• 제목/요약/키워드: Ni-NIA metal-affinity chromatography

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재조합 균주 Escherichia coli (pLL200K)가 생산하는 Bacillus circulans endo-$\beta$-1,3-1,4-glucanase의 정제 및 특성 (Purification and Characterization of an Endo-$\beta$-1,3-1,4-Glucanase from Escherichia coli(pLL200K))

  • 김지연
    • 미생물학회지
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    • 제38권4호
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    • pp.241-246
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    • 2002
  • Bacillus circulans의 endo-$\beta$-1,3-1,4-glucanase유전자를 발현 vector pQE30에 삽입시키고 E. coli Ml5에서 발현시켜 효소를 생산.정제하였다. 생산된 endo-$\beta$-1,3-1,4-glucanase는 nickel-nitrilotriacetic acid (Ni-NTA) metal-affinity chromatography 과정을 거쳐 단일 단백질로 정제되었다. 정제된 효소의 분자량은 SDS-PAGE 전기영동법으로는 28 kDa이었다. 효소 최적 활성 pH와 온도는 각각 pH 6.8과 $60^{\circ}C$였다. 이 효소는 pH 5.5~7.5와$55^{\circ}C$ 이하의 온도에서 안정하였다. 또한 본 효소는 여러 가지 금속 이온에 의해 대부분의 활성이 억제되었고, 특히 $Hg^{2+}$에서는 강하게 효소 활성이 저해됨을 보였다. 유기 용매에 대한 활성은 10%의 methanol이나 ethanol, isopropanol, 1-butanol 에 대하여 모두 낮은 활성을 나타내었다.