• 한국동물학회지
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• 제26권4호
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• pp.235-251
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• 1983

배양한 계배 근원세포의 융합기작을 밝혀보기 위해서 분화과정에 있는 근세포를 lactoperoxidase를 촉매로 써서 막표면단백질을 iodination하여 본 결과, 융합의 과정에서 막표면단백질의 정성적 및 정량적 변화를 볼 수 있었다. 융합전의 세포에서 12개의 주요단백질을 검출할 수 있었는데, 융합시의 세포에서는 165K와 93K의 단백질이 새롭게 나타났으며 동시에 245K 단백질의 감소와 저분자 단백질의 증가를 볼 수 있었다. 이 고분자 단백질의 감소는 세포주기와 관계가 있는 것으로 생각되고 있는 세포내 cAMP 수준은 융합에 앞서서 현저한 일시적인 증가를 보였는데, 이와같은 결과는 cAMP의 증가가 세포의 융합의 유발과 관계가 있음을 보여 주는 것이었으며, 분화하는 근원세포에서는 고도의 동조성이 보였다. 아울러, 근세포의 융합과정에서 적어도 4 가지의 iodination된 저분자 단백질을 배양액에서 발견할 수 있었는데, 이들은 막단백질의 가수분해산물로 생각되었고, 역시 세포의 융합과정과 유관할 것으로 추정되었다. 세포막 표면단백질의 변화, 분화과정 중에 배양액 속으로 방출되는 단백질, 융합과 유관한 cAMP의 증가 및 융합과 관련되는 외적 요인의 가능성에 관해서 논의하였다.

• Animal cells and systems
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• 제1권1호
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• pp.63-69
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• 1997

We have previously reported that NF-kB is involved in the regulation of nitric oxide synthase gene expression during differentiation of chick embryonic myoblasts. However, how NF-kB is timely activated during myogenesis remains elusive. One of the most prominent events in myogenesis is myoblast membrane fusion, which is accompanied with massive cytoskeletal reorganization. Here we show that the activity of NF-kB markedly increases in L6 rat myogenic cells that have just initiated morphological changes by treating nocodazole, a microtubule-disrupting agent. Furthermore, the induction of NF-kB activation was closely correlated with the myoblast fusion. In addition, a variety of agents that disrupt microtubules stimulated the myoblast fusion as well as the induction of NF-kB activation. In contrast, taxol, a microtubule-stabilizing agent, suppressed the induction of NF-kB activation and inhibited spontaneous differentiation of L6 cells as well. In addition, we found that the NF-KB in the cells consists of p50/p65 heterodimers. These results support the idea that reorganization of microtubule at early stages of differentiation plays a role as a signal for NF-KB activation during myogenesis.

• 한국동물학회지
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• 제32권1호
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• pp.40-47
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• 1989

계배 근원세포의 배양 배지에 calcium ionophore A23187이나 EGTA를 배양 24시간에 첨가함으로서 초래된 세포내 칼슘 농도의 변화는 근원세포의 분화과정에 상당한 영향을 미쳤다. 배양 24시간에 A23187이나 EGTA를 첨가한 후 배양 48시간, 72시간, 및 96시간에 각각 세포를 [35S]methionine으로 1시간 표지시킨 후 수확하여 2차원 전기영동법으로 단백질을 분리시켰을 때, 일부 단백질은 배양 조건에 따라 합성 양상을 달리함을 보였다. 배양 24시간에 처리한 A23187과 calcium-activated neutral protease는 대조군에 비해 세포융합을 촉진시켰으나 동일 시기에 처리된 phosphoprotein을 정량함으로써 조사하였을 때, A23187이 배양 초기에는 대조군에 비해 약간 이 효소의 활성도를 높이는 효과를 보였으나 세포융합이 완성된 시기인 96시간에는 대조군에 비해 활성도를 높이는 효과를 보였으나 세포융합이 완성된 시기인 96시간에는 대조군에 비해 활성도의 차이를 나타내지 않았다. A23187 및 calcium-activated neutral protease에 의한 세포융합의 촉진, 그리고 A23187에 의한 protein kinase C 활성도의 증가가 모두 근원세포의 융합이 활발히 진행되는 시기인 배양 48-72 시간에 관찰됨을 볼 때, 세포내 칼슘의 농도는 protein kinase C 및 calcium-activated neutral protease와 상호연관을 가지면서 세포분화에 관여하는 것으로 사료된다.

• 한국동물학회지
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• 제33권1호
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• pp.108-118
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• 1990

혈청을 비롯해서 extracellular matrix에 존재하는 당단백질인 fibronectin은 근세포의 융합과 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구실에서는 최근에 근세포가 분화하는 동안에 fibronectin의 수준이 감소되며, 이러한 감소는 fibronectin의 28 kDa fragment에 대한 수용체으 유용성이 감소하는 결과로 밝혀낸 바 있다. 본 연구에서는 근세포으 융합을 억제하는 물질로 알려진 EGTA를 이용하여 근세포의 융합과 28 kDa fragmen receptor의 관계를 검토하여 보았다.EGTA를 처리한 경우 EGTA를 처리하지 않은 근세포에 비해서 fibronectin의 수준과 28 kDa fragmen binding이 훨씬 적게 감소하였으며, 융합이 봉쇄된 근세포에서 EGTA를 제거하여 융합을 재개시키면 fibronectin의 수준과 28 kDa fragmen의 binding이 정상 근세포 수준으로 환원되었다. 이상의 실험 결과로 볼 때 28 kDa fragmen에 대한 수용체의 감소 또는 변화가 근세포의 분화과정에서 일어나는 fibronectin 수준의 감소와 연관성이 있음을 알 수 있다. 한편, 배양액 내에 trypsin을 처리한 경우에는 처리하지 않은 경우에 비해서 28 kDa fragmen의 binding이 현저하게 감소되었고, gangliosides를 처리한 상태에서는 gangliosides의 농도에 정비례해서 28 kDa fragmen의 binding이 감소되었다. 이 밖에 gel overlay technique을 이용하여 28 kDa fragmen가 SDS-PAGE gel에서 분자량이 약 43kDa인 단백질 및 gangliosides와 binding하는 사실을 알 수 있었다. 이러한 실험 결과를 종합하여 볼 때, 근세포의 융합은 28 kDa fragmen에 대한 receptor의 감소와 관계가 있으며, 그 수용체는 gangliosides와 비슷한 당을 가지고 있는 당단백질일 것으로 추정된다.

• 한국동물학회지
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• 제36권3호
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• pp.342-346
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• 1993

배양 근원세포의 세포 골격 단백질의 양이 분화과정에 따라 점차 감소하는 것으로 나타났다. 이러한 세포 골격 단백질의 분해는, 세포막에 투과성을 나타내는 calpain의 저해제인 calpeptin의 처리에 의하여 억제될 수 있었다. 또한, calpeptin은 특정 세포 골격 단백질의 분해를 제한적으로 억제하였으나, 전체적인 세포 단백질의 양상에는 별 영향을 주지 않았다. 뿐만 아니라, calpeptin은 농도 의존적으로 근원세포의 융합을 억제하였다. 반면에, calpain의 강력한 저해제이지만 세포막에 투과성을 보이지 않는 E-64는 세포 골격 단백질의 분해와 막 융합에 아무런 효과를 나타내지 못하였다. 이러한 결과는 calpain이 근세포 분화 시기에 따라 세포 골격 단백질의 분해를 촉매하며, 이 분해 과정은 근원세포 융합에 필연적인 것으로 추측된다. 또한, 이 결과는 calpain 저해제들의 선별적 효과가 그들의 세포막에 대한 투과성에 기인함을 시사한다.

• 한국동물학회지
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• 제35권3호
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• pp.322-331
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• 1992

To investigate the svnthyesis of muscle proteins during differentiation of chicken myoblast, cvtosolic and membrane fractions were used for both sodium dodecvl sulfate polvcrylamide gel eBectrophoresis and two-dimensional gel electrophoresis. An extensive cell fusion was observed in 4 day culture. In the protein pattern of the cvtosolic fraction from SDS-PAGE. several protein bands including 250 kDa and 46 kDa showed remarkable changes during culture. the protein of 46 kDa was the most prominent one ann its optical density was the highest in 5 day culture (OD = 1.30). In the membrane fraction, band of 19.8 kDa showed the highest absorbance with 0.93 OD at 12 hr after initial plating and decreased gradually thereafter to 0.23 in 5 nay culture. From the results of two-dimensional gel electrophoresis of cytosolic fraction, the 46 kDa spot was observed as ko separated forms from culture 2 nary culture, and the sixte of this spot was the largest in 5 nay culture. In the pattern of membrane protein, the extensive appearance of newiv synthesized Proteins was found in a naut culture, but no Prominent spot was observed throughout culture. From the results of the present clay, we found that, during myoblast differentiation, the most prominent proteins were bands of 46 kDa and 19.8 kDa in cvtosolic and membrane fraction, respectively, and the appearance of new proteins was initiated at 48 hr after initial plating, and the 46 kDa protein was predominant in the cytoplasm of late culture in which extensive cell fusion was observed.

• 한국동물학회지
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• 제29권4호
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• pp.235-244
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• 1986

근세포가 분화하는 과정에 있어서 신경전달물질의 역할을 알아보기 위해서 배양중인 근원세포에 dopamine을 처리하고, 융합지수, creatine kinase 합성률 및 dopamine에 대한 차등감수성을 조사하였다. 배양후 34시간된 근원세포에 $3 \\times 10^{-5} M$의 dopamine을 처리하면 그후 전 시기에 걸쳐 융합지수가 크게 감소되며, 이와 더불어 creatine kinase의 합성률도 감소하는 사실로 미우러 이들 사이에 상관관계가 있음을 알 수 있었다. 또한 dopamine의 융합억제효과는 세포주기에 따라 감수성이 달라지는 차등감수성을 관찰할 수 있었는데, 이는 근세포막에 위치할 것으로 생각되는 dopamine receptor의 배치가 세포주기에 따라 달라지는 데 연유되는 것으로 추정되었다.

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1998년도 한국생물과학협회 학술발표대회
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• pp.225.2-225
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• 1998

No Abstract, See Full Text

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1997년도 한국생물과학협회 학술발표대회
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• pp.194.1-194
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• 1997

No Abstract, See Full Text

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제22권6호
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• pp.697-703
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• 2018

Myoblast fusion depends on mitochondrial integrity and intracellular $Ca^{2+}$ signaling regulated by various ion channels. In this study, we investigated the ionic currents associated with $[Ca^{2+}]_i$ regulation in normal and mitochondrial DNA-depleted(${\rho}0$) L6 myoblasts. The ${\rho}0$ myoblasts showed impaired myotube formation. The inwardly rectifying $K^+$ current ($I_{Kir}$) was largely decreased with reduced expression of KIR2.1, whereas the voltage-operated $Ca^{2+}$ channel and $Ca^{2+}$-activated $K^+$ channel currents were intact. Sustained inhibition of mitochondrial electron transport by antimycin A treatment (24 h) also decreased the $I_{Kir}$. The ${\rho}0$ myoblasts showed depolarized resting membrane potential and higher basal $[Ca^{2+}]_i$. Our results demonstrated the specific downregulation of $I_{Kir}$ by dysfunctional mitochondria. The resultant depolarization and altered $Ca^{2+}$ signaling might be associated with impaired myoblast fusion in ${\rho}0$ myoblasts.