The suitability of the single cell gel electrophoresis (SCGE) assay as a test for the monitoring of genotoxicity of aquatic environment was evaluated. The SCGE assay was employed to detect DNA damage induced in clam (Spisula sachalinensis) exposed to a direct mutagen, N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) or an indirect mutagen, benzo[a]pyrene (B[a]P). The cells of gill and digestive glands were isolated from clam by homogenization, which was the optimized cell dissociation method, and the level of DNA damage was assessed and expressed as mean tail length. In the gill cells, significant dose- and time-dependent increase was observed in the mean tail length at the concentration from 0.01 to 0.5 ppm MNNG for 96 h. The linear correlation between relative dam-age index (RDI) values was suggested to provide criteria of genotoxicity monitoring for direct acting mutagen. The dose- and time-dependent responses of the digestive glands cells were less sensitive than those of the gill cells. In contrast, the genotoxic response resulting from the exposure of 0.01~1.0 ppm B[a]P to clam revealed a higher sensitivity in the digestive glands cells than the gill cells. The comparison between the time profiles of genotoxic responses in clam and carp, the latter had been obtained in our previous study, indicated that the metabolism of genotoxic compounds in the two aquatic organisms were quite different each other. We conclude that the SCGE assay has the potential as a screening test for routine genotoxicity monitoring of aquatic organisms because of its higher sensitivity and simplicity.
Preservative and antimutagenic effects of green tea leaves added Chinese cabbage kimchi (GK1, GK2, GK3, and GK4 : 1, 2, 3 and 4 of green tea leaves (GTL) in proportion of 100 of salted Chinese cabbage were added to kimchi) were compared to those of the Chinese cabbage kimchi without GTL (control kimchi, CK). Fermentation period of GKs was further delayed than that of CK. The initial pH and acidity between GKs an CK were similar, but the time reach optimally ripened status of kimchi (pH 4.3) was different. CK took 6 days, while GK1, GK2, GK3 and GK4 took 6, 10, 12 and 14 days at 10℃, respectively. The growth of Leuconostoc sp. and Lactobacilus sp. in GKs delayed comparing to those in FCK. Among GKs, as the added amount of green tea leaves increased, the growth of lactic acid bacteria was retarded. The antimutagenic effects of juices from GKs and CK were studied against aflatoxin B₁(AFB₁) in the Ames test on Salmonella typehimurium TA100 and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) in the SOS chromotest using E. coli PQ37. Juices from optimally ripened GKs (pH 4.3) showed 52∼76% inhibition rates against the indirect mutagen, aflatoxin B₁ induced mutagenicity while 49% inhibition rate by CK in the Ames test. Juices from GKs and CK showed 44∼67% and 36% inhibition rate against direct mutagen, MNNG (70 ng/assay) induce mutagenicity in the SOS chromotest. Thus GKs delayed fermentation period of kimchi and exhibited higher antimutagenic activity than CK.
To investigate the potential application of the single-cell gel electrophoresis (SCGE) assay to carp as an aquatic pollution monitoring technique, gill, liver, and blood cells were isolated from carp exposed to a direct-acting mutagen, N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), or indirect mutagen, $benzo[\alpha]pyrene$$(B[\alpha]P)$, then the DNA strand breakage was analyzed using the assay. Based on testing 5 different cell isolation methods and 6 electrophoretic conditions, the optimized assay conditions were found to be cell isolation by filter pressing and electrophoresis at a lower voltage and longer running time (at 0.4 V/cm for 40 min). In preliminary experiments, gill and liver cells isolated from carp exposed to MNNG in vitro exhibited DNA damage signals even with 0.5 ppb exposure, which is a much higher dose than previously reported. In the gill cells isolated from carp exposed to 0.01-0.5 ppm MNNG in vivo, significant dose-and time-dependent increases were observed in the tail for 4 days. As such, the linear correlation between the relative damage index (RDI) values and time for each dose based on the initial 48-h exposure appeared to provide effective criteria for the genotoxicity monitoring of direct-acting mutagenic pollution. In contrast, the in vivo exposure of carp to 0.25-1.0 ppm of $B[\alpha]P$ for 7 days resulted in dose-and time-dependent responses in the liver cells, in which 24-h delayed responses for metabolizing activation and gradual repair after 48 h were also observed. Thus, the negative-sloped linear correlation between the RDI and time at each dose based on the initial 48 h appeared to provide more effective criteria for the genotoxicity monitoring of indirect mutagenic pollution.
M. anka, Nakazawa et Sato IFO 4478과 6540 균주를 사용하여 적색색소의 최적 생산 조건을 검토한 바 pH6.0, 온도 $30^{\circ}C$에서 10일간이 가장 좋았다. 그리고 기질로서 탄소원으로는, 3.0% 쌀과 질소원으로는 1.0% 깨 추출물이 가장 높은 생산률을 보였다. 한편 MNNG의 처리에 의한 M. anka 4478-27과 M. anka 6540-185의 변이주는 가장 높은 색소생산능을 보였다.
장생 도라지의 메탄올 추출물과 분획물들의 돌연변이 유발 억제 효과를 조사하기 위하여 IQ와 MNNG를 사용하여 Ames mutagenicity test를 검토하였다. 장생 도라지 메탄올 추출물의 돌연변이원성은 없었으며, 또한 메탄올 추출물의 농도 증가에 따른 돌연변이 억제 효과는 상당히 높게 나타났다. 그리고 메탄올 추출물의 분획물중 에틸아세테이트층과 부탄올층에서 돌연변이 억제 효과가 인정되었으며, 농도 증가에 따라 colony 수가 감소하였다. S. typhimurium TA98과 TA100 균주와 각 돌연변이 물질에 따라 돌연변이 억제효과는 다소간의 차이가 있었으나, 장생 도라지의 약리 성분은 대사 활성화 과정의 돌연변이 억제 효과뿐만 아니라, 체내 세포에 직접적으로 영향을 미치는 직접돌연변이원에 대해서도 억제효과가 관찰되었다.
The antimutagenic and antigenotoxic effects of ethanol, methanol, water and non-heating ethanol extract of Ligularia fischeri were investigated using Ames test and micronucleus test. Four solvent extracts by themseleves did not induce mutagenesis. The four extract of 200㎍/plate showed approximately 84.7%, 77.1%, 72.5% and 71% inhibitory effect on the mutagenesis induced by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG) and 67.9%, 66.8%, 64.6% and 56% inhibition on the mutagenesis by 4-nitroquinoline-1-oxide(4NQO) against TA100 strain, whereas 70.2%, 60.9%, 61.9% and 52.8% inhibitions were observed on the mutagenesis induced by 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido[4,3-b]indol(Trp-P-1) in the presence of 200㎍/plate. TA100 strain was more sensitive than TA98 strain by four kinds of extracts on antimutagenesis. The effects of Ligularia fischeri extracts on the frequencies of micronucleated poly chromatic erythrocytes(MNPECs) induced by MNNG were investigated in the bone marrow. Ten, 20, 40 and 80mg g/kg of each extract were administered to animals immediately after injection of MNNG and the exposure time was 36 hours. Inhibitory effects of Ligularia fischeri ethanol extracts were 12%, 35.3%, 58.8%, and 57%, in the presence of 20, 40, 60 and 80mg/kg, respectively whereas methanol extracts showed 15.5%, 32.7%, 50.8%, and 57.9% inhibitory effects, respectively. Both extracts showed enhanced antimutagenic and antigenotoxic effects. These results showed a good correlation between antimutagenic effects in in vitro and in in vitro assay.
마늘의 돌연변이유발 억제효과와 사람의 HT-29 결장암 세포의 성장저해 효과에 대하여 검토하였다. 마늘의 메탄올 추출물은 김치 제조시 사용되는 첨가농도 2%에서 아플라톡신 $B_1(AFB_1)$과 MNNG에 대해 항돌연변이적 효과를 나타내었다. 이 메탄올 추출물의 농도를 증가시켰을 때 Salmonella typhimurium TA98과 TA100에서 모두 $AFB_1$에 대하여 돌연변이유발 억제효과가 증가되었다. 이를 다시 분획하였을 때 비극성 분획인 클로르포름 분획에서 더 큰 돌연변이유발 억제효과를 관찰할 수 있었다. 또한 마늘의 클로르포름 분획은 사람의 HT-29 결장암 세포의 성장을 FBS 농도 1%와 5%에서 각각 저해하였다.
Kim, So-Hee;Park, Kun-Young;Suh, Meong-Ja;Chung, Hae-Young
한국식품영양과학회지
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제23권3호
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pp.436-442
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1994
The effect of garlic on glutathione S-transferase activity and the level of glutathione in the mouse liver was studied. the intraperitoneal injection of the methanol extract of garlic and ally sulfide which is one of possible active compounds in garlic to ICR mouse before the injection of aflatoxin B1 (AFB1) increased the levels of glutathione and nonprotein-SH in microsomal fraction of the livers. The injection of the chloroform fraction 2 which revealed the highest antimutgenic activity in our previous research in the increase of the activity of glutathione S-transferase and the levels of glutathione and nonprotein -SH. The glutathione itself also had the antimutagenic effect on AFB1 and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) in Salmonella typhimurium TA98 and TA100 in vitro.
Mutation experiments were performed to select the mutant of Aspergillus niger 55, which had lost almost all the ability to produce transglucosidases but retained that of high productivity of raw meal saccharifying enzyme, by means of successive induction with N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG), ultraviolet(UV) light, and ${\gamma}$-rays. Also, we used the mutant enrichment techniques, such as liquid culture-filtration procedure and differential heat sensitivity of conidia, in order to increase the possibility of obtaining a mutant. The glucoamylase productivity of mutant PFST-38 was 11 times higher than that of the parent strain. The mutant PFST-38 was morphologically identical to the parent strain, except for the size of conidia, the tendency to form conidia and the lenght of conidiophore. Asp. niger mutant PFST-38 apeared to be useful for the submerged production of the raw corn meal saccharifying enzyme.
The antimutagenic effects of 27 kinds of plant flavonoids on the mutagenicity of aflatoxin $B_1(AFB_1)$ and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MANG) in Salmonella typhimurium TA 100 were investigated. In the mixed applications of $AFB_1\;(1\;\mu{g/plate)}$ with the flavonoids $(300\;\mu{g/plate)}$ in the presence of a mammalian metabolic activation system (S9 mix), chrysin, apigenin, luteolin and its glucoside, kaempferol, fisetin, morin, naringenin, hesperetin, persicogenin, (+)-catechin and (-)epicatechin showed the antimutagenic effect against $AFB_1$ with more than 70% inhibition rate. A little or no antimutagenicities except flavone against MNNG $(0.5\;\mu{g/plate)}$ were observed. For the antimutagencity of the flavonoids on $AFB_1$, the flavonoid structure that contains the free 5, 7-hydroxyl gorup seemed to be essential. However, saturation of the 2, 3-double bond of elimination of the 4-keto group did not affect the activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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