Aspergillus niger에 있어서 여러가지 섬유질 기질이 세포내외의 섬유질 분해효소계의 생합성 및 동질효소의 양상에 미치는 영향을 조사하였다. Cellulase 및 xylanase 효소계의 생합성은 사용된 기질에 따라 큰 차이가 있었으며, 특히 cellulase 효소계의 CMCase와 ${\beta}-glucosidase$는 혼합기질의 사용시 효소활성이 증진되는 기질의 공조효과를 보였다. 또한 기질에 따라 섬유질분해효소계 동질효소의 생성 양상이 다르게 나타났으나 세포내외간 동질효소 양상의 차이는 발견되지 않았으며 배양시간에 따른 동질효소의 변화도 없었다. 이러한 결과들은 A. niger의 cellulase 및 xylanase효소계의 생합성은 기질에 의한 효소의 유도 수준에서 상호 연관적으로 조절되어짐을 보여주며, 세포외 효소에서 나타나는 multiple-isozyme의 형성이 합성되어진 효소의 post-secretional modification에 의한 결과라기 보다는 각각의 유전자 발현 결과에 의한 것임을 시사한다.
전보(前報)에서 검토한 효소생산 최적조건에서 생성하는 cellulase의 특성(特性)에 대한 실험(實驗)을 행(行)하여 다음의 결과(結果)를 얻었다. 1. 조정제시(粗精製時)에 $(NH_4)_2SO_4$가 0.6포화도일 때 그리고 ethanol 농도(濃度)가 $80{\sim}90%$일 때 회수성(回收性)이 가장 좋았다. 2. 두 균주가 생산한 cellulase의 효소작용 최적 조건은 다음과 같다. Asp. niger-SM6 T. viride-SM10 최적(最適) pH 3.5 4.0 pH 안정성(安定性) $3.0{\sim}6.0$$3.0{\sim}6.0$ 최적온도(最適溫度) $60^{\circ}C$$60^{\circ}C$ 열안정성(熱安定性) $60^{\circ}C$이하(以下) $50^{\circ}C$이하(以下) 최적작용시간(最適作用時間) 30분(分) 60분(分) 최적기질농도(最適基質濃度) 3% 3% 3. CMCase에 대한 Km치(値)는 Aspergillus niger-SM6이 0.8%, Trichoderma viride-SM10이 1.01%였다. 4. Aspergillus niger-SM6은 xylanase 및 pectinase도 높은 활성(活性)을 가지고 있었다.
Kim, Nyoung-Ji;Kwon, Tae-Ho;Jang, Yong-Suk;Yang, Moon-Sik;Kim, Dae-Hyuk
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제10권3호
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pp.287-292
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2000
Recombinant Aspergillus niger was constructed to express and secrete a biologically active murine granulaocyte macrophage-colony stimulating factor (mGM-CSF). A 500 bp fragment encoding the signal peptide and terminator of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gpd). The hygromycin phosphotrasferase gene (hph) was used as a selection marker for the fungal transformants. An expression vector was introduced into A. niger ATCC 9642, and a Northern blot analysis indicated the presence of a considerable amount of transcripts from the introduced mGM-CSF. The biological activity of recombinant mGM-CSF (rmGM-CSF) isolated from the culture filtrate was confirmend by measuring the proliferationof the GM-CSF dependent FDC-P1 cell line. It appeared that rmGM-CSF was amenable to the proteolytic activity produced by A. niger, since biological actibity was only observed when the transformants were grown in a protease-repressing medium, and the activity of rmGM-CSF dramatically decreased with an increase of age of the culture. The yield of rmGM-CSF, as determined by ELISA. was 640 ng/l of culture filtrate. Accordingly, its specific activity is estimated to be approximately two-and-a-half times higher than that of a commercial preparation from E. coli.
When cultivated aerobically, Aspergillus niger hyphae produced extracellular glucoamylase, which catalyzes the saccharification of unliquified potato starch into glucose, but not when grown under anaerobic conditions. The $K_m\;and\;V_{max}$ of the extracellular glucoamylase were 652.3 mg/l of starch and 253.3 mg/l/min of glucose, respectively. In mixed culture of A. niger and Saccharomyces cerevisiae, oxygen had a negative influence on the alcohol fermentation of yeast, but activated fungal growth. Therefore, oxygen is a critical factor for ethanol production in the mixed culture, and its generation through electrolysis of water in an electrochemical bioreactor needs to be optimized for ethanol production from starch by coculture of fungal hyphae and yeast cells. By applying pulsed electric fields (PEF) into the electrochemical bioreactor, ethanol production from starch improved significantly: Ethanol produced from 50 g/l potato starch by a mixed culture of A. niger and S. cerevisiae was about 5 g/l in a conventional bioreactor, but was 9 g/l in 5 volts of PEF and about 19 g/l in 4 volts of PEF for 5 days.
Aspergillus niger #33로부터 RT-PCR 및 PCR방법을 이용하여 epoxide hydrolase (EH)유전자를 클로닝 하고 염기서 열을 분석한 결과 A. niger LCP521 유래의 EB와 85%수준의 유사성을 가지고 있었다. 클로닝된 EH 유전자를 Sacrharomyces cerevisiae에 형질전환 시킨 후 galactose를 inducer로 사용하여 발현시켰다. 유전자 재조합 S. cerevisiae는 라세믹 phenyl oxirane 기질에 대하여 입체선택적 가수분해능이 있음을 확인할 수 있었으며, 이러한 유전자 재조합 EH는 광학활성 에폭사이드 제조를 위한 생촉매로 응용될 수 있을 것이다.
Objectives : This experimental study was performed to investigate the effectiveness of Fel Ursi Pharmacopunture solution(FUPS) manufactured by using alcohol/water extraction method. To identify the use of it as eyedrops, antibacterial test on Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus niger, Fusarium oxysporum, and Candida albicans was performed. Methods : After treatment FUPS on bacterial species(Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus niger, Fusarium oxysporum, Candida albicans) which cause Keratitis, we investigated anti-bacterial effects of FUPS on Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus niger, Fusarium oxysporum, Candida albicans in terms of measuring MIC and size of inhibition zone respectively. Results : After FUPS was treated, significant changes of MIC on Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus niger, Fusarium oxysporum and Candida albicans were not observed at all. Conclusions : The present study suggests that FUPS doesn't have anti-bacterial effects on Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus niger, Fusarium oxysporum and Candida albicans which cause Keratitis. Perhap These results recommend that FUPS doesn't have anti-bacterial effects but have other mechanism which suppress inflammation.
전보에 개발된 배지에 국산 포도당을 이용한 발효결과, 구연산 생성은 37∼43g/ι이었다. 제품X의 경우는 제품Y에 비해 구연산 생성이 우수하여 43g/ι가 생성되었다. 국산 포도당을 Ambelite-IR -120으로 처리하고, peptone도 potassium ferrocyan-ide로 처리하여 금속이온을 제거한 뒤에, 10mg/ι의 철 이온을 첨가하였을 때 구연산 생성은 53gm/ι에 달하였다. 또한 원래 Sakaguchi 배지에 비해 3배나 많이 구연산이 생성되었다. 분리 동정된 Asp. niger를 다른 문헌과 비교하였을 때 큰 손색이 없었으며, 앞으로의 생리연구 및 mutation 연구가 필요하겠다.
Aspergillus niger KUF-04에서 얻은 catalase는 gel 여과를 포함하여 5단계를 걸쳐 정제하였으며, 9% 회수율로 64배 정제되었다. 본 효소는 406, 503, 625nm에서 흡광을 나타내었으며, 특히 406nm에서 뚜렷한 흡수대를 보여주었다. 이 효소 활성의 최적 pH와 온도는 각각 7.0과 6$0^{\circ}C$이었다. 이 효소는 pH4.0과 8.0 사이에서 안정했으며 열에 대한 안정성은 2$0^{\circ}C$에서 5$0^{\circ}C$까지는 안정했으나, 8$0^{\circ}C$에서 20분간 반응시켰을 때 효소의 활성이 전부 소실되었다. 이 효소의 활성은 주로 hydroxylamine, potassium cyanide, sodium azide에 의해 저해되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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