Dal-Ah KIM;Kyoung Hye KONG;Hyun-Jeong CHO;Mi-Ran LEE
Korean Journal of Clinical Laboratory Science
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v.55
no.3
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pp.184-194
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2023
In this study, we investigated whether p-anisaldehyde (PAA), the main component of essential oils derived from anise seeds, influences the differentiation of mouse C2C12 myoblasts. Cells were induced to differentiate over 5 days using a differentiation medium with or without PAA (50 or 200 mg/mL). Myotube length and diameter were measured, and the expressions of myogenic markers (myoblast determination protein 1, myogenin, myocyte enhancer factor 2, muscle creatine kinase, and myosin heavy chain) and atrophy-related genes (atrogin-1 and muscle ring finger-1 [MuRF-1]) were assessed by quantitative real-time polymerase chain reaction. Additionally, protein kinase B (Akt) phosphorylation was monitored by western blotting. PAA significantly induced the formation of smaller and thinner myotubes and reduced myogenic marker expression. Furthermore, PAA increased the expressions of atrogin-1 and MuRF-1 and simultaneously reduced Akt phosphorylation. Our findings indicate that PAA inhibits the myogenic differentiation of C2C12 cells by reducing the phosphorylation and activation of Akt.
This study was conducted to examine whether the parthenogenetic mouse embryonic stem (P-mES) cells can differentiate into functional cardiomyocytes in vitro similar to (mES) cells. p-mES04 and IVF-derived mES03 cells were cultured by suspension culture for 4 days. The formed embryoid bodies (EBs) were treated with 0.75% dimethyl-sulfoxide (DMSO) for further 4 days (4-/4+), and then plated onto gelatin coated culture dish. The appearance of contracting cardiomyocytes from the P-mES04 and mES03 cells was examined for 30 days. The highest cumulative frequency was detected at days 13 (69.83%) and 22 (61.3%), respectively. By immunocytochemistry, beating P-mES04 cells were positively stained with muscle specific anti-sarcomeric a-actinin Ab and cardiac specific anti-cardiac troponin I Ab similar to contracted mES03 cells. When the expression of cardiac muscle-specific genes was analyzed by RT-PCR, beating P-mES04 cells were expressed cardiac specific L-type calcium channel, a1C, cardiac myosin heavy chain a, cardiac muscle heavy polypeptide $7{\beta}$, GATA binding protein 4 and atrial natriuretic factor, but not expressed skeletal muscle specific L-type calcium channel, a1S, which was similar to male adult heart cells and mES03-derived beating cardiomyocytes. The result demonstrates that the P-mES cells can be used as an alternative for the study on the characteristic analysis of in vitro cardiomyocyte differentiation from the ES cells.
Han, Yunfei;Guo, Wenrui;Su, Rina;Zhang, Yanni;Yang, Le;Borjigin, Gerelt;Duan, Yan
Animal Bioscience
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v.35
no.4
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pp.614-623
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2022
Objective: The objective of this study was to investigate the effects of sheep slaughter age on myogenic characteristics in skeletal muscle satellite cells (SMSCs). Methods: Primary SMSCs were isolated from hind leg biceps femoris muscles of Wurank lambs (slaughtered at three months, Mth-3) and adults (slaughtered at fifteen months, Mth-15). SMSCs were selected by morphological observation and fluorescence staining. Myogenic regulatory factors (MRF) and myosin heavy chain (MyHC) expressions of SMSCs were analyzed on days 1, 3, 4, and 5. Results: The expressions of myogenic factor 5 (Myf5), myogenic differentiation (MyoD), Myf6, and myogenin (MyoG) in Mth-15 were significantly higher in Mth-15 than in Mth-3 on days 1, 3, and 4 (p<0.05). However, MyoG expression in Mth-15 was significantly lower than in Mth-3 on day 5 (p<0.05). The expressions of MyHC I, MyHC IIa, and MyHC IIx in Mth-15 were significantly higher than in Mth-3 on days 1 and 3 (p<0.05), and MyHC IIb were significantly lower than in Mth-3 on days 3 and 4 (p<0.05). In contrast, the expression of MyHC IIx in Mth-15 was significantly lower and MyHC IIb was significantly higher than in Mth-3 on days 5 (p<0.05). Conclusion: The slaughter age altered the expression of MRFs and MyHCs in SMSCs while differentiation, which caused the variation of myogenic characteristics, and thus may affect the meat quality of Wurank sheep.
Clinical arthritis is typically divided into rheumatoid arthritis (RA) and osteoarthritis (OA). Arthritis-induced muscle weakness is a major problem in aged people, leading to a disturbance of balance during the gait cycle and frequent falls. The purposes of the present study were to confirm fiber type-dependent expression of muscle atrophy markers induced by arthritis and to identify the relationship between clinical signs and expression of muscle atrophy markers. Mice were divided into four experimental groups as follows: (1) negative control (normal), (2) positive control (CFA+acetic acid), (3) RA group (CFA+acetic acid+type II collagen), and (4) aging-induced OA group. DBQA/1J mice (8 weeks of age) were injected with collagen (50 ${\mu}g/kg$), and physiological (body weight) and pathological (arthritis score and paw thickness) parameters were measured once per week. The gastrocnemius muscle from animals in each group was removed, and the expression of muscle atrophy markers (MAFbx and MuRF1) and myosin heavy chain isoforms were analyzed by reverse transcription-polymerase chain reaction. No significant change in body weight occurred between control groups and collagen-induced RA mice at week 10. However, bovine type II collagen induced a dramatic increase in clinical score or paw thickness at week 10 (p<0.01). Concomitantly, the expression of the muscle atrophy marker MAFbx was upregulated in the RA and OA groups (p<0.01). A dramatic reduction in myosin heavy chain (MHC)-$I{\beta}$ was seen in the gastrocnemius muscles from RA and OA mice, while only a slight decrease in MHC-IIb was seen. These results suggest that muscle atrophy gene expression occurred in a fiber type-specific manner in both RA- and OA-induced mice. The present study suggests evidence regarding why different therapeutic interventions are required between RA and OA.
The purpose of this article is to understand of the muscle adaptation based on myosin heavy chain. Especially, skeletal muscle dadptation in related to aging, unloading, training will discussed. MHC expression is highly plastic in muscles of adult mammals in accordance with the environmental conditions. These changes is called muscle plasticity. The plasticity is the atility of muscle cell to alter either the quantity of protein or the type of protein. MHC is both an important structural and regulatory protein comprising the contractile apparatus.
A protease purified from hepatopancreas of shrimp, Penaeus japonicus, had maximum activity at $70^{\circ}C$ and in neutral and alkaline pH ranges. Specific activity at optimum reaction condition of the protease was estimated to be approximately 12 U/mg/min. The protease was stable in neutral and alkaline pH ranges and activity was retained after heat treatment at $50^{\circ}C$ for 30 min. Apparent $K_m$ and $V_{max}$ value against casein substrate were estimated to be $0.29\%$ and $7.8see^{-1}$, respectively, and those against N-CBZ-L-tyrosine p-nitropheny1 ester (CBZTyr-NE) were 0.38 mM and $2,400 see^{-1}$, respectively. The N-termina1 sequence of the protease showed high homology to the trypsin from same species and the proteases from shrimp. Myosin heavy chain (MHC) from shrimp tail meat was the most susceptible to the protease and actin/tropomyosin were degraded progressively during 4 hr incubation, but to a lesser degree than MHC.
Oh, Taehoon;Seo, Hyun Jung;Lee, Kyu Taek;Kim, Han Jo;Kim, Hwi Jun;Lee, Ji-Hye;Cheong, Hae Il;Lee, Eun Young
Kidney Research and Clinical Practice
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v.34
no.1
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pp.53-56
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2015
MYH9-related disorder is an autosomal dominant disease caused by a mutation in the MYH9 gene, which encodes nonmuscle myosin heavy chain IIA (NMMHC-IIA). This disease is characterized by giant platelets, thrombocytopenia, granulocyte inclusion bodies, proteinuria, and high-pitch sensorineural deafness. Nephropathy has been observed in 30% of patients with MYH9-related disorder. The characteristic features are early onset proteinuria and rapidly progressing renal disorder. However, the prognosis of MYH9 nephropathy remains unclear. Herein, we describe a 36-year-old woman who presented with proteinuria and was diagnosed with MYH9 nephropathy via renal biopsy and gene analysis. Her proteinuria improved after administration of an angiotensin II receptor blocker, but was aggravated after changing to a calcium channel blocker.
Background: Loss of cardiomyocytes in the myocardial infarction leads to regional contractile dysfunction, and necrotized cardiomyocytes in infracted ventricular tissues are progressively replaced by fibroblasts forming scar tissue. Although cardiomyoplasty, or implantation of ventricular assist device or artificial heart was tried in refractory heart failure, the cardiac transplantation was the only therapeutic modality because these other therapeutic strategies were not permanent. Cell transplantation is tried instead of cardiac transplantation, especially bone marrow is the most popular donated organ. But because bone marrow aspiration procedure is invasive and painful, and it had the fewer amounts of cellular population, the adipose tissue is recommended for harvesting of mesenchymal stem cells. Material and Method: After adipose tissues were extracted from abdominal subcutaneous adipose tissue and intra-abdominal adipose tissue individually, the cellular components were obtained by same method. These cellular components were tried to transformation with the various titers of 5-azacytidine to descript the appropriate concentration of 5-azacytidine and possibility of transformation ability of adipose tissue. Group 1 is abdominal subcutaneous adipose tissue and Group 2 is intra-abdominal adipose tissue-retroperitoneal adipose tissue and omentum. Cellular components were extracted by collagenase and $NH_4Cl$ et al, and these components were cultured by non-induction media - DMEM media containing 10% FBS and inducted by none, $3{\mu}mol/L,\;6{\mu}mol/L,\;and\;9{\mu}mol/L$ 5-azacytidine after the 1st and 2nd subculture. After 4 weeks incubation, tile cell blocks were made, immunostaining was done with the antibodies of CD34, heavy myosin chain, troponin T, and SMA. Result: Immunostaining of the transformed cells for troponin T was positive in the $6{\mu}mol/L\;&\;9{\mu}mol/L$ 5-azacytidine of Group 1 & 2, but CD34 and heavy myosin chain antibodies were negative and SMA antibody was positive in the $3{\mu}mol/L\;&\;6{\mu}mol/L$ 5-azacytidne of Group 2. Conclusion: These observations confirm that adult mesenchymal stem cells isolated from the abdominal subcutaneous adipose tissues and intra-abdominal adipose tissues can be chemically transformed into cardiomyocytes. This can potentially be a source of autologous cells for myocardial repair.
Objective: The prevalence of metabolic syndrome and type 2 diabetes is increasing worldwide. Mitochondrial dysfunction is known to be involved in insulin resistance and obesity, researches have been increasing highly. Astragali Radix extract (ARE) or its main components have been shown to perform comparably to insulin by significantly reducing blood glucose levels in animal models however, the influence on mitochondrial dysfunction are not well understood. Methods: ARE (0.2, 0.5 and 1.0 mg/ml) or metformin (2.5 mM) were treated in C2C12 after 6 day-differentiation. The expressions of adenosine monophosphate (AMP)-activated protein kinase (AMPK) and phosphorylation AMPK, peroxisome proliferators-activated receptror ${\gamma}$ coactivator $1{\alpha}$ ($PGC1{\alpha}$), nuclear respiratory factors 1 (NRF1), mitochondrial transcription factor (Tfam) and myosin heavy chain were detected with western blotting or polymerase chain reaction analysis. The morphological changes were also investigated. Results: ARE dose dependently increased phosphorylation of AMPK and respectively activated mRNA expressions of $PGC1{\alpha}$, NRF1 and Tfam which are mitochondrial biogenesis regulators. Furthermore, there were some morphologic differences of differentiated cells between ARE treatment and control. Conclusions: This study suggests that ARE has the potential to increase muscle mitochondrial function by activating AMPK and $PGC1{\alpha}$.
This study aimed to investigate effects of chicken age on proliferation and differentiation capacity of muscle satellite cells (MSCs) and to determine total amino acid contents of cultured meat (CM) produced. Chicken MSCs (cMSCs) were isolated from hindlimb muscles of broiler chickens at 5-week-old (5W) and 19-embryonic-day (19ED), respectively. Proliferation abilities (population doubling time and cell counting kit 8) of cMSCs from 19ED were significantly higher than those from 5W (p<0.05). Likewise, both myotube formation area and expression of myosin heavy chain heavy of cMSCs from 19ED were significantly higher than those from 5W (p<0.05). After cMSCs were serially subcultured for long-term cultivation in 2D flasks to produce cultured meat tissue (CMT), total amino acid contents of CMT showed no significant difference between 5W and 19ED chickens (p>0.05). This finding suggests that cMSCs from chicken embryos are more suitable for improving the production efficiency of CM than those derived from young chickens.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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