The aim of the present study was to investigate the effects of several fractions obtained from methylene chloride ($CH_2Cl_2$) extract of self-fermented pine needle (SFPNE) on the acetylcholine (ACh)-evoked CA release from the isolated perfused model of the rat adrenal medulla and to establish the mechanism of the most active fraction (Fr.)-induced inhibitory action on the CA release. We obtained 6 fractions from $CH_2Cl_2$ extract of self-fermented pine needle. For the ACh (5.32 mM)-evoked CA release, the following rank order of inhibitory potency was obtained: Fr.4-5 > Fr.8-11 ${\gg}$ Fr.3 > Fr.6 = Fr.7 > Fr.1-2. Fr. 4 - 5 (60 ${\mu}g/mL$) perfused into an adrenal vein for 90 min produced relatively time-dependent inhibition of the CA secretory responses to ACh (5.32 mM), DMPP (100 ${\mu}M$), McN-A-343 (100 ${\mu}M$) and high $K^+$ (56 mM). Fr. 4 - 5 itself did not affect basal CA secretion. Also, in the presence of Fr. 4 - 5 (60 ${\mu}g/mL$), the CA secretory responses to angiotensin II (AngII, 0.1 ${\mu}M$), veratridine (50 ${\mu}M$), Bay-K-8644 (10 ${\mu}M$), and cyclopiazonic acid (10 ${\mu}M$) were significantly reduced, respectively. In the simultaneous presence of Fr. 4 - 5 (60 ${\mu}g/mL$) and L-NAME (30 ${\mu}M$), the inhibitory responses of Fr. 4 - 5 on the CA secretion evoked by ACh, DMPP, high $K^+$, AngII, Bay-K-8644 and veratridine were considerably recovered to the extent of the corresponding control secretion compared with that of Fr. 4 - 5-treatment alone. The level of NO released from adrenal medulla after the treatment of Fr. 4 - 5 (60 ${\mu}g/mL$) was greatly elevated compared with the basal level. Taken together, these results demonstrate that Fr. 4 - 5 inhibits the CA secretion from the isolated perfused rat adrenal medulla evoked by stimulation of cholinergic receptors as well as by direct membrane-depolarization. It seems that this inhibitory effect of Fr. 4 - 5 is mediated by blocking the influx of $Ca^{2+}$ and $Na^+$ into the adrenomedullary chromaffin cells as well as by inhibition of $Ca^{2+}$ release from the cytoplasmic calcium store, which is evoked at least partly through the increased NO production due to the activation of NO synthase. Based on these results, it is also thought that Fr. 4 - 5 isolated from $CH_2Cl_2$ extract of pine needle may contain beneficial antihypertensive components to prevent or treat hypertension.
본 연구는 Rosa davurica Pall. 잎 추출물의 염증 억제 효과 및 그 조절 기전을 알아보기 위해 수행되었다. Rosa davurica Pall. 잎 추출물의 항염 평가는 LPS로 자극한 Raw 264.7 대식세포에서 생성되는 NO와 iNOS 분석을 통해 확인하였다. Rosa davurica Pall. 추출물의 처리는 농도의존적으로 LPS에 의한 NO 생성과 iNOS 단백질의 발현을 유의미하게 억제하였고 500 ㎍/ml의 고농도에서는 세포 독성을 나타내었다. Rosa davurica Pall. 추출물은 LPS에 의해 인산화된 IκB 발현을 억제하였고 LPS에 의해 활성화된 NF-κB의 인산화를 약화시킴으로써 NF-κB의 활성화를 억제하였다. 또한, NF-κB signaling 특이 저해제인 PDTC와 Rosa davurica Pall. 추출물의 동시 처리는 각각 처리군에 비해 NO 생성과 iNOS 단백질 발현을 더욱 억제하였다. 이상의 결과는 Rosa davurica Pall. 추출물이 NF-κB signaling 조절에 의해 NO 생성을 억제함으로써 LPS에 의한 대식세포 염증 반응을 제어하고 있음을 제시해 주고 있다.
본 연구에서는 참치 추출물 및 분획물들에 의한 NO 생성에 미치는 영향을 살펴보았고 참치 85% aq. MeOH 분획물을 중심으로 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 IL-6, IFN-${\gamma}$ 및 TNF-${\alpha}$ 같은 사이토카인의 생성을 측정하여 참치 추출물에 의한 면역 기능 조절에 대하여 검토하였다. 참치 추출물과 각 분획물들은 control보다 낮은 NO 생성량을 나타내었으며, 특히 85% aq. MeOH 및 n-hexane 분획물에 의한 저해효과가 높았다. IL-6와 TNF-${\alpha}$의 경우, 참치 85% aq. MeOH 분획물을 농도별(1, 3 및 $10{\mu}g$)로 처리했을 때 그 중 $10{\mu}g/mL$ 첨가농도에서 6시간 배양 후 가장 낮은 IL-6 및 TNF-${\alpha}$ 생성량을 확인할 수가 있었다(p<0.05). IFN-${\gamma}$의 생성은 참치 85% aq. MeOH 분획물(1, $3{\mu}g/mLg$ 첨가농도)을 LPS와 함께 처리 했을 때 24시간과 48시간 배양 시 생성량이 증가하는 경향이었으나 유의적 차이는 없었다. 따라서 참치 85% aq. MeOH 분획물은 NO 생성과 pro-inflammatory 사이토카인(IL-6와 TNF-${\alpha}$)을 감소시켜 염증반응을 예방할 것으로 기대된다.
Menthae herba (MH) extracts exhibit anti-inflammatory effects. The purpose of this study was to determine whether the anti-inflammatory effects of MH extracts vary according to the cultivation regions. We performed a comparative analysis of MH extracts by evaluating the production of inflammatory mediators in RAW 264.7 murine macrophage cells and HaCaT human keratinocyte cells. MH extracts obtained from different cultivation regions in Korea and China significantly reduced the production of nitric oxide (NO), prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$), and tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) in RAW 264.7 cells stimulated with lipopolysaccharide (LPS). No differences in these inhibitory activities were observed between MH extracts. In HaCaT cells stimulated with TNF-${\alpha}$ and interferon-${\gamma}$ (IFN-${\gamma}$), MH extracts did not inhibit the production of macrophage-derived chemokine (MDC/CCL22), but most extracts reduced the production of the regulated on activation normal T-cell expression and secreted (RANTES/CCL5). We used clustering tree analysis of the MH extracts according to the chromatographic pattern and anti-inflammatory potency of MH extracts. We observed differences in the chromatographic pattern of MH extracts but no difference in anti-inflammatory potency. Our findings suggest that MH extracts from different regions do not show any differences in their pharmacological potency in that MH extracts are used as therapeutic agents to treat inflammatory disorders.
Objectives : Evodia officinalis DODE (EO), an herbal plant, has been widely used in traditional Korean medicine for the treatment of vascular diseases such as hypertension. The crude extract of EO contains phenolic compounds that are effective in protecting liver microsomes, hepatocytes, and erythrocytes against oxidative damage. But EO has been little found to have an anti-inflammatory activity. We investigated anti-inflammatory activity of EO in RAW 264.7 cells and human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). Methods : Cytotoxic activity of EO on RAW 264.7 cells was investigated by using 5-(3-caroboxymeth-oxyphenyl)-2H-tetra-zolium inner salt (MTS) assay. The nitric oxide (NO) production was measured by Griess reagent system. And proinflammatory cytokines were measured by ELISA kit. The levels of intracellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) expression were measured by flow cytometer. Results : EO decreased LPS-induced NO production in RAW 264.7 cells. The inhibitory activity of EO on LPS-induced NO release is probably associated with suppressing TNF-${\alpha}$, IL-6 and MCP-1 formation. These results indicate that EO has potential as an anti-inflammatory agent. Moreover, EO decreased TNF-${\alpha}$-induced IL-8, IL-6 production, and ICAM-1 and VCAM-1 expression in HUVECs. Conclusions : EO inhibits TNF-${\alpha}$-induced inflammation via decreasing cytokines production and adhesion molecules expression. These results indicate that EO has potential as an anti-inflammation and anti-artherosclerosis agent.
비단벌레(C. fulgidissima)는 동아시아에서 중풍을 치료하는 약으로 한국에서는 살충, 지양제로서 사용한 기록이 있다. 본 연구는 비단벌레의 에탄올 추출물의 내피세포에서의 산화질소(NO) 증강효과와 내피성 산화질소 합성효소(eNOS)의 양적 증가를 조사하였다. 그 결과 비단벌레 에탄올 추출물은 양성대조약물 sodium nitroprusside에 비해 65.9%의 NO 증강 효과를 가지는 것을 확인하였다. 또한 eNOS에 대해서도 농도 의존적으로 증가시킴을 확인하였다. 염증성부착인자인 ICAM-1과 VCAM-1 수치와 염증매개인자 프로스타글란딘 $E_2$를 조사하여 비단벌레 에탄올 추출물의 염증억제 기전을 조사한 결과, HUVEC 세포에서 농도 의존적으로 염증매개인자와 염증성부착인자의 감소를 확인하였다. 아울러 혈관성 내피성장인자(VEGF)의 낮은 수치를 HUVEC 세포에서 관찰할 수 있었다. 에탄올 추출물을 HPLC로 부분정제 후 GC-MS와 MALDI-TOF 분석을 통하여 일부 칸다리딘 성분 함유함을 확인하였다
The antioxidant and anti-inflammatory activities of extract and its fraction of Daucus carota var. sativa flower were studied in vitro. Extract and ethyl acetate fraction, butanol fraction of carrot flower showed radical scavenging effects on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). We also investigated the effect of extract and ethyl acetate fraction, butanol fraction of carrot flower on NO production in a lipopolysaccharide (LPS)-stimulated murine macrophage RAW 264.7 cells. Extract and its fraction of carrot flower significantly inhibited NO production and this inhibitory action was not due to the cytotoxicity. This study suggests that extract and ethyl acetate fraction, butanol fraction of Daucus carota var. sativa flower could contribute to the chemoprevention and therapy of oxidative stress and inflammation.
This study evaluated the anti-Helicobacter and anti-inflammatory effects of Sohamhyungtang (SHHT). The minimum inhibitory concentration (MIC) of SHHT against Helicobacter pylori (H. pylori) was determined by the agar dilution method. Expression of the H. pylori cagA gene in the presence of SHHT was determined by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Inhibition of H. pylori urease by SHHT was determined by the phenol-hypochlorite assay. Antiadhesion activity of SHHT was measured by urea-phenol red reagent. Inhibition of nitric oxide (NO) production in AGS cells was measured with Griess reagent. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) and IL-8 mRNA expression in AGS cells which were infected with H. pylori was determined by qRT-PCR. IL-8 level was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The MIC of SHHT was $100{\mu}g/mL$ and the expression of cagA gene was decreased about 25 folds in the presence of SHHT. H. pylori urease was inhibited 90% by SHHT. SHHT inhibited H. pylori adhesion on AGS cell in a concentration dependent manner. mRNA expression of iNOS and IL-8 and the production of NO and IL-8 were significantly decreased in the presence of SHHT. In conclusion, SHHT showed anti-Helicobacter activity and has potent anti-inflammatory effect on H. pylori-induced inflammation in human gastric epithelial AGS cells.
The aim of this study was to evaluate the anti-helicobacter activity and anti-inflammatory activity of Angelica dahurica (AD). The minimum inhibitory concentration(MIC) of AD against Helicobacter pylori(H. pylori), expression of the H. pylori cagA gene in the presence of AD was determined. Inhibition of H. pylori urease by AD, inhibition of nitric oxide (NO) production in AGS cells was measured. IL-8 mRNA expression in AGS cells which were infected with H. pylori and IL-8 level was measured. The MIC of MeOH Ex. of AD was $250{\mu}g/mL$ and the expression of cagA gene was decreased about 88% in the presence of AD. The activity of H. pylori urease was inhibited 70% by AD. mRNA expression of IL-8 and the production of NO and IL-8 were significantly decreased in the presence of AD. In conclusion, AD showed anti-Helicobacter activity and has potent anti-inflammatory effect on H. pylori-induced inflammation in human gastric epithelial AGS cells.
This study was designed to investigate the inhibitory effects of Perilla frutescens (L.) Britton var. frutescens extract on the production of inflammation-related mediators (NO, ROS, NF-${\kappa}B$, iNOS and COX-2) and pro-inflammatory cytokines (TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, IL-6) in lipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7 macrophages. Perilla frutescents (L.) Britton var. frutescens was air-dried and extracted with ethanol. The extract dose-dependently decreased the generation of intracellular reactive oxygen species and dose-dependently increased antioxidant enzyme activities, such as superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase in lipopolysaccharide stimulated RAW 264.7 macrophages. Also, Perilla frutescens (L.) Britton var. frutescens extract suppressed NO production in lipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7 cells. The expressions of pro-inflammatory cytokines (TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$ and IL-6), NF-${\kappa}B$, iNOS and COX-2 were inhibited by the treatment with the extract. Thus, this study shows the Perilla frutescens (L.) Britton var. frutescens extract could be useful for inhibition of the inflammatory process.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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