• 생명과학회지
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• 제14권4호
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• pp.657-663
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• 2004

고추에서 클로닝된 sesquiterpene cyclase (CASC) promoter에 cinnamic acid 4-hydroxylase (C4H)유전자를 클로닝하여 담배에 형질전환하였다. 형질전환체의 분석은 PCR, Southern blot분석으로 하였으며, CASC promoter의 작동여부를 조사하기 위하여 GUS histochemical assay를 하였다. 스트레스에 반응한다고 알려진 CASC promoter를 C4H gene과 fusion하여 C4H activity를 조사하여 스트레스에 반응하는 정도를 조사하였다. 최종적인 형질전환체로 확인된 개체는 평균 16.4% 정도였으며, 각 promoter별로 약간의 편차를 보였다. C4H activity 조사시 스트레스를 주지 않았을 때 대조구가 비슷한 양상을 나타내었다. 스트레스를 주었을 때 대조구와 비교하여 promoter 3번은 1.3배 activity가 높아졌으며 4번은 1.4배, 6은 2배, cyc 600은 1.1배 높아졌다. 이런 결과로 보아 이 promoter들은 UV에 반응하는 promoter이며 앞으로 stress에 저항하는 유전자의 적당한 promoter로, 타작물에 적용하여 stress저항성 작물의 육성 시 매우 유용하게 사용될 것으로 사료된다.

• 대한미생물학회지
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• 제19권1호
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• pp.55-64
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• 1984

The clinical specimens used in this study were collected during the period from March 4, to December 30, 1983, from children's hospitals in Seoul area. They came from clinically apparent cases of diarrheal disease in hospitals. Many specimens were taken from rectal Swabs. During this period, 2166 stool cultures were streaked onto MacConkey plate and were them deposited in selenite broth. Colonies resembling pathogens on MacConkey medium were picked to KIA, Urea agar, malonate broth, ONPG broth, SIM. Reaction on those media cultures were identified biochemically with using API 20E test kit and confirmed serologically with commercially avabile Salmonella antisera(Difco) or Shigella antisera(Denka, Japan). The sensitivity of Salmonella and Shigella tested to ampicillin cephalosporin, chloramphenicol, colistin, gentamicin, tetracycline, streptomycin, nalidixic acid, neomycin, polymyxin B was performed by means of disc diffusion method recommended by Bauer-Kirby, using the discs prepared in BBL Laboratory. 1. There were 34 (1.6%) isolations of Salmonella cultures and 52(2.4%) isolations of Shigella from the 2,116 specimens. Only 53%of Salmonella were isolated by direct streaking on MacConkey plating media, by contrast, 80% of the Shigella were isolated directly. 2. Shigella flexneri types comprised 56% of the Shigellae isolate from 52 Shigellae identified 24% of Salmonella enteritidis ser typhimurium were identified. 3. Concerning to Salmonella and Shigella occurance according to month and sex, They shows relatively higher for the male than in case of female, and 2-3 age were shown the highest group. 4. October is the month with highest incidences. 5. In the sensitivity patterns of Shigellae, most of them were appeared to be resistant ampicillin, streptomycin, tetracycline, in case of Salmonella, 15% of them were resistant to chloramphenicol.

• 한국축산식품학회:학술대회논문집
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• 한국축산식품학회 2005년도 제36차 추계 학술발표대회
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• pp.196-203
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• 2005

축산식품 고기내의 잔류항생물질을 신속하고 간편하고 정확하게 분석하기 위한 시험법 개발 을 목적으로 하였다. 축산식품내의 일반적인 잔류항생물질에 대한 지금까지의 분석법으로는 Bioassay법, TLC법, ELISA법, GC법 및 HPLC법 등이 있지만 Streptomycin/Dihydro streptomycin, Neomycin에 대한 HPLC법은 거의 확립되어 있지 않은 실정이다. 우리나라의 공인 검사법으로는 Bioassay법 및 HPLC법 등이 있지만 그러나 지금까지의 방법으로는 검출감도가 낮은 것이 큰 문제점으로 되어 왔다. 본 연구에서는 DST에 대한 HPLC법에 대한 보고한 P. Edder 방법 중에 clean-up과정 및 이동상 조건을 대폭 수정하여 DST의 분리 및 검출감도를 낮추려고 시도하였다. 본 연구에 사용된 유도체화 장치 Post-Column Derivatization Instrument PCX 5100 (Pickering Laboratories, Inc.)의 컬럼온도는 $40^{\circ}C$, 오븐온도 $55^{\circ}C$, reagent 유속 0.6ml/min mobile phase 유속 0.8ml/min으로 검출기는 형광검출기를 이용하여 DST 검출에 대해 만족할 만한 결과를 얻었다. 이때의 분석소요시간은 약 15분이었다. 표준시료 DST의 검량선은 넓은 농도범위(0.02${\sim}$1.0ppm)에서 양호한 직선성을 나타냈다. 본 시험법에 의한 검출한계는 limit of detection (LOD)은 0.02ppm이었으며, 적어도 고기에서의 MRL이 0.6ppm임을 감안하면 DST를 정량적으로 정도 좋게 측정할 수 있다는 것을 확인했다. 상기의 조건하에서 실제시료인 고기에 표준 DST를 1ppm을 spiking한 후 SPE상에서 SCX(Strong cation exchange column)을 통한 clean-up과정을 거친 후의 DST의 limit of quantification(LOQ)는 약 0.47ppm이었으며, 이에 대한 회수율은 97.7%(n= 8)를 나타냈다. 실제 codex에서 권장한 고기의 MRL이 0.6ppm인 점을 감안하면 codex 권고치에 도달할 수 있는 것으로 판단되었다. 따라서 본 연구에서 개발된 시험법은 지금까지 국내적으로 DST에 대한 시험법이 확립되어 있지 않은 것으로 이와 아울러 간편한 parallux와 병용해 DST에 대한 정량 및 정성 분석을 유도체화 장치 및 형광검출기를 이용해 잔류항생물질 DST에 대한 분석시험법의 개발이 가능하다고 여겨진다.

• 한국축산식품학회:학술대회논문집
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• 한국축산식품학회 2005년도 제36차 추계 학술발표대회
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• pp.310-316
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• 2005

축산식품(우유)내의 잔류항생물질을 신속하고 간편하고 정확하게 분석하기 위한 시험법 개발을 목적으로 하였다. 축산식품내의 일반적인 잔류항생물질에 대한 지금까지의 분석법으로는 Bioassay법, TLC법, ELISA법, GC법 및 HPLC법 등이 있지만 Streptomycin/dihydrostreptomycin, neomycin에 대한 HPLC법은 거의 확립되어 있지 않은 실정이다. 우리나라의 공인 검사법으로는 Bioassay법 및 HPLC법등이 있지만 그러나 지금까지의 방법으로는 검출감도가 낮은 것이 큰 문제점으로 되어 왔다. 본 연구에서는 STP에 대한 HPLC법에 대한 보고한 Edder 방법 중에 clean-up 과정 및 이동상 조건을 대폭 수정하여 STP의 분리 및 검출감도를 낮추려고 시도하였다. 본 연구에 사용된 유도체화 장치 Post-Column Derivatization Instrument PCX 5100 (Pickering La-boratories, Inc.)의 컬럼 온도는 $40^{\circ}C$, 오븐온도 $55^{\circ}C$, 유도체화 용매 유속 0.6ml/min 이동상 유속 0.8ml/min으로 검출기는 형광검출기를 이용하여 STP 검출에 대해 만족할 만한 결과를 얻었다. 이때의 분석소요시간은 약 15분이었다. 표준시료 STP의 검량선은 넓은 농도범위(0.02${\sim}$1.0ppm)에서 양호한 직선성을 나타냈다. 본 시험법에 의한 검출한계는 limit of detection(LOD)은 0.02ppm이었으며, 적어도 우유에서의 MRL이 0.6ppm임을 감안하면 STP를 정량적으로 정도 좋게 측정할 수 있다는 것을 확인했다. 상기의 조건하에서 실제시료인 우유에 표준 STP를 0.5ppm을 spiking한 후 SPE상에서 SCX(Strong cation exchange column)을 통한 clean-up과정을 거친 후의 STP의 limit of quantification(LOQ)는 약 0.44ppm이었으며, 이에 대한 회수율은 89.7${\pm}$2.3%(n=6)를 나타냈다. 실제 CODEX에서 권장한 우유의 MRL이 0.6ppm인 점을 감안하면 CODEX권고치에 도달할 수 있는 것으로 판단되었다. 따라서 본 연구에서 개발 된 시험법은 지금까지 국내적으로 STP에 대한 시험법이 확립되어 있지 않은 것으로 이와 아울러 간편한 parallux와 병용해 STP에 대한 정량 및 정성 분석을 유도체화 장치 및 형광검출기를 이용해 잔류항생물질 STP에 대한 분석시험법을 개발하였다.

• 대한화장품학회지
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• 제22권2호
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• pp.201-210
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• 1996

Predictive tests for the identification of contact sensitizing chemicals have been developed. We measured the sensitization potential with three predictive tests, the in vitro and the in vivo Local Lymph Node Assay(LLNA), ELISA to detect interferon-gamma(IFN-${\gamma}$) from supernatant and flow cytometry to detect change of cell surface proteins, using draining lymph nodes of mice. BALB/c mice were exposed to various chemicals or vehicles on the ears daily for 3 consecutive days in all experiments. With some exceptions of propyl paraben, neomycin sulfate, the in vivo LLNA was able to detect the sensitizing capacity of test chemicals and was more sensitive than the in vitro LLNA for chemicals used in the present study. In another experiment, contact sensitivity was assessed by the ELISA to detect IFN-Υ from the supernatants of the cultured LNCs after sensitization with chemicals. There was a good correlation between the LLNA and the IFN-Υ production for test chemicals. We also examined the change of cell surface proteins on LNCs after sensitization by flow cytometry for some cell adhesion molecules(ICAM-1, E-cadherine, B7 molecule), T cell markers(CD3, CD4, CD8, T$\alpha$$\beta$,T${\gamma}$$\delta$) and B cell markers(LR1, CD45R, I-Ad). The number of ICAM-1 positive cells and B cells in LNCs were increased after sensitization with DNCB, TNCB, isoeugenol and 25%, 50% cinnamic aldehyde compared with that of vehicle as a control. In conclusion, the in vivo LLNA could provide more sensitive screening test for moderate to strong sensitizers and some weak sensitizers including cosmetic raw materials than the in vitro LLNA. The production of IFN-Υ by allergen-activated LNCs might be a values indicators without radioisotopes for the identification of contact allergens. Detection of allergens by testing the increase of ICAM-1 positive cells and B cells in LNCs by flow cytometry might be used as a test method to detect allergens.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제25권5호
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• pp.675-680
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• 2002

In order to investigate the underlying mechanism of HCI in oesophagitis, the inflammatory response to HCI was observed in RBL-2H3 mast cells. Rat basophilic leukemia (RBL-2H3) cells were used to measure histamine release, arachidonic acid (AA) release, reactive oxygen species (ROS) and peroxynitrite generation induced by HCI. Exogenous HCl increased the level of histamine release and ROS generation in a dose dependent manner, whereas it decreased the spontaneous release of [$^3$H] M and the spontaneous production of peroxynitrite. Mepacrine (10 $\mu$M), oleyloxyethyl phosphorylcholine (10 $\mu$M) and bromoenol lactone (10 $\mu$M) did not affect both the level of histamine release and ROS generation induced by HCI. U73122 (1 $\mu$M), a specific phospholipase C (PLC) inhibitor did not have any influence on level of histamine release and ROS generation. Propranolol (200 $\mu$M), a phospholipase D (PLD) inhibitor, and neomycin (1 mM), a nonspecific PLC and PLD inhibitor, significantly inhibited both histamine release and ROS generation. Diphenyleneiodonium (10 $\mu$M), a NADPH oxidase inhibitor, and tiron (5 mM), an intracellular ROS scavenger significantly inhibited the HCI-induced histamine release and ROS generation. These findings suggest that the inflammatory responses to HCI is related to histamine release and ROS generation, and that the ROS generation by HCI may be involved in histamine release via the PLD pathway in RBL-2H3 cells.

• 한국임상수의학회지
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• 제25권5호
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• pp.346-354
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• 2008

The combined effects of EDTA-Tris and eighteen antimicrobial agents have been evaluated in eight clinically isolated methicillin-resistant bacteria (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Streptococcus uberis and Streptococcus agalactiae) from bovine mastitis. The antimicrobial activity was evaluated by measuring the minimal bactericidal concentration (MBC) for the antibiotics alone or in combination with EDTA-Tris in Mueller-Hilton broth and milk. Combined use of EDTA-Tris and antibiotics potentiated or antagonized activity of antibiotics against mastitic pathogens. Milk increased the antibiotic potency of erythromycin and spiramycin on S. aureus. Culture in milk changed patterns of EDTA-Tris combinational effects compared with that in standard Mueller-Hilton broth. Combined with EDTA-Tris in milk, synergic effects were observed in colistin, dihydrostreptomycin, kanamycin, erythromycin, gentamycin, oxytetracycline, streptomycin to E. coli, Str. uberis, and Str. agalactiae. However, significant antagonistic effects of milk on antibiotic susceptibility in combination with EDTA-Tris were noted in neomycin, streptomycin, penicillin, roxithromycin, and amoxicillin. This study indicates that combination therapy of EDTA-Tris with antibiotics in bovine mastitis should be used with caution because of the possible antagonistic effects of antibiotic combination with EDTA-Tris on mastitic pathogens. In addition, antibiotic susceptibility test in combination with EDTA-Tris in milk culture condition can be benefit in search of effective treatment regimen for some antibiotic-resistant bacteria of mastitis.

• 한국동물위생학회지
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• 제33권1호
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• pp.59-66
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• 2010

This study was carried out to investigate the characters of Listeria monocytogenes isolated from food, animal feces, dry cattle food, and the environment in Seoul and Kyonggi province during the period from 1998 to 2003. Serotyping of 70 L. monocytogenes isolates was performed according to the manufacturer's instruction. Minimum inhibitory concentrations (MICs) were determined by the microdilution method according to the guidelines of the Clinical and Laboratory Standards Institute. All the isolates were tested against 20 antimicrobial agents. The serotypes of the 70 L. monocytogenes isolates were 1/2c (62.8%), 1/2a (20%) and 1/2b (17.2%). Of the 70 L. monocytogenes isolates, 67.1%, 57.1%, 11.4%, 5.7%, 2.8%, 1.4% and 1.4% were resistant to tetracycline (Te), minocycline (Mi), norfloxacin (Nor), ciprofloxacin (Cip), neomycin (N), chloramphenicol (C) and cephalothin (Cf), respectively. However, all isolates were 100% sensitive to antibiotics such as amikacin, ampicillin, erythromycin, gentamycin, imipenem, kanamycin, ofloxcin, streptomycin, penicillin, trimethoprim, trimethoprim/sulfamethoxazole, tobramycin, and vancomycin. Multiple resistance patterns of the isolates were observed in TeMiNor Cip (1.4%), TeMiNor (7.1%), TeMiCip (2.9%), TeMiN (1.4%) and TeMi (44.3%). The results of this study indicate that many L. monocytogenes isolates are resistant to antimicrobial agents including Te and Mi. The possibility that the isolates could increasingly acquire multiple antimicrobial resistant properties cannot be precluded.

• 대한수의학회지
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• 제40권2호
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• pp.325-332
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• 2000

The growth characteristics and the cellular protein patterns of the Lactobacillus plantarum isolated and identified from oat silage were examined in order to confirm whether it will be used practically as probiotics or not. L plantarum was identified by morphological and biochemical tests including of final conforming by API 50CHL kit. The cultivation in MRS broth of the strain under the condition of different temperature, proved that they grew into $2.0{\times}10^{9}$ in $25^{\circ}C$, into $1.4{\times}10^{9}$ in $35^{\circ}C$ but they decreased into $4.5{\times}10^{5}$ growth in $45^{\circ}C$. The comparison of the growth by measurement of O.D600nm value after 24 hour cultivation between L plantarum and commercial probiotics, showed that the strain had a higher growth than commercial as 1.841 : 1.623. The measurement of it under bile acid's existence, indicated that this isolation was not influenced by bile acid and the tolerance was $3.2{\times}10^{9}$, $3.9{\times}10^{9}$ and $3.2{\times}10^{9}$, respectively, when each of 0%, 1%, and 2% oxigall existed. The examination of their antibiotics susceptibility by disk diffusion test, proved that L plantarum showed resistance against danofloxacin(5mcg), gentamycin(10mcg), kanamycin(30mcg), neomycin(30mcg) and streptomycin(10mcg). Based upon the test of the bacteriocin formation of this L plantarum, it was found out that the inhibition zone was not formed. In growth of L plantarum and E coli in nutrient broth, all E coli died out within 6 hours after cultures.

• 생명과학회지
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• 제18권1호
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• pp.69-74
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• 2008

국내에서 사육중인 말에서 채취한 시료로부터 Stapylococcus aureus를 분리 동정한 결과 39.2%(58/148)의 분리율을 나타내었다. S. aureus의 혈장응고효소 생산능 시험에서는 98.3%가 양성반응을 나타내었고 신선 혈장의 희석농도는 1:2에서 가장 높은 양성반응을 나타내었다. 본 연구에서 최종 동정된 S. aureus의 기본적인 생화학 성상은 일반적으로 알려져 있는 S. aureus의 특성과 유사한 결과를 얻을 수 있었으나, urease test의 경우 전체 균주의 73% 만이 양성 결과를 나타내어 균주별로 다양한 반응 양상을 관찰 할 수 있었다. 또한 34종의 substrate에 대한 분해 양상에 대한 검사 결과 fructose, maltose, ${\alpha}$-hydroxy butyric acid, thymidine-5'-mono phosphate, uridine-5'-mono phosphate 등의 substrate에 대해서는 모든 균주가 이용능력을 가지고 있었지만 ribose, sorbitol, xylose, xylitol 등의 substrate에 대해서는 모든 균주가 기질 이용능력을 가지고 있지 않는 것으로 확인되었다. 그리고 PCR에 의한 S. aureus를 동정한 결과 108bp 크기의 band를 확인하였다. 국내 말에서 분리한 58주의 S. aureus에 대한 약제 내성 양상을 조사한 결과 spectinomycin, sulfonamides, erythromycin, tetracyclin, ciprofloxacin, neomycin, enofloxacin, penicillin 등의 약제에 높은 저항성을 나타내었다.