A method for the determination of noboviocin in milk was presented by high performance liquid chromatography(HPLC). The novobiocin in the spiked sample was extracted with methanol and evaporated under vacuum. After evaporating, the residue was mixed with distilled water for 2$m\ell$, filtrates with 0.45$\mu\textrm{m}$ acrodisc was injected into HPLC. The results obtained were as follows ; 1. The calibration curve of novobiocin was showed constantly linear(r 0.999) in the range of 100~500ng/$m\ell$. 2. The mean recovery rate of novobiocin from the spiked milk sample were 88~98%. 3. The coefficients of variation were 2.6~5.8% 4. The lowest detectable limit of novobiocin was 25ppb.
Leuconostocs는 김치를 비롯한 침채류의 발효에 중요한 세균이나 phenylethyl alcohol이나 vancomycin을 첨가하는 기존의 분리방법은 leuconostocs만을 순수분리할 수 없었을 뿐 아니라 가격이 비싼 것이 단점이었다. 여러가지 식품시료로부터 leuconostocs균주를 저렴하고도 효과적으로 분리할 수 있는 선택배지를 개발하기 위하여 모두 17균주의 leuconostocs와 lactobacilli에 대한 항생제 내성을 소사한 결과 leuconostocs의 novobiocin에 대한 MIC가 lactovacoilli에 비해 5배 이상 높은 것으로 나타났다. 이러한 결과를 기초로 하여 novobiocin이 첨가된 leuconotocs의 선택배지를 조제한 바 그 조성은 다음과 같다. 1% Tryptone (Dofco), 0.1% Yeast Extract (Difco), 2% sucrose, 0.1% Beef Extract (BBL), 0.5% sodium acetate, 0.2% ammonium sulfatc. 0.01% magnesium sulfate, 0.2% dipotassium phosphate, 0.05% sorbic acid, 75 ppm sodium azide (Sigma), 0.1% (vol/vol) Tween 80, 30 ${\mu}g/ml$ Vancomycin (Sigma), $5{\mu}g/ml$ Novobiocin (Sigma), $0.5{\mu}g/ml$ cysteine HCI, 1.5% Agar (Difco). 이 leuconostocs의 선택배지를 이용하여 여러가지 종류의 김치, 원유, cheese에서 총 86균주의 미생들을 분리하였다. 분석된 균들은 몇 가지 biochemical test를 통하여 동정한 결과 모두 Leuconostocs 속으로 확인되었으나 Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris와 Leuconostoc lactis는 검출할 수 없었다. 특히 이 배지는 분리 효율성이 MRS 배지에 비해 상대적으로 낮으므로 계수용 배지보다는 순수분리용 선택배비로의 이용이 적합하다 판단되었다.
재생쥐간에서 분리한 topoisomerase II에서 protein kinase 활성이 발견되었다. ,topo II 활성 및 kinase 활성은 hydroxyapatite, phosphocellulose, double strand DNA cellulose chromatography 등의 순수 분리 과정 중에도 서로 분리되지 않았으며 glycerol gradient sedimentation 분석에서도 같은 분획에서 활성이 존재하였다. Kinase는 topo II 저해제인 N-ethylmaleimide와 novobiocin 등에 의해 그 활성이 저해되었다. 그러나 이러한 증거들 만으로 kinase 활성이 topo II가 아닌 다른 polypeptide에 의한 것일 가능성을 완전히 배제 할 수는 없다. Topo II와 결합된 kinase 활성에는 Mg++가 절대적으로 필요하였으며 다른 일가 또는 이가 이온으로는 그 효과가 대체되지 않았다. Histone H1은 kinase 활성을 증가 시키며 또 kinase에 의해 강하게 인산화된다. 이러한 효과는 다른 histone 류 및 casein 등에 의해 대체되지 않았다.
노보비오신은 동물용의약품 중 약산성 항생제이며, 우리나라의 경우 선진국에 비해 항생제의 사용이 높은 만큼 동물용의약품의 잔류 사례는 계속해서 증가하고 있다. 이에 따라 식품 중 잔류동물용의약품의 안전관리를 위해 축산 식품 중 닭고기, 소고기 및 우유에서 노보비오신에 대한 HPLC-UVD를 이용한 잔류 분석법을 확립하였다. 각 시료 일정량에 메탄올을 가하고 균질화하여 대상 성분을 추출하고 액-액분배법으로 지방성분을 제거한다. 대상성분이 추출된 여액을 실리카 카트리지를 이용하여 정제한 다음 HPLC-UVD로 분석하였다. 확립된 시험법의 정량한계와 직선성은 CODEX 기준에 적합한 수준으로 각각 0.02 mg/kg과 0.999 ($r^2$)이었으며 회수율은 닭고기, 소고기 및 우유에서 각각 $88.8{\pm}5.6-100.3{\pm}4.4$, $88.8{\pm}7.2-97.0{\pm}3.2$ 및 $88.1{\pm}4.3-92.8{\pm}3.6%$이었다. 본 연구에서 확립된 노보비오신의 시험법은 동물용의약품의 안전관리를 위한 공정시험법으로 활용될 것으로 기대된다.
최근 7월부터 9월사이 고수온기에 경남일대의 육상수조식 넙치양식장에서 8균주의 Staphylococcus epidermidis를 분리하여 이들의 생물학적 및 생화학적 특성을 알아보았다. 분리균주는 BHIA, HIA, Staphylococcus No. 110 및 ETGP에서 잘 발육하였으며, 식염농도 2.0~3.0%, $30^{\circ}C$ 전후 그리고 pH는 7.0 전후에서 발육상태가 좋았다. 또한 DNase, coagulase에는 전 균주가 음성이었으며, 용혈성은 FSJ-2균주만이 약한 음성을 나타내었고, ureas 양성, novobiocin 저항성에는 음성을 나타내었다. 탄수화물의 분해능에서 전 균주는 가스를 생산하지 않았고 혐기적 조건하에서 포도당과 maltose를 분해하였으며 mannitol은 FSJ-19균주만이 약하게 분해한 것을 제외하고는 전 균주가 음성이었다. 호기적 조건하에서 전 균주는 포도당, fructose, galactose, sucrose, maltose 및 dextrin을 분해하였다. 분리균주의 임상적인 주요 특성에서 8개의 균주는 4가지의 다른 biotype code를 나타내었으며, 약제 감수성 그룹에서도 4가지의 다른 패턴을 나타내었다. 이상의 결과는 Bergey's manual of systematic bacteriology에 기재된 S. epidermidis의 coagulase, urease, DNase, $\beta$-galactosidase, novobiocin 저항성 및 포도당의 혐기적 분해성과 잘 일치하였고, 또한 Mickelsen et al.(1985)이 기재한 biotype과 약재 감수성 패턴이 잘 일치하여 본 분리균을 S. epidermidis로 동정하였다.
양식넙치에서 분리된 Edwardsiella tarda가 갖는 약제내성을 전달하는 R plasmid의 특성을 알아보기 위하여, 16종의 화학요법제에 대한 E. tarda의 감수성 정도를 비교하였으며, 내성형태 및 내성전달을 확인하고 transferable R plasmid를 분리하였다. E. tarda는 ampicillin, amoxicillin, erythromycin, flumequine, doxycycline(DOXY), nalidixic acid, novobiocin, oxolinic acid, oxytetracycline(OTC), thiamphenicol(TP) 그리고 sulfonamide의 11약제에 대하여 다양한 조합으로 복합내성을 보였으며, DOXY, OTC, TP 내성이 Escherichia coli로 전달되었다. 복합내성의 두 균주에서 transconjugant가 형성되었으며 이들로부터 분리된 transferable R plasmid는 서로 상이한 DNA 구조였다. 이는 넙치에서 분리되는 E. tarda에는 적어도 두 종류 이상의 thansferable R plasmid가 분포한다는 것을 의미한다.
The effect of novobiocin (NOV), and inhibitor of topoisomerase II, on ethyl methanesulfonate (EMS)-or bleomycin (BLM)-induced DNA repair synthesis was examined during the cell cycle of Chinese hamster ovary (CHO)-K1 cells. Three assays were employed in this study: cell survival, alkaline elution and unscheduled DNA synthesis. EMS was effective at killing CHO cells in G1 phase, wheras BLM preferentially killed cells in G2 and S phases. EMS induced the much more amount of DNA damage in G1 phase, while BLM induced in G2 phase than the other phases. The both of pre- and post-treatment with BOV inhibitied EMS- or BLM-induced DNA repair synthesis in G1 and G2 phases, and pretreatment with NOV inhibited more effectively than the post-treated group. These results suggested that CHO cells exhibited a differential sensitivity to cell lethality and DNA damage in relation to cell cycle according to used chemical agents, and that DNA topoisomerase II participated in an initial stage of DNA repair.
In our previous studies, we have cloned and characterized a gene region from Bradyrhizobium japonicum ,which is involved in the synthesis of lipopolysaccharide (LPS). In this study, we have expanded the sequence analysis of the region and found an additional open reading frame (orf), which appeared to be divergently transcribed from the rfaF gene. Sequence alignment of the orf revealed a significant similarity with rfaD genes of Salmonella typhimurium , Escherichia coli, and Neisseria gonorrhoeae. These genes encode a heptose-6-epimerase, which catalyzes the interconversion of ADP -D -glycerol-D-manno-heptose to ADP-L-glycero-D-manno-heptose. This divergent organization of the rfaF and rfaD genes is different from that of other Gram-negative bacteria where two genes form an operon. A rfaD- mutant of E. coli was successfully transformed with plasmid constructs containing the rfaD gene of B. japonicum. Novobiocin sensitivity test showed that the rfaD gene from B. japonicum could complement the rfaD mutation in E. coli, which confirms the functionality of the cloned B. japonicum gene.
Pak, Son-il;Hwang, Cheol-yong;Youn, Hwa-young;Han, Hong-ryul
대한수의학회지
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제39권2호
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pp.376-382
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1999
A methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolate was recovered from a 9-month-old female Shih-Tzu dog with canine distemper virus infection. We performed in vitro antimicrobial susceptibility test to determine the most effective antimicrobial drug against the isolate and thus, to emphasize its potential clinical importance in animal practices. Isolate was confirmed MRSA by oxacillin agar screening test. The isolate was fully resistant to all $\beta$-lactam antibiotics and was susceptible to glycopeptides. Of the other antibiotics, mupirocin, TMP/SMZ (trimethoprim-sulfamethoxazole), and chloramphenicol showed inhibitory effect at the concentration of 4x MIC. The MICs ranged 0.25->$128{\mu}g/ml$, and MBCs ranged 0.5->$128{\mu}g/ml$. The combined TMP/SMZ with cefamandole or novobiocin showed synergistic effect, whereas the combination of novobiocin plus cefamandole or teicoplanin resulted in antagonistic effects. Although MRSA in animals so far has been reported in the geographically limited countries, at least theoretically, it could be occurred in the future more frequently through either human or animal origin. The use of this combination may be of value in this situation. As with all antimicrobial agents, inappropriate or unnecessarily prolonged therapy may contribute to the emergence of resistance strains and loss of efficacy.
Streptococcus faecalis var. liquefaciens에서 plasmid DNA를 분석한 결과, 4개의 plasmid를 가지고 있었으며, 각각의 대략적인 분자량은 6.8M-dal, 5.2Mdal, 2.6Mdal, 2.1Mdal로 측정되었다. 이 균주를 novobiocin으로 처리하여, 각각 다른 2개의 plasmid가 소실된 2개의 변이주를 얻었다. 이들 균주는 당발효성, 온도감수성, gelatin 용해성, 단백질응고성은 wild type과 동일하였으나 이중 한 균주가 lincomycin과 erythromycin에 대한 감수성을 나타내었다. 따라서 본 실험에서 검출한 4개의 plasmid는 당발효성 등의 특성과는 관련이 없는 것으로 추정할 수 있으며, pSK₂와 pSK₄의 두 plasmid 중 하나는 항생물질 저항성에 관련된 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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