Selection of glyphosate-resistant clones from MNNG-treated mesophyll protoplasts of haploid tobacco and their differentiation were studied. The protoplasts were treated with 0.1 to 100 $\mu\textrm{g}$/mL N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) for 30 min when they expanded to oval shapes. After the treatment, the protoplasts in 4-16 cell stages were transferred to the selective medium containing 1 mM glyphosate for the selection of the glyphosate-resistant colonies. The efficiency of the cell division of the protoplasts in the selective medium decreased as the MNNG concentrations in creased. Optimal MNNG concentration for induction of the glyphosate-resistant clones was 10$\mu\textrm{g}$/mL and mutation frequency was 2.66$\times$10-6. The stability of the glypohsate-resistance of the clones was examined by prolonged subculture in the medium with 1 mM glyphosate, and the resistant clones were survived more than 10 months. Among them one clone has been proliferating and greening and the others were proliferating without greening or greening with slower proliferating.
변이원물질인 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, $benzo{(\alpha)}pyrene,$ 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido[4,3-b] indole에 대한 컴프리의 생즙과 가열즙의 항돌연변이 효과를 spore rec-assay 및 Ames test방법을 이용하여 검토하였다. Bacillus subtilis $H17(rec^+)$와 $H45(rec^-)$를 사용한 spore rec-assay에서 comfrey의 생즙시료 $40{\mu}l$처리시에 MNNG에 대한 강한 항돌연변이 효과를 나타내었다(p<0.01). Salmonella typhimurium TA98과 /TA100의 두 균주를 이용한 Ames test에서는, comfrey생즙의 경우 $B{(\alpha)}P$에 대해 TA98과 TA100 두균주 모두에서 각각 43% 및 52%의 다소 낮은 항돌연변이 효과를 나타낸 반면, 가열즙의 경우 Trp-P-1에 대해 TA98과 /TA100의 균주에 대해서 각각 75% 및 76%의 강한 항돌연변이 효과를 나타내었다(p<0.01).
Capsaicin (trans-8-methyl-N-vanillyl-6-nonenarnide), a major pungent component of hot pepper, is known to exert antioxidative properties. In this study, we investigated the protective effects of capsaicin against chemical carcinogen-induced oxidative damage in rats. Male Sprague Dawley rats weighting 230~250 g were treated with chemical carcinogens such as 2-nitropropane (2NP) or n-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) after (or before) the administration of capsaicin at doses of 0.5, 1,5 mg/kg. The level of lipid peroxidation in rat liver was estimated by measuring the amounts of thiobarbituric acid reactive substances. The degree of oxidative DNA damage was evacuated by measuring a DNA adduct, 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG), in urine. Antioxidative activities of capsaicin and its metabolites in vitro were determined by the measurement of DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl), a radical quencher. Significant inhibition of 2-NP induced lipid peroxidation was observed in the liver of the rat when treated with capsaicin. MNNG-induced urinary excretion of 8-OHdG was decreased by capsaicin treatment. Capsaicin and its metabolites inhibited net only the formation of free radicals, but also lipid peroxidation in vitro. Our results show that capsaicin may function as a free radical scavenger against chemical carcinogen-induced oxidative cellular damage in vivo. The observed antioxidative activities of capsaicin may play an important role in the process of chemoprevention.
N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanid me (MNNG)와 N-nitrosodimethylamine (NDMA)의 돌연변이 유발성 및 AZ-52l 사람의 위암세포의 성장에 미치는 녹황색 채소류의 저해 효과를 검토하였다. 26종의 시험 채소중 24종(92%)이 MNNG에 대한 항돌연변이성이 있었으며 (p<0.01, 0.05) 80%이상 저해 효과를 보인 시료는 들깻잎, 배추, 꽃양배추, 상치, 갓, 미나리, 들미나리, 당근, 우엉이었다. 한편 NDMA에 대해서도 실험채소중 85%가 항돌연변이성을 나타내었는데 (p<0.01, 0.05) 들깻잎, 배추, 케일, 콩나물, 양파는 80%이상의 저해 효과를 나타내었다. 위암세포의 성장 저해 효과에서는 들미나리와 들깻잎이 가장 저해 효과가 컸으며(97~100%) 콩나물과 미나리가 다음으로 효과가 컸었다(p< 0.001). 또한 브로콜리, 쑥갓, 풋고추, 고추잎, 시금치, 양배추, 고구마도 통계적인 유의성을 나타내며 암세포 성장을 억제하는 효과가 있었다(p< 0.01, 0.05).
The inhibitory effects of various extracts from Chinese pepper on the mutagenicity and the growth of MG-63 human osteosarcoma cells were studied. Chinese pepper was extracted with methanol and then the methanol extract was further fractionated by using hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol. The methanol extract of Chinese pepper revealed the strong antimutagenic activity on the aflatoxin B1(AFB1) and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG) in Ames mutagenicity test and SOS chromotest.
Ixeris dentata was extracted with methanol and then the methanol extract was further fractionated to hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol and aqueous fraction. The methanol extract of lxeris dentata had the strong antimutagenic effect on the aflatoxin B1(AFB1) and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG) in Ames mutagenicity test and SOS chromotest. Among the solvent extracted fractions from the methanol extract, the chloroform fraction exhibited the greatest antimutagenic effect suppressing the mutagenicity of AFB1 with inhibition rate of 74 percent. The methanol extract of Ixeris dentata also revealed the inhibitory effect on the growth of MG-63 human osteosarcoma cells after 6 days of breeding at 37℃. The chloroform fraction and the ethyl acetate fraction from the methanol extract of lxeris dentata were most effective and inhibited the growth of MG-63 cells by 97 and 93 percent, respectively. It is suggested that the inhibitory effects of lxeris dentata on the mutagenicity and the growth of MG-63 human osteosarcoma cells are strong in the lipid soluble fractions.
The anti-mutagenic effect of Orostachys japonicus (OJ) toward aflatoxin (AFB$_{1}$) and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) in the Salmonella assay system was studied. The methanol extract of OJ inhibited the mutagenicity induced by AFB$_{1}$ about 97% when 5% of the extract added to the system. Butanol fraction from the methanol extract was the most effective against AFB$_{1}$. However, other fractions of hexane, chloroform, and ethylacetate also showed considerable antimutagenic activity against AFB$_{1}$. Several identified compounds from the fractions of OJ exhibited anti-mutagenic effect. $\beta$-Sitosterol, astragalin and kaempferol-3-rhamnosyl-7-glucoside were selected from the compounds, and these compounds inhibited the mutagenicity dose-dependently. These 3 compounds also decreased the mutagenicity induced by MNNG. From these results, it is suggested that the major compounds such as triterpene, sterol and flavonoid in the OJ were responsible for the inhibition of the AFB$_{1}$ and MNNG-induced mutagenicities.
암은 전 세계적인 건강문제이다. 암의 종류는 다양하나 암의 발생과정에서의 유사성은 상당히 높다. 모든 암은 유전자의 발현 변화가 있다는 점에서 공통점을 갖는다. 암 발생과정에서 변화되는 유전자의 발현을 이해하는 것은 암치료제나 암백신 개발에 큰 도움을 줄 것이다. 이번 연구에서는 잘 알려진 암발생 물질인 MNNG를 이용하여 정상 위세포에서 암발생 시 변화되는 유전자 발현을 분석하였다. MNNG 처리에 의해 정상 세포와는 다르게 발현되는 유전자인 DEG들을 찾고 이들을 암세포에서 발현되는 DEG들과 비교하였다. 여기에 더해 DEG의 단백질 결과물들의 기능과 단백질들 간의 결합을 분석하여 단순히 유전자의 발현뿐만 아니라 이들 단백질의 신호전달 과정에서의 연관성도 함께 분석하였다. 이 결과 위암 발생과정에서 관여하는 유전자들과 이들 유전자의 단백질 결과물들의 상호 작용을 밝히게 되었다.
미생물에 의한 적자색 색소를 생산하기 위하여 Streptomyces propurpuratus ATCC 21630과 토양에서 분리한 strain No.89를 한천배지상에서 혼합배양하여 적자색을 형성하였다. 적자색 색소를 형성하는 strain No89는 Bacillus sp. R-89로 명명하였다. 이들 두 균주는 각각 배양하였을 때는 색소를 형성하지 않았다. 적자색 색소를 많이 생산하기 위해 Streptomyces Propurpuratus ATCC 21630를 MNNG (N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine) 로 처리하여 얻은 변이주 S.P-6과 Bacillus sp. R-89를 생산배지에서 혼합하여 발효하였을 때 1420$\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 색소를 얻을 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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