Adefovir dipivoxil which was originally developed by Gilead Sciences has been used as treatments of HIV and HBV, especially a therapeutics for HBeAg positive and negative chronic patients. We developed highly efficient purification method using reverse phase column chromatography for mass production and a stable amorphous Adefovir dipivoxil using solid dispersion method. Reverse phase column chromatography led to highly pure product, more than 99.7% by HPLC and can be used for mass production compared with normal column chromatography. Solid dispersion method containing watersoluble polymer and Isomalt showed improved stability of amorphous Adefovir dipivoxil against heat and moisture.
최근 sucrose polyesters(SPE)와 더불어 유지대체 물질로서의 사용이 검토되고 있는 glucitol fatty acid polyesters(GPE)를 합성한 후, 화학적 구조 및 상대적 에스테르 분포에 따른 치환도를 조사하였다. 본 연구에서 합성한 GPE는 순상 HPLC에 의해 단일 에스테르 그룹으로 분리되었으며, 분리된 에스테르 그룹의 치환도는 6으로서 GPE 전체가 glucitol fatty acid hexaester임을 알 수 있었다. GPE의 IR 스펙트럼에서 $1747\;cm^{-1}$에 나타나는 흡수대는 GPE 분자내에 glucitol과 지방산을 연결하고 있는 에스테르 결합이 존재함을 보여주었다. GPE는 H-NMR 스펙트럼에서는 glucitol의 hydroxyl proton의 시그널이 존재하지 않음을 볼 때 glucitol의 모든 수산기가 지방산과의 에스테르 결합에 참여하고 있음을 알 수 있었다. 또한 GPE의 H-NHR 스펙트럼을 정량적으로 해석한 결과는 수산기가(hydroxyl value) 측정에 의해 결정된 GPE의 치환도와 일치하였다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 본 연구에서 합성한 GPE는 glucitol fatty acid hexaester임이 확인되었고 향후 유지대체물질로서 사용되어질 가능성을 지닌 것으로 생각되었다.
The purpose of stability testing is to provide evidence about how the quality of a drug varies with time under the influence of a variety of environmental factors. In this study, erythropoietin (EPO) was analyzed under different pH (pH 3 and pH 9) and temperature ($25^{\circ}C$ and $40^{\circ}C$) conditions according to current Good Manufacturing Practice (cGMP) and International Conference on Harmonisation (ICH) guidelines. The molecular weight difference between intact EPO and deglycosylated EPO was determined by SDS-PAGE, and aggregated forms of EPO under thermal stress and high-pH conditions were investigated by size exclusion chromatography. High pH and high temperature induced increases in dimer and high molecular weight aggregate forms of EPO. UPLC-ESI-TOF-MS was applied to analyze the changed modification sites on EPO. Further, normal-phase high-performance liquid chromatography was performed to identify proposed glycan structures and high pH anion exchange chromatography was carried out to investigate any change in carbohydrate composition. The results demonstrated that there were no changes in modification sites or the glycan structure under severe conditions; however, the number of dimers and aggregates increased at $40^{\circ}C$ and pH 9, respectively.
7개 재배지역산 참당귀의 decursin 함량변이를 조사하였으며, 각 재배지의 기상요인들과의 상관분석을 통하여 기상환경이 당귀 근의 decursin 함량에 미치는 영향을 파악하고자 수행된 실험결과는 다음과 같다. 1. 참당귀 근의 유효성분인 decursin과 decursinol angelate의 정량은 순상컬럼을 사용한 HPLC법이나 GC법이 양호하였다. 2. 참당귀 뿌리의 decursin 함량은 봉화산 4. 86%, 영천산 4.75%이며 수원산은 2.33%로 재배지역에 따른 함량변이가 비교적 컸다. 3. 생육기간별 각 기상요인들과 decursin 함량과의 상관분석 결과 통계적 유의상관은 보이지 않았으나, 평균기온과 강수량은 대체적으로 부의 상관을 보였으며 일교차, 일사량, 일조시수등은 정의 상관을 나타냈다.
팜유와 아보카도유를 이용하여 효소적 방법을 통해 trans free margarine stock(TFMS)을 제조하였다. 회분식 반응기(stirred batch type reactor)를 통한 본 반응은 sn-1,3 위치 특이성을 가진 lipozyme RM IM(from Rhizomucor miehei)을 사용하였다. 반응기질 대두극도경화유와 아보카도유 및 팜유는 30:150:120(g)의 비율로 230 rpm, $65^{\circ}C$에서 합성하였으며 이를 통해 이화학적 특성을 분석하였다. 재구성 지질의 DSC 분석 결과 TFMS의 solid fat content(SFC)는 $5^{\circ}C$에서 58.6%, $35^{\circ}C$에서의 약 8.5%로 확인 되었으며 7.3, 23.6, $35.3^{\circ}C$의 DSC 상의 melting point 특성을 나타내었다. TFMS는 C16:0(약 29%)과 C18:1(약 45%)이 주요 지방산으로 확인되었고 ${\Sigma}SFA$는 40.7%이었으며 trans 지방산은 검출되지 않았다. Sn-2 위치에는 주요적으로 C16:0(21.6%)과 C18:1(50.2%)의 지방산 조성이 확인되었다. RP-HPLC를 통해 TFMS를 이루고 있는 TAG의 PN을 확인 하였다. 주요적으로 PN=48이 대부분을 차지하였고 PN=46, PN=50으로 분리되었으며 TFMS의 반응 전과 비교 시 차별적인 TAG peak를 확인할 수 있었다. 한편, ${\alpha}-$, ${\gamma}-$ 및 ${\delta}$-tocopherol이 각각 5.7, 2.1, 1.7 mg/100 g을 나타냈으며 산가, 요오드가, 비누화가를 통해 TFMS의 이화학적 특성을 확인 할 수 있었다. TFMS를 통해 마가린 제조 시 물성 변화를 고려하여 마가린의 적합한 물성을 지닐 수 있을 것이라 사료된다.
한국고분자학회 2006년도 IUPAC International Symposium on Advanced Polymers for Emerging Technologies
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pp.202-202
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2006
With a modern size exclusion chromatography (SEC) column, molecular weight analysis of a polymer sample takes about 10 min. However, it is desirable to reduce the analysis time further, in particular, for high throughput measurements required in combinatorial analyses or 2D-HPLC analyses. We implemented the high temperature SEC for the purpose. By inserting a narrow bore tubing between the column and the detector, a sufficient backpressure can be maintained to prevent the mobile phase from boiling and the effluent is cooled down enough when it reaches the detector. Therefore, a normal SEC detector can be used without any modification. The SEC resolution is greatly improved at the elevated temperature at high flow rate which allows high speed operation.
Angiotensin converting enzyme (ACE) converts angiotensin I into angiotensin II by cleaving C-terminal dipeptide of angiotensin I and inactivates bradykinin. ACE inhibitors have been screened from various food sources since the inhibitors decrease blood pressure. Therefore, in this study, an ACE inhibitor was isolated and purified from squid ink using membrane filtration, gel permeation chromatography, normal phase HPLC, and fast protein liquid chromatography. The purified inhibitor was identified to be a molecular mass of 294 by mass spectrometry, and to have IC$\sub$50/ value of 4.9 $\mu\textrm{g}$/mL.
An angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory peptide was isolated and purified from the hydrolysates of duck meat protein. Duck meat protein was hydrolyzed using trypsin at 37$^{\circ}C$ for 2 hrs. An ACE inhibitory peptide was purified using membrane filtration, anion exchange chromatography, gel permeation chromatography, fast protein liquid chromatography, normal phase HPLC. The purified inhibitory peptide was identified to be a tetrapeptide, Glu-Asp-Leu-Glu having $IC_{50}$/ value of 85.9 $\mu$M.
Two major and two minor polyacetylenes were isolated from fresh white Korean ginseng roots. The petroleum ether-ethyl ether fractions containing the polyacetylene compounds were collected through solvent fractionation, partition and silica gel column chromatography. Further separation of polyacetylenic fractions was proceeded by bonded normal phase HPLC utilizing a moderately nonpolar microparticulate column. The low pressure liquid chromatography was used for the semi-preparative separation. The chemical structures of the two major polyacetylenes separated were determined by UV, IR, $^1H$ NMR, $^{13}C$ NMR, mass spectra and elemental analysis. One of them is identified to be heptadeca-1-en-4, 6-diyne-3, 9, 10-triol, a new structure, and the other is heptadeca-1, 9-dien-4, 6-diyn-3-ol, known as panaxynol.
Heme 합성의 중간체이며 또한 광수용체로도 작용하는 protoporphyrin IX의 세포 내 농도 및 성장 배지에 존재하는 농도가 야생형 M. xanthus DK1622 균주로부터 측정되었다. Protoporphyrin IX의 세포 내 농도는 배양 시간이 경과함에 따라 계속 증가하여, 안정기에 최고치에 이르는 것으로 나타났다 안정기에 도달한 세포 내에는 6.4 picomoles/mg of protein의 protoporphrin IX이 존재하는 것으로 밝혀졌다. Protoporphyrin IX은 대수기 중간 시기부터 세포외로 분비가 시작되어, 안정기에 도달한 세포의 배양액에서는 세포의 단백질 대비하여 3.0 picomoles/mg of protein이 존재하는 것으로 측정되었다. 영양분의 고갈에 기인하여 형성된 포자에서도 protoporphyrin IX의 농도는 6.5 picomoles/mg of protein이 존재하는 것으로 관찰되었다. Succinylacetone을 $500\muM$ 농도로 성장 배지에 첨가하였을 경우에 protoporphyrin IX의 생산은 검출이 불가능할 정도로 방해를 받았으며, 세포성장이 저해되고 세포 성장은 정상의 절반 수준인 약 100 Klett unit에서 정지하는 것으로 나타났다. 하지만 포자의 형성은 succinylacetone의 첨가에 관계없이 89-100%의 생성율을 보였음으로 정상 농도의 protoporphyrin IX가 M. xanthus의 성장을 위해서는 중요하지만, 포자 형성 과정에 필수적인 것으로 보이지는 않는다. 안정기 세포에서 나타나는 photolysis 현상도 succinylacetone의 첨가 여부에 관계없이 유사한 수준으로 관찰되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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