FcBP consisting of 13 amino acids specifically binds to Immunoglobulin G Fc domain. Initially, we utilized this peptide for preparation of antibody chip as a PEG composite for enhanced solubility. After then, the peptide conjugate was immobilized on agarose resin, resulting in highly efficient affinity column for antibody purification. The efficiency was comparable to commercial Protein A column. Recently, this peptide was conjugated with cell penetrating peptide (CPP) on a backbone of GFP, affording antibody transducer, which carries antibody into live cells by simple mixing of antibody and the transducer in cell culture media. Antibody transduction into cells was monitored by live cell imaging. More recently, the FcBP was fused to ferritin cage, which consists of 24 ferritin protein molecules. The FcBP-ferritin cage showed greatly increased binding affinity to human IgG. Its binding was analyzed by QCM and SPR analysis. Finally, it was selectively delivered by Herceptin to SKBR3, a breast cancer cell, over MCF10A, non-tumorigenic cells (Fig. 1). Fig. 1. Fluorescent microscopic images of SKBR3 breast cancer cells (A~C) and MCF10A breast cells (D~F) treated with Cy3-trastuzumab/fFcBP-Pf_Fn complexes. Trastuzumab and FcBP-Pf_Fn, which were labeled with Cy3 (Cy3-trastuzumab) and fluorescein (fFcBP-Pf_Fn), respectively, selectively targeted SKBR3 over MCF10A.
Objective: Based on rapid advancement of genetic modification techniques, genomic editing is expected to become the most efficient tool for improvement of economic traits in livestock as well as poultry. In this study, we examined and verified the nickase of mutated CRISPR-associated protein 9 (Cas9) to modulate the specific target gene in chicken DF1 cells. Methods: Chicken myostatin which inhibits muscle cell growth and differentiation during myogenesis was targeted to be deleted and mutated by the Cas9-D10A nickase. After co-transfection of the nickase expression vector with green fluorescent gene (GFP) gene and targeted multiplex guide RNAs (gRNAs), the GFP-positive cells were sorted out by fluorescence-activated cell sorting procedure. Results: Through the genotyping analysis of the knockout cells, the mutant induction efficiency was 100% in the targeted site. Number of the deleted nucleotides ranged from 2 to 39 nucleotide deletion. There was no phenotypic difference between regular cells and knockout cells. However, myostatin protein was not apparently detected in the knockout cells by Western blotting. Additionally, six off-target sites were predicted and analyzed but any non-specific mutation in the off-target sites was not observed. Conclusion: The knockout technical platform with the nickase and multiplex gRNAs can be efficiently and stablely applied to functional genomics study in poultry and finally adapted to generate the knockout poultry for agribio industry.
For audio indexing and targeted search of specific audio or corresponding visual contents, the MPEG-7 standard has adopted a sound classification framework, in which dimension-reduced Audio Spectrum Projection (ASP) features are used to train continuous hidden Markov models (HMMs) for classification of various sounds. The MPEG-7 employs Principal Component Analysis (PCA) or Independent Component Analysis (ICA) for the dimensional reduction. Other well-established techniques include Non-negative Matrix Factorization (NMF), Linear Discriminant Analysis (LDA) and Discrete Cosine Transformation (DCT). In this paper we compare the performance of different dimensional reduction methods with Gaussian mixture models (GMMs) and HMMs in the classifying video sound clips.
Objective: The study was conducted to screen differentially expressed miRNAs in sows at early pregnancy by high-throughput sequencing and explore its mechanism of action on embryo implantation. Methods: The blood serum of pregnant and non-pregnant Landrace×Yorkshire sows were collected 14 days after artificial insemination, and exosomal miRNAs were purified for high throughput miRNA sequencing. The expression patterns of 10 differentially expressed (DE) miRNAs were validated by quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (qRT-PCR). The qRT-PCR quantified the abundance of serum exosomal miR-192 in pregnant and control sows, and the diagnostic power was assessed by receiver operating characteristic (ROC) analysis. The target genes of DE miRNAs were predicted with bioinformatics software, and the functional and pathway enrichment analysis was performed on gene ontology and the Kyoto encyclopedia of genes and genomes terms. Furthermore, a luciferase reporter system was used to identify the target relation between miR-192 and integrin alpha 4 (ITGA4), a gene influencing embryo implantation in pigs. Finally, the expression levels of miRNAs and the target gene ITGA4 were analyzed by qRT-PCR, and western blot, with the proliferation of BeWo cells detected by cell counting kit-8 (CCK-8). Results: A total of 221 known miRNAs were detected in the libraries of the pregnant and non-pregnant sows, of which 55 were up-regulated and 67 were down-regulated in the pregnant individuals compared with the non-pregnant controls. From these, the expression patterns of 10 DE miRNAs were validated. The qRT-PCR analysis further confirmed a significantly higher expression of miR-192 in the serum exosomes extracted from pregnant sows, when compared to controls. The ROC analysis revealed that miR-192 provided excellent diagnostic accuracy for pregnancy (area under the ROC curve [AUC]=0.843; p>0.001). The dual-luciferase reporter assay indicated that miR-192 directly targeted ITGA4. The protein expression of ITGA4 was reduced in cells that overexpressed miR-192. Overexpression of miR-192 resulted in the decreased proliferation of BeWo cells and regulated the expression of cell cycle-related genes. Conclusion: Serum exosomal miR-192 could serve as a potential biomarker for early pregnancy in pigs. miR-192 targeted ITGA4 gene directly, and miR-192 can regulate cellular proliferation.
Park, Sehhoon;Lee, Chung;Ku, Bo Mi;Kim, Minjae;Park, Woong-Yang;Kim, Nayoung K.D.;Ahn, Myung-Ju
BMB Reports
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제54권7호
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pp.386-391
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2021
Owing to rapid advancements in NGS (next generation sequencing), genomic alteration is now considered an essential predictive biomarkers that impact the treatment decision in many cases of cancer. Among the various predictive biomarkers, tumor mutation burden (TMB) was identified by NGS and was considered to be useful in predicting a clinical response in cancer cases treated by immunotherapy. In this study, we directly compared the lab-developed-test (LDT) results by target sequencing panel, K-MASTER panel v3.0 and whole-exome sequencing (WES) to evaluate the concordance of TMB. As an initial step, the reference materials (n = 3) with known TMB status were used as an exploratory test. To validate and evaluate TMB, we used one hundred samples that were acquired from surgically resected tissues of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients. The TMB of each sample was tested by using both LDT and WES methods, which extracted the DNA from samples at the same time. In addition, we evaluated the impact of capture region, which might lead to different values of TMB; the evaluation of capture region was based on the size of NGS and target sequencing panels. In this pilot study, TMB was evaluated by LDT and WES by using duplicated reference samples; the results of TMB showed high concordance rate (R2 = 0.887). This was also reflected in clinical samples (n = 100), which showed R2 of 0.71. The difference between the coding sequence ratio (3.49%) and the ratio of mutations (4.8%) indicated that the LDT panel identified a relatively higher number of mutations. It was feasible to calculate TMB with LDT panel, which can be useful in clinical practice. Furthermore, a customized approach must be developed for calculating TMB, which differs according to cancer types and specific clinical settings.
In this study, we analyzed consumers' extra willingness-to-pay for the organic farmed laver, which recently is related to the increased interests in health. Survey questionnaires, which are targeted the urban consumers and based on the equivalent surplus concept, were intended to calculate extra willingness-to-pay for the organic farmed laver. Payment card format was used as the questionnaires type and tobit model was used for the analysis. Variables used for the analysis are sex, age, region, occupation, number in family and income. The results were that the consumers had extra willness-to-pay of 17.16% on average for the eco-friendly organic farmed laver. The higher the income and the more the family number, the customers had more extra willingness-to-pay.
Differential item functioning (DIF) based on Rasch model can be used to examine whether the items function similarly across different groups and identify items that appear to be too easy or difficult after controlling for the ability levels of the compared groups. The Oswestry low back pain disability (Oswestry) has traditionally been proved as an effective instrument measuring disability resulting from low back pain (LBP). In this study, DIF method was used to explore whether items on the Oswestry perform similarly across two different groups (participants with LBP and no LBP). A series of Rasch analyses on the 10 items of the Oswestry were performed using Winsteps$^{(R)}$ software. Forty-two participants with back pain were recruited from 3 rehabilitation hospitals in Gainesville, Florida. Another 42 participants with no LBP were recruited from several public places in the rehabilitation hospitals. Based on the DIF analysis across the two groups, several items were found to have an uniform DIF. Participants with no LBP had more difficulty on lifting and personal care items and participants with LBP had more difficulty on sleeping and social life items. For non-LBP group, a high ceiling effects (83% of participants with non-LBP) was detected, which was not be able to be effectively measured with the Oswestry items. Although 4 items of the Oswestry function differently across the two groups, all items of the Oswestry were well targeted the LBP group.
Manchikanti, Laxmaiah;Knezevic, Emilija;Knezevic, Nebojsa Nick;Sanapati, Mahendra R.;Kaye, Alan D.;Thota, Srinivasa;Hirsch, Joshua A.
The Korean Journal of Pain
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제34권3호
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pp.346-368
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2021
Background: Recalcitrant disc herniation may result in chronic lumbar radiculopathy or sciatica. Fluoroscopically directed epidural injections and other conservative modalities may provide inadequate improvement in some patients. In these cases, percutaneous neurolysis with targeted delivery of medications is often the next step in pain management. Methods: An evidence-based system of methodologic assessment, namely, the Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses (PRISMA) was used. Multiple databases were searched from 1966 to January 2021. Principles of the best evidence synthesis were incorporated into qualitative evidence synthesis. The primary outcome measure was the proportion of patients with significant pain relief and functional improvement (≥ 50%). Duration of relief was categorized as short-term (< 6 months) and long-term (≥ 6 months). Results: This assessment identified one high-quality randomized controlled trial (RCT) and 5 moderate-quality non-randomized studies with an application of percutaneous neurolysis in disc herniation. Overall, the results were positive, with level II evidence. Conclusions: Based on the present systematic review, with one RCT and 5 non-randomized studies, the evidence level is II for percutaneous neurolysis in managing lumbar disc herniation.
본 연구에서는 OO법인의 사례를 통해 OO법인의 경영성과와 방식을 검토한 후 그것을 가능하게 한 경쟁우위 및 성공요인들을 고찰하였으며, 본 연구의 진행을 위해 비영리 조직의 핵심역량으로 제시한 기업가정신과 진정성리더십 그리고 조직유효성에 관련된 문헌 및 선행연구를 검토한 후 대상 조직의 홈페이지와 신문기사를 통한 문서정보 자료를 확보하였고 마지막으로 대상 조직의 최고경영자와 인터뷰를 통해 연구에 필요한 데이터를 수집하였다. 이러한 과정과 분석을 통해 첫째 CEO의 기업가정신은 비영리 조직의 운영에 있어 핵심역량이 될 수 있으며, 둘째, CEO의 역할과 리더십은 비영리 조직의 운영에 있어 핵심역량이 될 수 있다는 명제를 도출하였다. 본 연구는 그동안 기업만을 대상으로 연구되어왔던 많은 이론들과 전략들이 비영리 조직의 연구에 적용 및 활용될 수 있다는 것을 시사하며, 또한 현대 기업경영에 있어, 비영리 조직의 특성인 사명감, 공정성, 윤리성 등의 전략적 접근을 통하여 지속가능한 경쟁우위 창출을 도모할 수 있을 것이다.
Purpose: This study aimed to elucidate the intention to use non-face-to-face treatment, which was temporarily allowed during the coronavirus disease 2019 pandemic. Based on the social cognitive theory, individual behavioral changes occur through the dynamic interaction of individual, environmental, and behavioral factors. Thus, we investigated the impact of personal, environmental, and behavioral factors on the acceptance of non-face-to-face treatment. Methods: A Web survey was conducted using Korea Research Panel between December 26 and 29, 2022, to examine the conceptual framework. The survey targeted adults aged 19 and older, regardless of whether they had used non-face-to-face treatment. A total of 502 responses were collected. Further, a three-step hierarchical regression analysis was conducted using SPSS Windows software version 25.0. Results: The study showed that 131 out of 502 respondents had experience using non-face-to-face treatment, while 371 did not. The factors that influenced the intention to accept non-face-to-face treatment included the general characteristics of the participants (women, underlying disease), personal factors (usefulness, cost savings, knowledge), and environmental factors (social norms, trust, perceived risk). The model demonstrated an explanatory power of 65%. Conclusion: The results of this study directly show that intention is linked to behavior through the interaction between personal and environmental factors. Further research is needed to explore additional factors influencing the intention to accept non-face-to-face treatment, enabling its effective use in preventing and treating various diseases, including infectious diseases.
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