellular environment. OMV consists of outer membrane lipids, outer membrane protein (OMP), LPS, and soluble periplasmic components. Also, they contain toxins, adhesions, and immunomodulatory. Many gram-negative bacteria were studied out forming OMV. In Vibrio sp., formation of OMV by electron microscopy has been reported from V. cholerae and V. parahaemolyticus. In present study, we isolated OMV from V. anguillarum and OMV protein was separated by SDS-PAGE. Magor band was sliced and analyzed by MALDI-TOF. The major protein band of 38kDa was identified as OmpU by MALDI-TOF MS analysis.
We propose a two-dimensional (2D) scattering-center-extraction (SCE) method using sparse recovery based on the compressive-sensing theory, even with data missing from the received radar cross-section (RCS) dataset. First, using the proposed method, we generate a 2D grid via adaptive discretization that has a considerably smaller size than a fully sampled fine grid. Subsequently, the coarse estimation of 2D scattering centers is performed using both the method of iteratively reweighted least square and a general peak-finding algorithm. Finally, the fine estimation of 2D scattering centers is performed using the orthogonal matching pursuit (OMP) procedure from an adaptively sampled Fourier dictionary. The measured RCS data, as well as simulation data using the point-scatterer model, are used to evaluate the 2D SCE accuracy of the proposed method. The results indicate that the proposed method can achieve higher SCE accuracy for an incomplete RCS dataset with missing data than that achieved by the conventional OMP, basis pursuit, smoothed L0, and existing discrete spectral estimation techniques.
Cho, Youngjae;Park, Soyeon;Barate, Abhijit Kashinath;Truong, Quang Lam;Han, Jang Hyuck;Jung, Cheong-Hwan;Yoon, Jang Won;Cho, Seongbeom;Hahn, Tae-Wook
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.25
no.2
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pp.288-295
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2015
Salmonella enterica serovar Enteritidis is the predominant agent causing salmonellosis in chickens and other domestic animals. In an attempt to identify antigenic S. Enteritidis outer membrane proteins (OMPs) that may be useful for subunit vaccine development, we established a proteomic map and database of antigenic S. Enteritidis OMPs. In total, 351 and 301 spots respectively from S. Enteritidis strain 270 and strain 350 were detected by two-dimensional gel electrophoresis. Fifty-one antigen-reactive spots were detected by antisera on two-dimensional immunoblots and identified as 12 specific proteins by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. OmpA and DNA starvation/stationary phase protection protein (Dps) were the most abundant proteins among the identified OMPs, comprising 22 and 12 protein species, respectively. Interestingly, we found that the Dps of S. Enteritidis is also antigenic. OmpW was also verified to have high antigenicity. These results show that OmpA, Dps, and possibly OmpW are antigenic proteins. This study provides new insights into our understanding of the immunogenic characteristics of S. Enteritidis OMPs.
Ha, Jung-Hye;Jeong, Mi-Suk;Jo, Wol-Soon;Jeong, Min-Ho;Jang, Se-Bok
Bulletin of the Korean Chemical Society
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v.31
no.2
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pp.275-280
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2010
Actinobacillus actinomycetemcomitans is a gram-negative, nonmotile coccobacillus bacterium that is associated with several human diseases, including endocarditis, meningitis, osteomyelitis, subcutaneous abscesses and periodontal diseases. A full-length Omp1-like protein gene from A. actinomycetemcomitans was cloned into a pQE30 vector and overexpressed in Escherichia coli BL21(DE3) cells. The protein revealed sequence homologies to Seventeen kilodalton proteins (Skp) from Pasteurella multocida and E. coli that have been characterized as periplasmic chaperones. This soluble Omp1-like protein was successfully purified to homogeneity for further folding and functional studies. The purity, identity, and conformation of the protein were determined using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry, circular dichroism, fluorescence spectroscopic, and differential scanning calorimetric studies. We showed that the protein formed an oligomer larger than a tetramer. We found, further, that it is comprised of mostly $\alpha$-helices and boasts high thermal stability.
Canine brucellosis produce abortions and infertility in dogs and is currently diagnosed by serological methods such as rapid slide agglutination test with 2-mercaptoethanol (2-ME RSAT) and immunochromatographic assay (ICA). Bacterial isolation is considered gold standard for Brucella diagnosis and the polymerase chain reaction (PCR) is an alternative method to bacterial isolation. A total of 36 whole blood samples were collected from dogs reared in area of Chuncheon and were subjected to serology (2-ME RSAT and ICA for B. canis, Rose Bengal test and C-ELISA for B. abortus), blood culture and 3 types of PCRs (BSCP31, 16s rRNA, and OMP-2). All blood samples were negative by serology and blood cultures. The BCSP31 and the OMP-2 PCR detected 5 samples were positive whereas the 16S rRNA PCR detected all samples were negative as serological methods and blood culture did. From the results observed in the present study, we conclude that 16S rRNA PCR could be used for direct PCR for canine blood samples.
Identification of salmonellosis-infected commercial poultry flocks has become a pivotal component of efforts to reduce incidence of egg-associated transmission of S. enteritidis and S. typhimurium to humans. As a basic study for sanitary control of S. enteritidis and S. typhimurium, main food-borne pathogenic bacteria in eggs produced by domestic hens, commercial egg samples were tested for specific antibodies to whole cells of S. enteritidis and S. typhimurium and outer membrane protein(OMP) of S. typhimurium by ELISA to detect infection of S. enteritidis and S. typhimurium in various groups of hens. When the antibody titers of yolks from three commercial brand eggs were tested after diluting in the ratio from 1:100 to 1:1,600 with double dilution method, ELISA values of the specific antibodies could be shown as differences in dilution patterns by comparing with negative control egg. When the antibody titers of the yolks from two commercial brand eggs were tested after diluting in the ratio of 1:200 and 1:1,000, ELISA values of specific antibodies were different among same brand eggs. When the antibody titers of yolks from five eggs sampled randomly from twenty one commercial brand eggs were tested after diluting in the ratio of 1:1,000, ELISA value of the specific antibodies were shown generally high. ELISA values of 28.5, 30, and 28.5% of yolks from 21 brand eggs were shown low and similar to negative control egg in antibody titers to whole cells of S. enteritidis and S. typhimurium and OMP of S. typhimurium, respectively. The results demonstrated that ELISA test of egg yolk antibody could provide a highly sensitive indicator to detect contamination of S. typhimurium and S. enteritidis in poultry, and could be used effectively to reduce incidence of S. typhimurium and S. enteritidis infection in poultry.
The study was performed to investigate the distributions of swine pleuropneumonia in Kyongbuk western area by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Sera collected from 400 slaughtered pigs in 3 slaughter houses during the period from May 1999 to october 1999 were tested to detect antibodies against A pleuropneumonie serotype 2 and 5. The optimal dilution of CBE antigen, conjugate and serum for this ELISA were determined 1 : 400, 1 : 20,000, 1 100, respectively. The optimal dilution of OW antigen, conjugate and serum for this ELISA were determined 1 : In, 1 : 20,000, 1 : 200, respectively. Cut-off value in this ELISA was determined by mean absorbance (at 492 nm) of negative control sera added with the triple value of the standard deviation. Cut-off value in ELISA by CBE and OMP antigen were 1.134 and 1.217, respectively. By the ELISA, positive reaction rates to A pleuropneumoniae serotype 2 and 5 for CBE antigen were 38.8% and 18.8%, and for OMP antigen were 42.8% and 23.5% of the 400 samples, respectively.
Two-component system (TCS)-based bacterial zinc and copper biosensors, in which green fluorescent protein (GFP) is expressed under the control of zraP and cusC promoter in ZraS/R and CusS/R TCS, were evaluated in artificial wastewater. Bacterial biosensors developed in this study efficiently expressed GFP by the recognition of $Zn^{2+}$ and $Cu^{2+}$ in artificial wastewater. Secondly, TCS-based zinc and copper removing bacteria with the peptide displayed on cell surface were examined in artificial wastewater. Zinc and copper removing bacteria expressed the peptide as a fusion protein such as OmpC-ZBP (zinc binding peptide) and OmpC-CBP (copper binding peptide) on the cell surface when sensing exogenous $Zn^{2+}$ and $Cu^{2+}$ through ZraS/R and CusS/R TCS. The recombinant cell expressing metal-adsorbing peptide could efficiently remove copper and zinc (15 and 18 mg/g dry cell weight, respectively) in artificial wastewater. Therefore, it was demonstrated that the TCS-based recombinant cell for the recognition or removal of heavy metal functions well in artificial wastewater environment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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