• BMB Reports
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• 제41권1호
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• pp.72-78
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• 2008

Human NeuNAc-9-P synthase is a two-domain protein with ability to synthesize both NeuNAc-9-P and KDN-9-P. Its mouse counterpart differs by only 20 out of 359 amino acids but does not produce KDN-9-P. By replacing the AFL domain of the human NeuNAc-9-P synthase which accommodates 12 of these differences, with the mouse AFL domain we examined its importance for the secondary KDN-9-P synthetic activity. The chimeric protein retained almost half of the ability of the human enzyme for KDN-9-P synthesis while the NeuNAc-9-P production was reduced to less than 10%. Data from the homology modeling and the effect of divalent ions and temperature on the enzyme activities suggest conformational differences between the human and mouse AFL domains that alter the shape of the cavity accommodating the substrates. Therefore, although the AFL domain itself does not define the ability of the human enzyme for KDN-9-P synthesis, it is important for both activities by aiding optimal positioning of the substrates.

• 한국전자현미경학회:학술대회논문집
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• 한국현미경학회 2000년도 제31차 춘계학술대회
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• pp.33-33
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• 2000

• Applied Microscopy
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• 제30권1호
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• pp.101-111
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• 2000

기생충에서 세포 표면에 존재하는 당단백 말단 Glc-NAc(N-acetylglucosa-mine)와 NeuNAc (N-acetylneuraminic acid)가 숙주 면역계를 인식하고 영양물질 흡수와 막 투과성에 중요한 역할을 하는 것으로 알려졌다. 이들 당단백 말단 GlcNAc와 NeuNAc의 폐흡충 피낭유충과 유약성충, 성충의 충체 조직세포에 분포를 확인하기 위하여 WGA 황금입자 복합체를 반응시켰다. WGA 황금입자 복합체에 반응시킨 폐흡충 발육 단계별 조직을 전자현미경으로 관찰한 결과 폐흡충 피낭유충의 표피합포체에는 황금입자가 고밀도로 표지된 것이 관찰되어 폐흡충 피낭유충 표피세포질에 lectin수용체들이 고밀도로 분포하는 것으로 관찰되었다. 유약성충과 성충의 맹관 막구조물에 WGA 황금입자가 고밀도로 표지되어 맹관의 상피세포 막 구조물에 WGA 수용체들이 고밀도로 분포하는 것으로 확인되었다. 폐흡충 피낭유충과 유약성충 그리고 성충의 배설관 상피의 막구조물에 WGA 황금입자가 표지되어 배설관상피의 막구조물에 WGA 수용체가 분포하는 것으로 확인되었다. 따라서 피낭유충의 표피합포체와 표피세포의 세포질에 분포하는 WGA 수용체인 GlcNAc와 NeuNAc는 숙주의 면역계와 세포인식에 관여하며 유약성충과 성충은 표피세포의 GlcNAc와 NeuNAc는 소멸되고 맹관과 배설관 상피에 GlcNAc와 NeuNAc가 분포하여 영양물질 흡수와 막수송에 의한 재흡수작용이 활발한 것이 확인되었다.

• Applied Microscopy
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• 제31권1호
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• pp.49-57
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• 2001

섬유아세포 표면의 미세구조적 특성과 세포표면에 존재하는 당 단백질 말단 GlcNAc(N-acetylglucosamine)와 NeuNAc(N-acetylneuraminic acid)는 섬유세포의 이동과 세포의 인식에 중요한 역할을 하는 것으로 알려졌다. 따라서 섬유세포의 미세구조적 특성을 전자현미경을 사용하여 관찰하였으며, 당 단백질 말단 GlcNAc와 NeuNAc의 분포를 확인하기 위하여 WGA 황금입자 복합체를 반응시켜 전자현미경으로 관찰하였다. 그 결과 배양섬유세포의 표면에 미세구조적 특성은 세포의 분화 정도와 세포의 부위에 따라 다양한 형태를 형성하며, 세포의 배양시간에 따라 정도의 차이는 있으나 일반적인 미세융모의 분포와 세포질 돌기의 분화는 세포의 주위 환경에 따라 다양한 형태로 분화하는 특성이 있는 것으로 확인되었다. 섬유세포의 세포표면에 분포하는 당 단백질 말단의 일종으로 섬유세포의 이동과 세포인식에 관여하는 lectin WGA 수용체 인 sialic acid (GlcNAc; N-acetylgalactosamine, NeuNAc; N-acetyl neuraminic acid)는 세포질의 조면소포체에서 생성되어 액포상태로 이동되어 섬유세포의 외로 분비되고 분비된 sialic acid는 세포의 표면과 돌기의 표면에 당 단백질 말단으로 분화하여 섬유세포의 이동과 세포인식 등의 섬유세포 기능에 관여하는 것으로 규명되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제32권2호
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• pp.142-148
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• 2004

에리스로포이에틴은 인간 적혈구분화의 조절인자로 작용한다. 유전자 재조합 인간에리스로포이에틴(rhEPO)은 동물세포에서 생산되고 있는 재조합 당단백질의 하나이며 당쇄부분이 전체 분자량의 40％를 차지한다. 시알산 함량은 체내약물 투여 지속기간과 직접적인 연관이 있어 시알산 함량은 의약용 당단백질의 중요한 성질로 여겨진다. 본 연구에서는 CHO세포 배양액에 시알산 생합성 전구물질인 N-acetylmannosamine(ManNAc)과 sialidase 저해제인 2-deoxy-2,3-hyo-N-acetylneuraminic acid(NeuAc2en)를 첨가하여 rhEPO의 sialic acid함량을 증가시킬 수 있었다. 특히, 배양액에 20 mM ManNAc/0.5 mM NeuAc2en를 첨가할 때 대조구에 비하여 약 10배의 시알산 함량이 증가하였으며 세포성장이나 배양액의 rhEPO생산량에는 영향이 없었다. rhEPO의 정제시 시알산 함량이 11∼15％인 다당쇄 rhEPO분획을 얻었으며, 배양액 내에 20 mM ManNAc와 0.5 mM NeuAc2en를 동시에 첨가함으로 대조구에 비하여 시말산함량이 높은다당쇄 rhEPO의 생산성이 50％ 증가하였다.

• Applied Microscopy
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• 제32권2호
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• pp.163-170
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• 2002

분비세포와 점막고유층 점액분비세포로부터 분비된 점액으로 덮여있으며, 비점막 및 하기도를 보호하는 생체방어기능을 갖고 있는 실험토끼의 비점막에 상악동염이 유발되었을 때 점막 분비세포 수적 증가와 분비물질의 변화를 규명하기 위하여 전자현미경으로 미세구조적 특성을 관찰하였다. 또한 점막 당단백질 말단기인 sialic acid의 염증시 분포양상을 알아보고자 sialic acid에 특이적으로 반응하는 lectin인 WGA를 황금입자가 표지된 lectin WGA 복합체를 반응시키고 투과전자현미경으로 관찰하였다. 그 결과 염증이 없는 실험 토끼들의 정상 상악동 점막상피세포는 균일한 높이의 섬모를 갖는 상피 세포층에 부분적으로 분비세포가 관찰되었다. 분비세포는 전자밀도가 높은 과립과 전자밀도가 낮은 과립을 포함하고 있는 것이 관찰되었다. 상악동염을 유발시킨 실험 토끼들의 점막상피세포는 상피 세포층이 비후되었으며 분비세포 수가 증가하였고 부분적으로 섬모가 소실되었다. 이러한 변화는 상피세포 표면에 세균의 부착을 막는 일차적인 방어체제인 점액의 증가로 화농성의 분비물이 생성되어 섬모의 기능을 손상시키는 것으로 확인되었다. Lectin WGA 반응에서 정상 섬모세포의 섬모와 분비세포의 전자밀도가 낮은 과립에 sialic acid를 포함하고 있는 것으로 확인되었다. 상악동염이 유발된 실험토끼의 점액에 lectin WGA 반응 결과 섬모세포의 섬모와 분비세포의 전자밀도가 낮은 과립에서 sialic acid의 분포가 급격히 증가하는 것으로 관찰되었다. 따라서 점막에 염증이 유발되면 분비세포와 점막의 분비세포의 증식으로 sialic acid를 포함한 sialogylcoconjugate의 과다분비가 유발되며 이는 분비세포가 염증으로 인해 생체가 외부자극에 나타내는 급격한 방어기전으로 생각되었다.