• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제16권5호
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• pp.2043-2049
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• 2015

Background: Serum Golgi protein 73 (GP73) as a novel and potential marker for diagnosing hepatocellular carcinoma (HCC) have been found to be elevated in HCC patients and associated with clinical variables representing tumor growth and invasiveness. The aim of this study was to prepare a pair of monoclonal antibodys (mAbs) against GP73 and develop a newly designed double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (s-ELISA), which would be used in the detection of serum GP73 (sGP73) as well as in the diagnosis of HCC. Materials and Methods: Produced by prokaryotic expression, the purified recombinant GP73 (rGP73), produced by prokaryotic expression, was used to immunize the Balb/c mice. Two hybridoma cell lines against GP73 were obtained by fusing mouse Sp2/0 myeloma cells with spleen cells from the immunized mice. The titers of anti-GP73 mAb reached 1:243,000. Western blotting analysis and Immunohistochemistry staining revealed that anti-GP73 mAb could recognize GP73 protein. The double-antibody s-ELISA was successfully established and validated by 119 HCC and 103 normal serum samples. Results: showed that the detection limit of this method could reach 1.56 ng/ml, and sGP73 levels in HCC group (mean=190.6 ng/ml) were much higher than those of in healthy controls (mean=70.92 ng/ml). Conclusions: Results of our study not only showed that sGP73 levels of HCC patients were significantly higher than those of healthy controls, but also indicated that the laboratory homemade anti-GP73 mAbs could be the optimal tool used in evaluating sGP73 levels, which would provide a solid foundation for subsequent clinical applications.

• ALGAE
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• 제29권4호
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• pp.343-353
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• 2014

Despite the extensive literature on marine algae over the past few decades, a paucity of published research and studies exists on red algae. The purpose of this study was to evaluate the potential therapeutic properties of the ethanol extract of the red alga Callophyllis japonica against lipopolysaccharide (LPS)-stimulated macrophage inflammation. The C. japonica extract (CJE) significantly inhibited the nitric oxide (NO) production and the induced dose-dependent reduction of the protein and mRNA levels of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2. Additionally, the CJE reduced the mRNA levels of inflammatory cytokines, including tumor necrosis factor-${\alpha}$, interleukin (IL)-$1{\beta}$, and IL-6. We investigated the mechanism by which the CJE inhibits NO by examining the level of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) activation, which is an inflammation-induced signaling pathway in macrophages. The CJE significantly suppressed the LPS-induced phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase, extracellular signal-regulated kinase and p38 MAPK. Taken together, the results of this study demonstrate that the CJE inhibits LPS-induced inflammation by blocking the MAPK pathway in macrophages.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제30권4호
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• pp.289-298
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• 1992

Acanthnmoeba sp. YM-4의 영양형은 사상의 침상위족을 내어 전형적인 각canthamoeba 속의 특징이 관찰되었으며, 포낭(씨스트)은 외벽이 등근혐이었고 내벽이 단순한 구형이거나 다소 불규칙한 2개의 세포벽을 갖고 있었다. SDS-PAGE 결과, Acanthamoeha sp. Yhf-4는 약 16개의 주요 단백질 분획이 관찰되었는데, 2차원 전기영동 결과와 함께 Acanthamoeba sp. YM-4의 단백질 분획은 A. culbertsoni와 거의 같은 양상이 관찰되었다. Acanthamoeba sp. YM-4로 면역시킨 마우스의 비장세포와 myeloma 세포를 융합한 결과, 항체를 분비하는 17개 clone을 얻을 수 있었다. 생성된 단세포를 항체 중 isotyping을 실시하였는데 실험에 사용된 McAY 6, McAY 7, McAY 8, McAY 13, McAY 16 단세포군은 IgGl 항체를, McAY 10, McAY 11 단세포군은 19M 항체를 분비하였다. 생성된 단세포군 항체는 대부분이 아메바의 세포막에 있는 항원과 반응하였으며, EITB 실험결과, McAY 7 단세포군 항체는 43 kD에서 반응대가 관찰되었고, McAY 10 단세포군 항체는 55 kD과 105 kD에서 반응대가 관찰되었다. ELISA 방법을 이용한 단세포를 항체들과 여러 아메바 간의 교차반응실험 결과, McAY 7 단세포군 항체는 Acanthamoeba sp. YM-4에만 반응하였고, McAY 6과 McAY 10은 A. culbertsoni와도 반응하였다. 또한 McAY 11은 모든 아매바와 교차반응을 보였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제33권2호
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• pp.107-116
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• 1995

국내 마우스에서 분리된 작은와포자충(Cwptospoyidinpown)을 마우스에서 증식시킨 다음 오오시스트만을 순수 분리하여 BAIB/c 마우스에 면역시켰다. 면역된 마우스의 비장에서 림프구를 분리하여 PEG 1500을 융합촉진제로 사용하여 Sp2/0 myeloma cell과 세포융합을 실시하였으며, 융합된 세포중 작은와포자충에 특이항체를 생산하는 hybridomacell을 선발하였다 한계희석법으로 제작된 2주의 단세포군항체는 IgG2b class(lE7.2)와 IgM class(C6)에 속했으며. SDS-PAGE와 Westernblotting한 결과 (IE7.2)는 원충의 단백항원중 36 kDa과 반응하였고, C6는 67 kDa 및 70 kDa과 반응하였다 생산된 단세포군항체를 간접 형광항체법으로 작은와포자충과 반응시킨 결과 오오시스트 외막체 특이적으로 반응하였던 반면, Tomplasma gondii의 tachyzoite, Eimeria zuernii E. bouis, E. conodensis의 오오시스트와는 반응을 나타내지 않았다. 단세포군항체 C6을 이용한 간접 형광항체법은 분변의 이물들의 데조염색을 위해 Inns blue를 사용하였으며, 관찰소견으로는 $3-5{\mu\textrm{m}}$의 등근 오오시스트가 9.l은 형광을 띄고 있었고 그외의 주변이물들은 대조염색에 의하여 검붉게 염색되었다 또한 그의 진단율은 현재 일반적으로 사용되고 있는 수입진단킷트(Merifluor, Meridian diagnostic Ins.)와 거의 일치하고 있었다. 이상의 결과를 종합해보면 이번에 생산된 단세포군항체 들은 작은와포자충에 특이적으로 반응하고 있었으며, 이를 이용한 형광항체 진단법은 작은와포자충을 진단하는데 유용하게 사용될 수 있을 것으로 판단된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제35권1호
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• pp.55-62
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• 1997

톡소포자충(ToxopLasmn gondii)은 다양한 항원을 가지고 있으며, 이들 항원의 분석은 세 포매개성 면역반응 및 톡소포자충증의 면역학적 진단방법의 연구에 매우 중요하다 본 연구는 톡소포자충의 여러 단백질중 대부분의 충주(strain)에 존재하는 분자량 30 kDa의 단백질을 단클론 항체를 이용하여 분리한 후. 30 kDa 항원의 면역학적 특성을 초음파 추출 조항원과 비교 평가하였다. 톡소포자충의 세포막 항원으로 면역한 마우스 비장세포와 마우스 Sp2/0-Agl4 골수종세포를 융합하여 8개의 단클론 항체를 Western blot으로 확인하였다 이들 단클론 항체는 높은 특이성을 보였으며, $IgG_{2b}가{\;}5개,{\;}IgG^{1}이{\;}2개,{\;}IgG_{2a}$가 1개였다. 간접형광항체법으로 충체내 위치를 관찰한 결과. 30 kDa 항원은 tachyzoite의 표면 세포막에 주로 분포하였다. 단클론 항체와 CNBr-activated Sepharose 4B를 coupling하여 만든 immunoafrnity chromatography를 이용 하여 30 kDa 항원을 분리하였다. 분리한 30 kDa 항원으로 자극시킨 마우스 복강대식세포의 $NO_2^{-}$ 생산량은 초음파 추출 조항원 사용군에 비해 유의하게 증가하였으나 대식세포의 탐식능은 유의한 차이가 없었다. 또한 ELISA로 톡소포자충증을 진단시, 톡소포자충 30 kDa 항원 사용군은 조항원 사용군에 비해 민감도의 변화는 없었으나 특이성은 증가하였다 이상으로 보아 톡소포자충 30 kDa 항원은 감염 방어 면역 효과가 있었으며 진단에 이용시 특이성을 더 높일 수 있었다.