Studies were carried out to investigate the phenotypic characteristics of the non-molting mutant (nm-f) which was mapped on the 2nd linkage group. The results obtained were as follows : The nm-f mutant was distinguishable in the 3rd day of hatching. About 80 percentage of the non-molting mutant larvae died at the first instar within 10 days of hatching. The remaining larvae survived to the 2nd ad the 3rd instar but did not live to the final instar. There was no difference in non-molting nutant manifestation between hibernating and artificial hatching eggs. As a result of hemolymph protein analysis, the protein content on nm-f mutant was less than the normal larvae's. Therefore, we conclude that the characterization of nm-f is similar to the already known strains of non-molting mutant and the shortage of hemolymph protein is closely related to the non-molting characteristic in nm-f.
The "crescent-egg" a new spontaneous mutant was detected in a white egg strain k37. Studies were carried out the linkage analysis, to investigate phenotypic characteristics and biochemical analysis of haemolymph and ovarian protein. The mutant, ore was independent from 20 linkage groups P(2), Ze(3),L(4), oc(5), sn8), Ia(9), w-1(10), K(11), ch(13), U(14), bl(15), cts(16), bts(17), mln(18), nb(19), oh(20),Lan(21), or(22), tub(23) and Xan(27). The fertilization, hatchability and larval growth were not different from the those of normal eggs. The content and composition of yolk protein were similared to normal eggs. Scanning electron microscopy revealed the areal specific structure in dorsal region of egg-shell of cre mutant. Analysis of chorion protein by isoelectrofocusing(IEF), was resolved no difference in the composite of the chorion protein. We conclude that the egg mutant ere is expressed only in the egg-shape formation and region specific determination.
Recently, several mutant laver Pyropia yezoensis strains were developed. In this study, control laver Pyropia yezoensis and its mutant Py500G were compared for their amino acid contents and antioxidative activities. There was no significant difference of total amino acid contents between wild-type and mutant Py500G, but mutant had higher free amino acid contents than wild-type. Also, total phenolic content was higher in mutant Py500G. Phycoerythrin and phycocyanin contents were higher in wild-type. But, antixoidative activities were shown to be higher in mutant Py500G. These results will be useful for the development of new cultivar of Pyropia.
A new bacterial strain, was isolated from activated sludge, identified and named P. aeruginosa EMS1. The new strain produced surface-active rhamnolipids by batch cultivation in mineral salts medium with waste flying oils. The mutant strain KH7, designated P. aeruginosa EMS1, derived by random mutagenesis with N-methyl-N-nitro-N-nitrosogoanidine treatment producing high levels of the biosurfactants was selected by an ion-pair plate assay. The mutant strain KH7 showed 4-5 times more hydrocarbon emulsification as compared to the parent when grown on waste frying oils and various hydrocarbons. Furthermore, P. aeruginosa EMS1 and mutant strain KH7 was also able to use whey as a co-substrate for growth and biosurfactant production. As results of this study, mutant strain KH7 is a very efficient biosurfactant producer, and its culture conditions are relatively inexpensive and economical. Rhamnolipid is synthesized by the rhlAB-encoded rhamnosyltransferase. To be convinced of these genes, we performed PCR based on P. aeruginosa PAO1 whole-genome database. rhl gene cluster nucleotide and amino acid sequences were compared for both parent and mutant. Comparison of nucleotide sequence of rhlAB, there were usually terminal's codons exchange.
Chemical mutagenesis of basidiospores of Hypsizygus marmoreus generated new mushroom strains. The basidospores were treated with methanesulfonate methylester, an alkylating agent, to yield 400 mutant monokaryotic mycelia. Twenty fast-growing mycelia were selected and mated each other by hyphal fusion. Fifty out of the 190 matings were successful (mating rate of 26.3%), judged by the formation of clamp connections. The mutant dikaryons were cultivated to investigate their morphological and cultivation characteristics. Mutant strains No. 3 and No. 5 showed 10% and 6% increase in fruiting body production, respectively. Eight mutant strains showed delayed and reduced primordia formation, resulting in the reduced production yield with prolonged cultivation period. The number of the fruiting bodies of mutant No. 31, which displayed reduced primordial formation, was only 15, compared to the parental number of 65. Another interesting phenotype was a fruiting body with a flattened stipe and pileus. Dikaryons generated by mating with the mutant spore No. 14 produced flat fruiting bodies. Further molecular biological studies will provide details of the mechanism. This work shows that the chemical mutagenesis approach is highly utilizable in the development of mushroom strains as well as in the generation of resources for molecular genetic studies.
Polyglutamine extension in the coding sequence of mutant huntingtin causes neuronal degeneration associated with the formation of insoluble polyglutamine aggregates in Huntington's disease (HD). Mutant huntingtin can form aggregates within the nucleus and processes of neurons possibly due to misfolding of the proteins. To better understand the mechanism by which an elongated polyglutamine causes aggregates, we have developed an in vitro binding assay system of polyglutamine tract from truncated huntingtin. We made GST-HD exon1 fusion proteins which have expanded polyglutamine epitopes (e.g., 17, 23, 32, 46, 60, 78, 81, and 94 CAG repeats). In the present emergence of new study adjusted nanotechnology on protein chip such as surface plasmon resonance strategy which used to determine the substance which protein binds in drug discovery platform is worth to understand better neurodegenerative diseases (i.e., Alzheimer disease, Parkinson disease and Huntington disease) and its pathogenesis along with development of therapeutic measures. Hence, we used strengths of surface plasmon resonance (SPR) technology which is enabled to examine binding specificity and explore targeted molecular epitope using its electron charged wave pattern in HD pathogenesis utilize conjugated mutant epitope of HD protein and its interaction whether wild type GST-HD interacts with mutant GST-HD with maximum binding affinity at pH 6.85. We found that the maximum binding affinity of GST-HD17 with GST-HD81 was higher than the binding affinities of GST-HD17 with other mutant GST-HD constructs. Furthermore, our finding illustrated that the mutant form of GST-HD60 showed a stronger binding to GST-HD23 or GST-HD17 than GST-HD60 or GST-HD81. These results indicate that the binding affinity of mutant huntingtin does not correlate with the length of polyglutamine. It suggests that the aggregation of an expanded polyglutamine might have easily occurred in the presence of wild type form of huntingtin.
Background: The roots of Panax ginseng contain two types of tetracyclic triterpenoid saponins, namely, protopanaxadiol (PPD)-type saponins and protopanaxatiol (PPT)-type saponins. In P. ginseng, the protopanaxadiol 6-hydroxylase (PPT synthase) enzyme catalyses protopanaxatriol (PPT) production from protopanaxadiol (PPD). In this study, we constructed homozygous mutant lines of ginseng by CRISPR/Cas9-mediated mutagenesis of the PPT synthase gene and obtained the mutant ginseng root lines having complete depletion of the PPT-type ginsenosides. Methods: Two sgRNAs (single guide RNAs) were designed for target mutations in the exon sequences of the two PPT synthase genes (both PPTa and PPTg sequences) with the CRISPR/Cas9 system. Transgenic ginseng roots were generated through Agrobacterium-mediated transformation. The mutant lines were screened by ginsenoside analysis and DNA sequencing. Result: Ginsenoside analysis revealed the complete depletion of PPT-type ginsenosides in three putative mutant lines (Cr4, Cr7, and Cr14). The reduction of PPT-type ginsenosides in mutant lines led to increased accumulation of PPD-type ginsenosides. The gene editing in the selected mutant lines was confirmed by targeted deep sequencing. Conclusion: We have established the genome editing protocol by CRISPR/Cas9 system in P. ginseng and demonstrated the mutated roots producing only PPD-type ginsenosides by depleting PPT-type ginsenosides. Because the pharmacological activity of PPD-group ginsenosides is significantly different from that of PPT-group ginsenosides, the new type of ginseng mutant producing only PPD-group ginsenosides may have new pharmacological characteristics compared to wild-type ginseng. This is the first report to generate target-induced mutations for the modification of saponin biosynthesis in Panax species using CRISPR-Cas9 system.
In order to breed barley lines with reduced viscosity of wort, a fractured starch mutant of naked barley cultivar, Nubet, was obtained from the M2 seeds mutated by the diethyl sulfate treatment. Seeds of this fractured starch mutant were opaque and the endosperm consists of angular, irregular and fractured starch. The mutant was caused by single recessive mutation and assigned by the symbol fra. The gene was located on chromosome 4, distal in long arm by linkage recombinations using translocation homozygote lethal test set. The linkage value between the fractured starch mutant and 72-4a, 72-4d were 26.0$\pm$4.9, 34.2$\pm$3.1 percent respectively. In addition to the reduced seed size, fewer kernels per spike and higher tillering ability, lower $\beta$-glucan viscosity and higher lysine content of the grain were associated with this mutant. $\beta$-glucan viscosity of the Nubet grains increased from 3 weeks after anthesis to matury and most of the viscose substances appeared to be stored in the middle of the endosperm tissue. Since the mutant grains showed better milling property as compared to Nubet, it can be used as breeding resources to develope new barley cultivars for maltins and milling purpose.
Proceedings of the Zoological Society Korea Conference
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1999.10b
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pp.31-31
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1999
Characterization of mutant mice has been utilized as an animal model for the study of human inherited diseases. In addition to the pathogenesis stduy using the mutant mice, the mice have been used for the identification of the genes causing the phenotypes. Functional cloning and positional cloning are two approaches, depending on the phenotypes of the mutant mice. Though it takes a long time positional cloning has been well used to identify the gene of which function can not be presumed from the mouse phenotype. Recently by the advance of the molecular tools and the human genome project close to 10,000 genetic markers are developed to make the procedure faster. We obtained a new mutant mouse, sims, spontaneously arose and the affected mouse has a mild tremor and seizure was observed. Homozygote in either sex is sterile since uterus growth in female and seminal vesicle in male are not induced for the growth in puberty, implying the abnormal hormonal regulation during puberty. Supporting this, there is no detectable testosterone in the serum of the mutant male and the brain of the mutant is 30% heavier than littermate. To identify the location of the mutated gene, intraspecies cross to CAST/Ei was carried out and the 37 affected mice was analyzed for the linkage. The gene was mapped on chromosome 18, 20 cM from the centromere. More than 500 F2 progenies have been analyzed for the linkage and the locus becomes narrow within 3cM between Egrl and Fgf gene.f gene.
Gamma irradiation is one of the simple methods used to induce mutagenesis. Therefore, it is widely used for the development of breeding lineages of plants and algae. In this study, it was developed a new variety of Pyropia yezoensis using gamma irradiation. It was applied a dose of 1 kGy and named the developed mutant Py1k. The blade with width of the mutant was narrower and the blade length was longer than those of the wild type. To further investigate the mutant, it was analyzed the nutrient composition and antioxidant activity. In comparison to those in the wild type, it was found a higher amino acid composition and marginally increased antioxidant activity in Py1k. Based on these results, it was suggests that our protocol can be utilized to develop Pyropia species with improved nutritional quality through gamma irradiation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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